【摘要】： 藥物輸液性靜脈炎是臨床靜脈給藥治療常見的并發(fā)癥之一,其發(fā)病率在接受靜脈藥物治療的患者中高達(dá)25%以上。這種疾病使患者遭受額外的痛苦和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。該藥源性疾病輕則影響患者用藥依從性和生活質(zhì)量,有時(shí)甚至使其被迫放棄治療;重則發(fā)展形成血栓,可能成為一些常見致死并發(fā)癥的隱患。由于藥物輸液性靜脈炎發(fā)病機(jī)制尚未闡明,臨床上長(zhǎng)期缺乏對(duì)其特異有效的防治措施。 長(zhǎng)春瑞濱(vinorelbine,VIN,諾維本)是上世紀(jì)90年代新上市的植物類抗腫瘤藥物,至今仍是NCCN指南(美國(guó)國(guó)家綜合癌癥網(wǎng)Practice Guideline inOncology—v.1.2007)推薦的乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌等常見惡性腫瘤的一線化療藥物,并被廣泛用于卵巢癌、淋巴瘤等其他惡性腫瘤,但其導(dǎo)致的輸液性靜脈炎,發(fā)生率高(28%～45%)、且常常遷延不愈至今仍未能有效解決,使許多患者望而生畏,嚴(yán)重限制了該化療藥物抗腫瘤效果的充分發(fā)揮,使其成為臨床反應(yīng)強(qiáng)烈的化療性靜脈炎代表性藥物。 現(xiàn)有針對(duì)藥物輸液性靜脈炎的研究多為臨床觀察或誘發(fā)因素分析,缺乏系統(tǒng)性機(jī)制研究和針對(duì)性的基礎(chǔ)研究;國(guó)外僅有的少數(shù)基礎(chǔ)研究也僅限抗生素類藥物,未涉及抗腫瘤化療藥物;且僅為細(xì)胞刺激實(shí)驗(yàn),未涉及干預(yù)藥物方面的研究;也缺乏相應(yīng)的動(dòng)物研究模型。國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道H_2受體阻斷劑西咪替丁對(duì)長(zhǎng)春瑞濱所致的輸液性靜脈炎有明顯的抑制作用,但是這種作用機(jī)制并不明確。西咪替丁是經(jīng)典的H_2受體拮抗劑,但是近年來(lái)被發(fā)現(xiàn)具有許多不同于其他H_2受體拮抗劑的新作用。其中包括通過(guò)下調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子E-selectin(CD62E)表達(dá),抑制多種惡性腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和提高患者生存率的作用。在對(duì)其作用機(jī)制的研究中,日本學(xué)者通過(guò)細(xì)胞、動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)及臨床研究均證實(shí):西咪替丁抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用可能是通過(guò)下調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞E-selectin表達(dá),阻止腫瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞黏附,從而抑制腫瘤血路轉(zhuǎn)移而實(shí)現(xiàn)的。Natori T等發(fā)現(xiàn),西咪替丁還能夠顯著減弱內(nèi)皮細(xì)胞形成血管狀結(jié)構(gòu)的能力,而E-selectin及其介導(dǎo)的細(xì)胞黏附在血管生成過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。西咪替丁能阻止長(zhǎng)春瑞濱所致靜脈炎與其通過(guò)E-selectin發(fā)揮抗腫瘤作用是否存在共同的機(jī)制? 基于以上情況,本文首先以VIN藥物建立小鼠輸液性靜脈炎的動(dòng)物模型,考察各種因素對(duì)靜脈炎的影響,并初步考察西咪替丁的干預(yù)效果;應(yīng)用E-selectin基因敲除小鼠初步證實(shí)該類靜脈炎的發(fā)生過(guò)程與E-selectin表達(dá)存在相關(guān)性;然后采用細(xì)胞免疫組化、ELISA法和流式細(xì)胞術(shù)分別定性和定量考察長(zhǎng)春瑞濱、西咪替丁及其他H_2受體阻斷劑藥物對(duì)E-selectin表達(dá)的影響。 本研究分為三部分。 第一部分建立長(zhǎng)春瑞濱致輸液性靜脈炎小鼠模型 目的:建立化療藥物致輸液性靜脈炎小鼠模型。