【摘要】： 目的：觀察銅綠假單胞菌Quorum sensing (QS)系統(tǒng)信號分子3OC12-HSL對人腸道上皮細胞系Caco-2活力及細胞凋亡的影響作用及其深入機制。構(gòu)建銅綠假單胞菌�；妇幋a基因pvdQ的真核表達載體,并檢測其在腸道上皮細胞中的表達及其表達對3OC12-HSL分子的抵御作用。 方法：利用不同濃度3OC12-HSL (100-300uM)分別干擾Caco-2細胞4小時后,采用MTT法檢測Caco-2細胞干擾前后細胞活性的變化及利用流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡變化,并使用western blot方法檢測Caco-2細胞中凋亡相關(guān)蛋白p38/MAPK及NFκB表達變化。構(gòu)建pvdQ基因真核表達載體并使其在Caco-2細胞中表達。用3OC12-HSL分子干擾表達pvdQ基因的Caco-2細胞,利用3OC12-HSL分子感應(yīng)菌株E.coli MG4檢測干擾前后Caco-2細胞上清液中3OC12-HSL分子活性變化,利用質(zhì)譜分析儀檢測干擾前后Caco-2細胞上清液中3OC12-HSL分子濃度變化,同時利用流式細胞術(shù)檢測3OC12-HSL分子對表達pvdQ基因Caco-2細胞凋亡的影響作用。 結(jié)果：MTT結(jié)果顯示,3OC12-HSL分子能抑制Caco-2細胞活性(P0.05),流式細胞術(shù)結(jié)果表明,3OC12-HSL能促進Caco-2細胞發(fā)生細胞凋亡(P0.05),且呈劑量依賴性。同時,western blot結(jié)果顯示,3OC12-HSL分子干擾細胞后,p-p38/MAPK及NFκB蛋白表達水平增加。pvdQ基因真核表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Caco-2細胞后,利用western blot方法檢測到(?)PvdQ在Caco-2細胞中表達,感應(yīng)菌株E.coli MG4檢測結(jié)果表明,pvdQ基因在Caco-2細胞中表達能有效減弱Caco-2細胞上清液中3OC12-HSL活性。質(zhì)譜分析結(jié)果表明,pvdQ基因能降低Caco-2細胞上清中3OC12-HSL分子濃度,且呈時間依賴性(P0.05)。流式細胞術(shù)結(jié)果表明,pvdQ基因在Caco-2細胞中表達可抵御3OC12-HSL分子促進Caco-2細胞凋亡的作用。 結(jié)論：銅綠假單胞菌QS系統(tǒng)信號分子3OC12-HSL能抑制腸上皮細胞Caco-2細胞活性,促進細胞發(fā)生凋亡,其機制可能與3OC-12-HSL分子調(diào)控凋亡相關(guān)蛋白p38/MAPK及NFκB蛋白表達相關(guān)。成功構(gòu)建帶有銅綠假單胞菌pvdQ基因的真核表達質(zhì)粒pIRES2-EGFP-pvdQ,并轉(zhuǎn)染入人腸道上皮細胞Caco-2, pvdQ基因在Caco-2細胞中表達能協(xié)助Caco-2細胞降解其周圍的3OC12-HSL并抵御3OC12-HSL所引起的細胞凋亡作用。
【圖文】：

圖1.AHL介導(dǎo)的Qs系統(tǒng)調(diào)節(jié)模式圖Figure1.AHL一mediatedQS一dePendentregulationofmultiPletarget30C:2一HSL異代廠幾…丫人丫。H6C4一HSL圖2.銅綠假單胞菌Qs信號分子結(jié)構(gòu)圖Figure2.ChemiealstruetureofQSsignalmoleeules(30C12一HSroducedbyPaeruginosa

30C12一 HSL300pM組20.68士0.31%。不同濃度30C12一HSL(100pM，，200林M， 300pM)藥物組和對照組(DMSO組)之間差異有顯著性意義(P<0.OS)。并且30C12一HSL對Caco一2細胞活性抑制率和其濃度呈正比(圖3)。 22251一’一—--二刁 刁~~~20r一————~一-—一州目首司 司戀戀_}}口口 }}}、、，151一——一一--—~-—一一—~一一一翻.圈r一月月彗彗{.西‘.口 .1111鬢鬢‘井富干畜警葡 葡 DDDMSO100uM200uM300u從 從圖3不同濃度30C12一 HSL(100pM， 200pM，300pM)干擾Caco一2細胞4小時后對Caco一2細胞活性的抑制Fi鄉(xiāng)汀 e3Irlhibitionof30C12一HSL(10opM，200pM，300pM)toeytoactiveofCaco一2eells-佃~~~.尸一一一一--一一一l9
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R378

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 李洪濤;覃慧敏;王衛(wèi)華;李國軍;吳春明;宋建新;;穿心蓮內(nèi)酯對銅綠假單胞菌QS毒力因子的影響[J];中國中藥雜志;2006年12期

2 Epameinondas V Tsianos;Konstantinos Katsanos;;Do we really understand what the immunological disturbances in inflammatory bowel disease mean?[J];World Journal of Gastroenterology;2009年05期

本文編號：2537745