發(fā)布時(shí)間：2019-09-29 21:18

【摘要】： 目的 根據(jù)細(xì)B胞的發(fā)育來源,可將B淋巴細(xì)胞分為兩個(gè)亞群,B1細(xì)胞和B2細(xì)胞。根據(jù)能否表達(dá)CD5分子,B1細(xì)胞又分為B1-a細(xì)胞(CD5+)和B1-b細(xì)胞(CD5-)。B1細(xì)胞是由早期的前體細(xì)胞發(fā)育而來,在胚胎期及出生后分布于脾臟,成年后主要定位于腹膜、胸膜大網(wǎng)膜及扁桃體等處,在外周血和淋巴器官中較少見,幾乎不依賴于骨髓來源,是一類具有重要功能,可以自我更新的長壽細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn),B1細(xì)胞與B2細(xì)胞在起源、分化、表面標(biāo)志及其基因表達(dá)等方面存在很大差異,尤其是二者在起源和具體發(fā)育分化過程中的關(guān)系存在很大爭議。目前的研究主要有以下觀點(diǎn)：①B細(xì)胞是在祖B細(xì)胞階段就已經(jīng)分為不同的譜系,然而該研究中的祖B細(xì)胞分別來源于胚胎肝臟和成年骨髓,而二者在時(shí)間和空間上已經(jīng)存在了差異,也就是說B細(xì)胞的發(fā)育過程中可能于所處的微環(huán)境有一定的關(guān)系；②B細(xì)胞在發(fā)育后期由于某種信號(hào)介導(dǎo)而導(dǎo)致向不同的方向分化,但在祖細(xì)胞階段還是屬于同一個(gè)譜系。那么給予B1細(xì)胞一定的信號(hào)或者提供相應(yīng)B2細(xì)胞發(fā)育所需要的干預(yù)因素,在這種情況下B1細(xì)胞能否向B2細(xì)胞分化需要我們近一步探討；③在一定的條件下B1細(xì)胞可以由成熟的B2細(xì)胞發(fā)育而來。然而B1細(xì)胞相對于B2細(xì)胞出現(xiàn)較早,有研究表明產(chǎn)生于妊娠8.5～9.0天的主動(dòng)脈旁的臟壁層(PAS)的B細(xì)胞的表型為CD5+CD45RlowsIgMhi,這一表型即所謂的B1-a細(xì)胞,而不是B1-b細(xì)胞或者B2細(xì)胞。因此,我們認(rèn)為B細(xì)胞發(fā)育的第一波峰為B1-a細(xì)胞。依照物種進(jìn)化的觀點(diǎn),如果B2細(xì)胞分化為B1細(xì)胞屬于返祖的個(gè)別現(xiàn)象。那么,B1細(xì)胞有沒有可能在一定的條件下分化為B2細(xì)胞有待于我們進(jìn)一步研究。 本實(shí)驗(yàn)通過建立骨髓體外微環(huán)境,對采用流式細(xì)胞儀分選純化的B1-a細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng),在培養(yǎng)第2至6天進(jìn)行流式檢測。從而觀察B1-a細(xì)胞能否分化為B2細(xì)胞。 方法 各取15只C57BL／1d新生鼠和2d新生鼠,分別從脾臟中提取淋巴細(xì)胞,將提取的淋巴細(xì)胞采用抗小鼠IgM-(APC)和抗CD5-(PE-CY5)的熒光抗體標(biāo)記,用流式細(xì)胞儀分選出B-1a細(xì)胞。把分選好的B-1a細(xì)胞標(biāo)記CFSE,置于體外骨髓微環(huán)境中培養(yǎng),將培養(yǎng)第2天至第6天的細(xì)胞再次標(biāo)記抗IgD-(PE)的熒光抗體,并通過FACS檢測,觀察B1-a細(xì)胞能否分化為B2細(xì)胞。 結(jié)果 新生鼠／1d較新生鼠／2d,B1-a細(xì)胞分化為B2細(xì)胞的相對分化率較高,其分化率分別為52.93±1.93%(1d)和26.98±2.94%(2d),有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。 討論 B1細(xì)胞在胚胎發(fā)育期達(dá)到高峰,成年后明顯下降。因此,選擇新生鼠的脾臟,提取淋巴細(xì)胞,再通過流式細(xì)胞儀分選純化B1-a細(xì)胞,進(jìn)行CFSE標(biāo)記后轉(zhuǎn)入體外骨髓微環(huán)境進(jìn)行培養(yǎng),對培養(yǎng)第2天至第6天的細(xì)胞再次標(biāo)記抗IgD-(PE)的熒光抗體,并通過FACS檢測,結(jié)果顯示標(biāo)記CFSE的B1-a細(xì)胞在第2天大部分分化為B2細(xì)胞。通過體外培養(yǎng)B1-a細(xì)胞可以分化為B2細(xì)胞,這可能是B細(xì)胞亞群分化的一個(gè)途徑,B1-a細(xì)胞可能為B2細(xì)胞分化的過渡階段。在此基礎(chǔ)之上,應(yīng)當(dāng)繼續(xù)完善有關(guān)體外或者體內(nèi)實(shí)驗(yàn)體系,以便清楚準(zhǔn)確地闡明B細(xì)胞的分化途徑。 結(jié)論 1、通過體外培養(yǎng)新生鼠脾臟B1-a細(xì)胞可以分化為B2細(xì)胞,二者在分化和發(fā)育上有著很大的相關(guān)性。 2、新生鼠／1d較新生鼠／2d,B1-a細(xì)胞分化為B2細(xì)胞的分化率明顯升高,有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。
【圖文】：

檢測時(shí)間d圖3，系列1，2分別代表新生鼠/ld和新生鼠/2d，CFSE(+)I叨(+)細(xì)胞百分比有下降趨勢。Bl一轉(zhuǎn)化為B一2細(xì)胞的相對比率(%)八歲，

本文編號(hào)：2544140