方法:以C57小鼠為實(shí)驗(yàn)研究動(dòng)物,通過(guò)考察給藥速度、給藥劑量和給藥濃度等影響因素來(lái)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,模擬臨床藥物治療中長(zhǎng)春瑞濱致輸液性靜脈炎的過(guò)程。選用小鼠尾靜脈推注藥物,使用自制裝置。各組動(dòng)物給藥后每相隔24小時(shí)拍照,觀察靜脈炎發(fā)生狀況,并固定一位置每天測(cè)量鼠尾腫脹程度,比較各組差別。注藥后7天用頸椎脫臼法處死動(dòng)物,并取穿刺點(diǎn)附近鼠尾組織,迅速置于10%福爾馬林溶液中固定4小時(shí)以上,以20%EDTA進(jìn)行脫鈣處理1周后,制作成石蠟切片、H-E染色和進(jìn)一步分析。根據(jù)記錄每天鼠尾直徑大小,統(tǒng)計(jì)各組差別;根據(jù)病理切片鏡下觀察有關(guān)內(nèi)皮細(xì)胞脫落、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、血栓形成以及水腫情況,考察其輸液性靜脈炎相關(guān)性病理改變。結(jié)果:VIN給藥后可以造成給藥血管局部發(fā)生內(nèi)皮細(xì)胞脫落、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、組織水腫甚至血栓形成,尾部腫脹度高達(dá)30%。結(jié)論:本法建立的輸液性靜脈炎小鼠模型符合臨床輸液性靜脈炎的病理學(xué)特征,可用于實(shí)驗(yàn)研究。 第二部分三種H_2受體阻斷劑藥物對(duì)輸液性靜脈炎的干預(yù)情況 目的:研究三種H_2受體阻斷劑藥物對(duì)長(zhǎng)春瑞濱所致的輸液性靜脈炎的干預(yù)作用。方法:C57小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、西咪替丁干預(yù)組、法莫替丁干預(yù)組和雷尼替丁干預(yù)組,采用重酒石酸長(zhǎng)春瑞濱注射液尾靜脈注射給藥誘導(dǎo)靜脈炎。在模型制備時(shí)預(yù)先靜脈注射干預(yù)藥物。給藥后每天觀察靜脈炎發(fā)生狀況,測(cè)量鼠尾腫脹程度,及時(shí)觀測(cè)組織腫脹及消退情況。結(jié)果:西咪替丁可以明顯地預(yù)防長(zhǎng)春瑞濱所致靜脈炎CIM組相對(duì)于VIN組的差異,在6個(gè)等級(jí)均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而法莫替丁和雷尼替丁干預(yù)效果則不佳。結(jié)論:西咪替丁對(duì)長(zhǎng)春瑞濱所致的靜脈炎的抑制作用可能并不是通過(guò)作為H_2受體拮抗劑來(lái)發(fā)揮干預(yù)作用的。 第三部分E-selectin在西咪替丁干預(yù)輸液性靜脈炎過(guò)程中的作用 目的:探討西咪替丁對(duì)E-selectin的調(diào)控是否是對(duì)此類輸液性靜脈炎干預(yù)的作用機(jī)制之一。方法:采用EA.hy926人血管內(nèi)皮細(xì)胞株進(jìn)行傳代培養(yǎng),采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法觀察測(cè)定細(xì)胞E-selectin的表達(dá)變化;采用流式細(xì)胞術(shù)和ELISA法定量考察了EA.hy926細(xì)胞受長(zhǎng)春瑞濱、西咪替丁及其他干預(yù)藥物刺激后E-selectin的含量變化:并采用ELISA法初步分析此過(guò)程的信號(hào)通路。此外還引進(jìn)E-selectin基因敲除小鼠探討E-selectin在此干預(yù)過(guò)程中的作用。結(jié)果:免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示,經(jīng)長(zhǎng)春瑞濱刺激后,在血管內(nèi)皮細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)中均可見棕黃色顆粒沉淀,E-selectin在血管內(nèi)皮細(xì)胞上有陽(yáng)性表達(dá);采用流式細(xì)胞術(shù)考察EA.hy926細(xì)胞受長(zhǎng)春瑞濱刺激后細(xì)胞膜上E-selectin的含量上調(diào)169.76%(P0.05),而西咪替丁則具有抑制其表達(dá)的作用,含量?jī)H上調(diào)7.65%;采用ELISA法測(cè)定EA.hy926細(xì)胞受不同劑量長(zhǎng)春瑞濱、不同作用時(shí)間刺激后細(xì)胞培養(yǎng)液中可溶性E-selectin含量上調(diào),西咪替丁可抑制上述E-selectin表達(dá);基因敲除動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,西咪替丁干預(yù)后靜脈炎無(wú)減輕趨勢(shì)。