發(fā)布時間：2019-09-17 09:43

【摘要】： 目的： 1.研究胰腺癌細胞株P(guān)anc02在γ干擾素(IFN-γ)作用下吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)表達及活性的變化以及1-甲基色氨酸(1-MT)對IDO活性的影響。 2.觀察在利用Panc02細胞株建立的胰腺癌荷瘤鼠中IDO的表達以及調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)數(shù)量和功能的變化。 3.觀察在樹突狀細胞(DC)疫苗對胰腺癌荷瘤鼠中IDO的表達以及Treg數(shù)量和功能的影響。 4.研究抑制IDO的活性后胰腺癌荷瘤鼠中Treg數(shù)量的變化以及對樹突狀細胞(DC)疫苗抗腫瘤作用的影響。 方法： 1.分別用不同濃度(0、10、20、50U／ml)的IFN-γ誘導刺激胰腺癌細胞株P(guān)anc02, Western Blot檢測各組Panc02中IDO蛋白表達水平的變化。高壓液相測定培養(yǎng)液中犬尿氨酸濃度評價IDO分子活性。 2.建立小鼠胰腺癌模型,Western Blot檢測荷瘤鼠腫瘤組織周圍引流淋巴結(jié)(TDLNs)中IDO蛋白表達水平相對于正常對照組的變化。利用流式細胞術(shù)檢測荷瘤鼠應用1-MT前后TDLNs及脾臟中CD4+CD25+T細胞占CD4+T比例；熒光定量PCR測量Foxp3在TDLNs及脾臟mRNA水平。 3.利用腫瘤細胞裂解物沖擊DC制備DC疫苗,并根據(jù)是否與1-MT聯(lián)合應用分組,觀測1-MT對免疫治療在小鼠胰腺癌模型中抗腫瘤作用的影響,并測定TDLNs中IDO表達水平,同時研究TDLNs及脾臟中CD4+CD25+T細胞占CD4+T比例以及Foxp3 mRNA水平的變化。 結(jié)果： 1. Panc02中的IDO蛋白的相對表達量隨著IFN-γ作用濃度的增大逐漸增高,同時活性增強,而1-MT可以有效抑制IDO的活性。 2.胰腺癌荷瘤鼠TDLNs中IDO蛋白表達水平高于正常對照組。差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。 3.荷瘤鼠TDLNs和脾臟中CD4+CD25+T細胞占CD4+T細胞的比例明顯高于正常對照鼠,同時Foxp3 mRNA表達水平顯著提高。 4.應用1-MT后,可以顯著降低荷瘤鼠TDLNs和脾臟中CD4+CD25+T細胞占CD4+T細胞的比例。 5.接受DC疫苗治療的胰腺癌荷瘤鼠TDLNs中IDO表達增高,同時TDLNs和脾臟中CD4+CD25+T細胞占CD4+T細胞的比例及Foxp3 mRNA表達水平顯著提高。 6.1-MT+與DC疫苗聯(lián)合應用組腫瘤生長顯著受到抑制,抗腫瘤作用顯著高于DC疫苗組及1-MT組。 結(jié)論： 1.胰腺癌細胞株P(guān)anc02本身表達IDO,在IFN-γ誘導下表達上調(diào)且活性增強,這可能是引起TDLNs及脾臟CD4+CD25+Treg細胞的數(shù)量增加的重要因素之一。 2.胰腺癌荷瘤鼠癌組織周圍引流淋巴結(jié)IDO表達明顯增高,且TDLNs及脾臟CD4+CD25+Treg細胞的數(shù)量增加,這可能是影響胰腺癌免疫治療的重要因素。 3.通過抑制IDO活性,1-MT可以有效抑制胰腺癌荷瘤鼠癌組織周圍引流淋巴結(jié)及脾臟CD4+CD25+Treg細胞的數(shù)量增加,從而增強DC疫苗抗腫瘤作用。
【圖文】：

細胞共培養(yǎng)24小時。PancOZ細胞組加入等量PBS。取培養(yǎng)液上清測定犬尿氨酸濃度每組樣本例數(shù)均為6例。3結(jié)果3.1IFN一Y誘導胰腺癌細胞株P(guān)anc02中IDo的表達增強IDO、p一actin特異性免疫印跡條帶的相對分子質(zhì)量分別為42KD和43KD。不濃度IF’N一丫誘導Panc02的IDO蛋白表達量如表1及圖1、2所示。經(jīng)過分析可知，組的IDO/p一actin值之間差別具有統(tǒng)計學意義(F=21.416，P<0.001)，可以認為四組ID蛋白的表達量存在差別，進一步采用LSD的方法進行兩兩比較，比較結(jié)果顯示，10U/ml組與20U/ml組差別無統(tǒng)計學意義(P=0.238)之外，其余各組間都存在差(P均小于0.05)。與空白對照組比較，IFN一Y作用后胰腺癌細胞株P(guān)anc02的IDO白表達量明顯增加，且隨著IFN一Y作用濃度的增大其IDO的表達量逐漸增加，，50U/ml組為著。

A:OUIml組B:10Ulml組C:20U/ml組D:50U/ml組
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R392

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