【摘要】： 目的： 1.研究胰腺癌細(xì)胞株P(guān)anc02在γ干擾素(IFN-γ)作用下吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)表達(dá)及活性的變化以及1-甲基色氨酸(1-MT)對(duì)IDO活性的影響。 2.觀察在利用Panc02細(xì)胞株建立的胰腺癌荷瘤鼠中IDO的表達(dá)以及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)數(shù)量和功能的變化。 3.觀察在樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)疫苗對(duì)胰腺癌荷瘤鼠中IDO的表達(dá)以及Treg數(shù)量和功能的影響。 4.研究抑制IDO的活性后胰腺癌荷瘤鼠中Treg數(shù)量的變化以及對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)疫苗抗腫瘤作用的影響。 方法： 1.分別用不同濃度(0、10、20、50U／ml)的IFN-γ誘導(dǎo)刺激胰腺癌細(xì)胞株P(guān)anc02, Western Blot檢測(cè)各組Panc02中IDO蛋白表達(dá)水平的變化。高壓液相測(cè)定培養(yǎng)液中犬尿氨酸濃度評(píng)價(jià)IDO分子活性。 2.建立小鼠胰腺癌模型,Western Blot檢測(cè)荷瘤鼠腫瘤組織周圍引流淋巴結(jié)(TDLNs)中IDO蛋白表達(dá)水平相對(duì)于正常對(duì)照組的變化。利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)荷瘤鼠應(yīng)用1-MT前后TDLNs及脾臟中CD4+CD25+T細(xì)胞占CD4+T比例；熒光定量PCR測(cè)量Foxp3在TDLNs及脾臟mRNA水平。 3.利用腫瘤細(xì)胞裂解物沖擊DC制備DC疫苗,并根據(jù)是否與1-MT聯(lián)合應(yīng)用分組,觀測(cè)1-MT對(duì)免疫治療在小鼠胰腺癌模型中抗腫瘤作用的影響,并測(cè)定TDLNs中IDO表達(dá)水平,同時(shí)研究TDLNs及脾臟中CD4+CD25+T細(xì)胞占CD4+T比例以及Foxp3 mRNA水平的變化。 結(jié)果： 1. Panc02中的IDO蛋白的相對(duì)表達(dá)量隨著IFN-γ作用濃度的增大逐漸增高,同時(shí)活性增強(qiáng),而1-MT可以有效抑制IDO的活性。 2.胰腺癌荷瘤鼠TDLNs中IDO蛋白表達(dá)水平高于正常對(duì)照組。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 3.荷瘤鼠TDLNs和脾臟中CD4+CD25+T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例明顯高于正常對(duì)照鼠,同時(shí)Foxp3 mRNA表達(dá)水平顯著提高。 4.應(yīng)用1-MT后,可以顯著降低荷瘤鼠TDLNs和脾臟中CD4+CD25+T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例。 5.接受DC疫苗治療的胰腺癌荷瘤鼠TDLNs中IDO表達(dá)增高,同時(shí)TDLNs和脾臟中CD4+CD25+T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例及Foxp3 mRNA表達(dá)水平顯著提高。 6.1-MT+與DC疫苗聯(lián)合應(yīng)用組腫瘤生長(zhǎng)顯著受到抑制,抗腫瘤作用顯著高于DC疫苗組及1-MT組。 結(jié)論： 1.胰腺癌細(xì)胞株P(guān)anc02本身表達(dá)IDO,在IFN-γ誘導(dǎo)下表達(dá)上調(diào)且活性增強(qiáng),這可能是引起TDLNs及脾臟CD4+CD25+Treg細(xì)胞的數(shù)量增加的重要因素之一。 2.胰腺癌荷瘤鼠癌組織周圍引流淋巴結(jié)IDO表達(dá)明顯增高,且TDLNs及脾臟CD4+CD25+Treg細(xì)胞的數(shù)量增加,這可能是影響胰腺癌免疫治療的重要因素。 3.通過(guò)抑制IDO活性,1-MT可以有效抑制胰腺癌荷瘤鼠癌組織周圍引流淋巴結(jié)及脾臟CD4+CD25+Treg細(xì)胞的數(shù)量增加,從而增強(qiáng)DC疫苗抗腫瘤作用。
【圖文】：

細(xì)胞共培養(yǎng)24小時(shí)。PancOZ細(xì)胞組加入等量PBS。取培養(yǎng)液上清測(cè)定犬尿氨酸濃度每組樣本例數(shù)均為6例。3結(jié)果3.1IFN一Y誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞株P(guān)anc02中IDo的表達(dá)增強(qiáng)IDO、p一actin特異性免疫印跡條帶的相對(duì)分子質(zhì)量分別為42KD和43KD。不濃度IF’N一丫誘導(dǎo)Panc02的IDO蛋白表達(dá)量如表1及圖1、2所示。經(jīng)過(guò)分析可知，組的IDO/p一actin值之間差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=21.416，P<0.001)，可以認(rèn)為四組ID蛋白的表達(dá)量存在差別，進(jìn)一步采用LSD的方法進(jìn)行兩兩比較，比較結(jié)果顯示，10U/ml組與20U/ml組差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.238)之外，其余各組間都存在差(P均小于0.05)。與空白對(duì)照組比較，IFN一Y作用后胰腺癌細(xì)胞株P(guān)anc02的IDO白表達(dá)量明顯增加，且隨著IFN一Y作用濃度的增大其IDO的表達(dá)量逐漸增加，，50U/ml組為著。

A:OUIml組B:10Ulml組C:20U/ml組D:50U/ml組
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2536786