結(jié)論:E-selectin參與了長(zhǎng)春瑞濱致輸液性靜脈炎的病理過(guò)程,西咪替丁對(duì)該過(guò)程存在抑制作用。 通過(guò)本課題的研究,在動(dòng)物體內(nèi)初步模擬了長(zhǎng)春瑞濱致輸液性靜脈炎的病理過(guò)程,并在體外內(nèi)皮細(xì)胞EA.hy926考察了E-selectin蛋白表達(dá)高低與長(zhǎng)春瑞濱刺激及各種藥物干預(yù)作用之間的相關(guān)性,對(duì)藥物輸液性靜脈炎及其影響因素和發(fā)生機(jī)制進(jìn)行了初步研究,為闡明化療藥物致輸液性靜脈炎的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制打下基礎(chǔ),為長(zhǎng)春堿類藥物所致輸液性疾病的預(yù)防和治療提供了可能的靶點(diǎn)。本研究對(duì)深入研究藥源性靜脈炎發(fā)病機(jī)制,探索相關(guān)治療藥物及其作用機(jī)制具有重要意義。
【圖文】：

第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文的給藥裝置輸注VIN，建立輸液性靜脈炎模型(圖1一1)。愉液針頭杉 杉 杉杉杉召召召 召召召夕 夕 夕夕夕 ]]]]]]]]]廠 廠廠廠廠 廠以 以以以以 以門門門 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一次性注射器微量注射恒速泵三通連接管A注射速度控制器三通連接管B三通連接管C圖1一1靜脈炎動(dòng)物模型的給藥實(shí)驗(yàn)裝置示意圖Figl一 1ThesehematiediagramofPhlebitisoftheadministrationofanimalmodelexPerimental口給藥劑量篩選按照完全隨機(jī)分組方法，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表將48只C57小鼠分為6組。實(shí)驗(yàn)分為:空白組(NS)8只;VINI組 (18.75mg/kg)8只;V州2組 (28.125mg/kg)8只;VIN3組 (37.5mg/kg)8只;V州4組(56.25mg/kg)8只;VINS組 (75mg/kg)8只。給藥濃度設(shè)定為10mg/ml(原液)，給藥速度設(shè)定為0.75林l/s。注射前觀察小鼠，要求無(wú)炎癥，無(wú)皮膚破損。實(shí)驗(yàn)前地西洋和氯胺酮注射液(1:l)腹腔注射麻醉小鼠，75%酒精擦拭尾部，然后使用自制給藥裝置，，于小鼠右側(cè)尾靜脈中、遠(yuǎn)三分之一處向進(jìn)心端穿刺注射vIN(或NS)。穿刺盡量一次成功，避免針頭在組織中探找靜脈，確保藥物在靜脈中無(wú)滲漏后

1.給藥劑量觀察不同給藥劑量對(duì)輸液性靜脈炎的影響發(fā)現(xiàn):推注化療藥物viN后動(dòng)物血管立即收縮、變白，注射點(diǎn)局部靜脈及周圍組織變硬，伴動(dòng)物不安、掙扎等表現(xiàn);空白組無(wú)明顯變化(見圖1一ZA)。注射24h后觀察，VINI、VINZ較低濃度組動(dòng)物注射局部皮膚顏色多數(shù)轉(zhuǎn)為正常，硬結(jié)消失;V創(chuàng)3組部分動(dòng)物注藥部位發(fā)紅，尾部腫脹;VIN3、VIN4及VINS組部分實(shí)驗(yàn)小鼠沿靜脈走向出現(xiàn)條索狀改變。24一72h內(nèi)各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物靜脈炎呈不同程度的加重趨勢(shì)，并不斷有新發(fā)靜脈炎動(dòng)物出現(xiàn)。VIN4和VINS組部分小鼠活動(dòng)度下降，食欲明顯減退，小鼠尾部皮膚此期出現(xiàn)沿注射靜脈走行方向的潰瘍(見圖1一ZB)，且陸續(xù)有動(dòng)物死亡。72h后各實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物靜脈炎癥情況穩(wěn)定，無(wú)動(dòng)物死亡。vINI
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R-332;R96

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2546121