【摘要】： 目的：觀察銅綠假單胞菌Quorum sensing (QS)系統(tǒng)信號(hào)分子3OC12-HSL對(duì)人腸道上皮細(xì)胞系Caco-2活力及細(xì)胞凋亡的影響作用及其深入機(jī)制。構(gòu)建銅綠假單胞菌�；妇幋a基因pvdQ的真核表達(dá)載體,并檢測(cè)其在腸道上皮細(xì)胞中的表達(dá)及其表達(dá)對(duì)3OC12-HSL分子的抵御作用。 方法：利用不同濃度3OC12-HSL (100-300uM)分別干擾Caco-2細(xì)胞4小時(shí)后,采用MTT法檢測(cè)Caco-2細(xì)胞干擾前后細(xì)胞活性的變化及利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡變化,并使用western blot方法檢測(cè)Caco-2細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白p38/MAPK及NFκB表達(dá)變化。構(gòu)建pvdQ基因真核表達(dá)載體并使其在Caco-2細(xì)胞中表達(dá)。用3OC12-HSL分子干擾表達(dá)pvdQ基因的Caco-2細(xì)胞,利用3OC12-HSL分子感應(yīng)菌株E.coli MG4檢測(cè)干擾前后Caco-2細(xì)胞上清液中3OC12-HSL分子活性變化,利用質(zhì)譜分析儀檢測(cè)干擾前后Caco-2細(xì)胞上清液中3OC12-HSL分子濃度變化,同時(shí)利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)3OC12-HSL分子對(duì)表達(dá)pvdQ基因Caco-2細(xì)胞凋亡的影響作用。 結(jié)果：MTT結(jié)果顯示,3OC12-HSL分子能抑制Caco-2細(xì)胞活性(P0.05),流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明,3OC12-HSL能促進(jìn)Caco-2細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞凋亡(P0.05),且呈劑量依賴性。同時(shí),western blot結(jié)果顯示,3OC12-HSL分子干擾細(xì)胞后,p-p38/MAPK及NFκB蛋白表達(dá)水平增加。pvdQ基因真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Caco-2細(xì)胞后,利用western blot方法檢測(cè)到(?)PvdQ在Caco-2細(xì)胞中表達(dá),感應(yīng)菌株E.coli MG4檢測(cè)結(jié)果表明,pvdQ基因在Caco-2細(xì)胞中表達(dá)能有效減弱Caco-2細(xì)胞上清液中3OC12-HSL活性。質(zhì)譜分析結(jié)果表明,pvdQ基因能降低Caco-2細(xì)胞上清中3OC12-HSL分子濃度,且呈時(shí)間依賴性(P0.05)。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明,pvdQ基因在Caco-2細(xì)胞中表達(dá)可抵御3OC12-HSL分子促進(jìn)Caco-2細(xì)胞凋亡的作用。 結(jié)論：銅綠假單胞菌QS系統(tǒng)信號(hào)分子3OC12-HSL能抑制腸上皮細(xì)胞Caco-2細(xì)胞活性,促進(jìn)細(xì)胞發(fā)生凋亡,其機(jī)制可能與3OC-12-HSL分子調(diào)控凋亡相關(guān)蛋白p38/MAPK及NFκB蛋白表達(dá)相關(guān)。成功構(gòu)建帶有銅綠假單胞菌pvdQ基因的真核表達(dá)質(zhì)粒pIRES2-EGFP-pvdQ,并轉(zhuǎn)染入人腸道上皮細(xì)胞Caco-2, pvdQ基因在Caco-2細(xì)胞中表達(dá)能協(xié)助Caco-2細(xì)胞降解其周圍的3OC12-HSL并抵御3OC12-HSL所引起的細(xì)胞凋亡作用。
【圖文】：

圖1.AHL介導(dǎo)的Qs系統(tǒng)調(diào)節(jié)模式圖Figure1.AHL一mediatedQS一dePendentregulationofmultiPletarget30C:2一HSL異代廠幾…丫人丫。H6C4一HSL圖2.銅綠假單胞菌Qs信號(hào)分子結(jié)構(gòu)圖Figure2.ChemiealstruetureofQSsignalmoleeules(30C12一HSroducedbyPaeruginosa

30C12一 HSL300pM組20.68士0.31%。不同濃度30C12一HSL(100pM，，200林M， 300pM)藥物組和對(duì)照組(DMSO組)之間差異有顯著性意義(P<0.OS)。并且30C12一HSL對(duì)Caco一2細(xì)胞活性抑制率和其濃度呈正比(圖3)。 22251一’一—--二刁 刁~~~20r一————~一-—一州目首司 司戀戀_}}口口 }}}、、，151一——一一--—~-—一一—~一一一翻.圈r一月月彗彗{.西‘.口 .1111鬢鬢‘井富干畜警葡 葡 DDDMSO100uM200uM300u從 從圖3不同濃度30C12一 HSL(100pM， 200pM，300pM)干擾Caco一2細(xì)胞4小時(shí)后對(duì)Caco一2細(xì)胞活性的抑制Fi鄉(xiāng)汀 e3Irlhibitionof30C12一HSL(10opM，200pM，300pM)toeytoactiveofCaco一2eells-佃~~~.尸一一一一--一一一l9
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R378

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 李洪濤;覃慧敏;王衛(wèi)華;李國(guó)軍;吳春明;宋建新;;穿心蓮內(nèi)酯對(duì)銅綠假單胞菌QS毒力因子的影響[J];中國(guó)中藥雜志;2006年12期

2 Epameinondas V Tsianos;Konstantinos Katsanos;;Do we really understand what the immunological disturbances in inflammatory bowel disease mean?[J];World Journal of Gastroenterology;2009年05期

本文編號(hào)：2537745