【摘要】： 最近研究發(fā)現(xiàn)，先天性免疫反應(yīng)的激活是狂犬病病毒（Rabies Virus,RV）減弱的機(jī)制之一。誘導(dǎo)先天性免疫的因素包括炎性趨化因子（RANTES, MIP-1α, IP-10等）和細(xì)胞因子（IL-6, IL-1β,和TNF-α），干擾素和干擾素相關(guān)基因（IFN-α, STAT1, Mx-1），Toll樣受體(TLRs1-3)。這些先天性免疫分子具有誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞活化的能力而且能夠引發(fā)很強(qiáng)的獲得性免疫和對(duì)機(jī)體提供很好的保護(hù)能力。因此，我們把免疫刺激分子整合到病毒中用來增強(qiáng)免疫效率。樹突狀細(xì)胞的活化是非常重要的，特別是在加強(qiáng)針對(duì)狂犬病病毒的保護(hù)性免疫反應(yīng)方面。我們利用樹突狀細(xì)胞活化分子作為狂犬病病毒疫苗的遺傳佐劑，試圖影響先天性免疫反應(yīng)，誘導(dǎo)出更高的特異性的中和抗體，包括從淋巴結(jié)中成熟的和遷移的樹突狀細(xì)胞聚集到炎癥部位。本研究中，證明樹突狀細(xì)胞活化分子能夠誘導(dǎo)出針對(duì)RV的保護(hù)性免疫。粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（granulocyte-macrophagecolony-stimulating factor GM-CSF）,巨噬細(xì)胞來源的趨化因子CCL22和巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α（Macrophage Inflammatory Protein-1alpha MIP-1α）分別被克隆到RV基因組全長(zhǎng)CDNA中，并且每一個(gè)重組的RV分子的抗原性和安全性都在小鼠模型上得到了確認(rèn)。所有的重組的RV分子對(duì)成年鼠無致病性，即使用最高劑量攻擊成年鼠也不產(chǎn)生臨床癥狀。對(duì)重組狂犬病病毒感染小鼠3天和6天的時(shí)候利用RT-PCR技術(shù)，，檢測(cè)病毒的總RNA和小鼠腿部肌肉中所含的插入基因，在感染開始之后，RV和重組狂犬病病毒基因組幾乎相同，然而插入激活因子的病毒，相應(yīng)的在免疫后激活因子含量明顯升高。通過流式細(xì)胞術(shù)對(duì)進(jìn)入淋巴結(jié)和血液雙陽性的B細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞（Dendritic Cell DC）細(xì)胞的數(shù)量和活化狀態(tài)進(jìn)行量化比較。重組GM-CSF的RV rLBNSE-GM-CSF,重組MDC的RV rLBNSE-MDC和重組MIP-1α的RV rLBNSE-MIP-1α實(shí)驗(yàn)組與無外源基因插入的重組RV rLBNSE組感染比較，在淋巴結(jié)和血液中產(chǎn)生了更多的B細(xì)胞和DC細(xì)胞。說明我們插入的趨化因子和細(xì)胞因子可以吸引更多的B細(xì)胞到神經(jīng)末梢免疫系統(tǒng)，可以對(duì)成熟的DC起到激發(fā)和活化的作用。用RV的強(qiáng)毒CVS-24攻擊免疫的小鼠，針對(duì)重組RV分子的一個(gè)單一的免疫反應(yīng)能夠產(chǎn)生GM-CSF或者CCL22的保護(hù)率是100%，而針對(duì)重組RV分子產(chǎn)生MIP-1α的保護(hù)率是80%，總結(jié)我們的結(jié)果表明，重組的RV分子表達(dá)樹突狀細(xì)胞活化分子能夠加強(qiáng)免疫保護(hù)反應(yīng)并且具有發(fā)展成為下一代RV疫苗的潛力。
【圖文】：

體外檢測(cè)外源基因的表達(dá)ri}.3:6Canfirmatioraofinsertgeneexpressioninvitro
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R392

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2543386