虎杖苷聯(lián)合生長因子誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)元樣細胞分化的研究
【圖文】：
286中華中醫(yī)藥雜志(原中國醫(yī)藥學(xué)報)2015年1月第30卷第1期CJTCMP,January2015,Vol.30,No.1（4.79％），見圖2。其中CD29、CD44、CD105是基質(zhì)細胞相關(guān)表面標記，HLA-DR是人類白細胞抗原，CD34和CD45是造空干細胞標志物。AAB圖1hUC-MSC細胞形態(tài)觀察（×100）注：A.原代培養(yǎng)4周的hUC-MSC；B.培養(yǎng)的第3代hUC-MSC。圖2hUC-MSC表面標志物鑒定3.hUC-MSC向神經(jīng)元樣細胞定向誘導(dǎo)分化3.1形態(tài)學(xué)觀察誘導(dǎo)14d，虎杖苷聯(lián)合生長因子誘導(dǎo)組可見大部分細胞呈現(xiàn)神經(jīng)元樣細胞形態(tài)改變，胞質(zhì)向核收縮，胞體變圓變亮，折光性增強，突起變細增多，末端出現(xiàn)分叉（圖3A-圖3B）。生長因子誘導(dǎo)組僅見少量細胞立體感增強的細胞，呈簡單的雙極，細胞密度高于加入虎杖苷誘導(dǎo)的兩組細胞（圖3C），對照組形態(tài)學(xué)未見明顯改變（圖3D）。圖3hUC-MSC誘導(dǎo)前后細胞形態(tài)學(xué)變化（×200）注：A.低劑量虎杖苷聯(lián)合生長因子誘導(dǎo)組；B.高劑量虎杖苷聯(lián)合生長因子誘導(dǎo)組；C.生長因子誘導(dǎo)組；D.對照組。CDAB3.2定量PCR鑒定分化細胞見圖4。與對照組比較，hUC-MSC經(jīng)誘導(dǎo)后，β-tubulin-ⅢmRNA的表達在高劑量和低劑量虎杖苷聯(lián)合生長因子組分別上調(diào)了7.44倍和7.98倍（P<0.05），在單純生長因子誘導(dǎo)組上調(diào)了2.22倍（P<0.05），且聯(lián)合使用虎杖苷后β-tubulin-Ⅲ的表達較單純生長因子誘導(dǎo)顯著增加（P<0.05）。MAP2基因表達在高劑量虎杖苷聯(lián)合生長因子組增加了18.14倍（P<0.05），在低劑量虎杖苷聯(lián)合生長因子組增加了6.68倍（P<0.05），在單純生長因子誘導(dǎo)組增加了6.20倍（P<0.05）。與生長因子誘導(dǎo)組比較，Nurr1mRNA在高劑量虎杖苷聯(lián)合生長因子組顯著上調(diào)，為對照組的2.37倍（P<0.05）。3.3細胞免疫熒光染色鑒定分化細胞β-tubulin-Ⅲ主要定位于胞漿。低劑量和高劑量虎杖苷聯(lián)合生長
286中華中醫(yī)藥雜志(原中國醫(yī)藥學(xué)報)2015年1月第30卷第1期CJTCMP,January2015,Vol.30,No.1（4.79％），見圖2。其中CD29、CD44、CD105是基質(zhì)細胞相關(guān)表面標記，HLA-DR是人類白細胞抗原，CD34和CD45是造空干細胞標志物。AAB圖1hUC-MSC細胞形態(tài)觀察（×100）注：A.原代培養(yǎng)4周的hUC-MSC；B.培養(yǎng)的第3代hUC-MSC。圖2hUC-MSC表面標志物鑒定3.hUC-MSC向神經(jīng)元樣細胞定向誘導(dǎo)分化3.1形態(tài)學(xué)觀察誘導(dǎo)14d，虎杖苷聯(lián)合生長因子誘導(dǎo)組可見大部分細胞呈現(xiàn)神經(jīng)元樣細胞形態(tài)改變，胞質(zhì)向核收縮，胞體變圓變亮，折光性增強，突起變細增多，末端出現(xiàn)分叉（圖3A-圖3B）。生長因子誘導(dǎo)組僅見少量細胞立體感增強的細胞，呈簡單的雙極，細胞密度高于加入虎杖苷誘導(dǎo)的兩組細胞（圖3C），對照組形態(tài)學(xué)未見明顯改變（圖3D）。圖3hUC-MSC誘導(dǎo)前后細胞形態(tài)學(xué)變化（×200）注：A.低劑量虎杖苷聯(lián)合生長因子誘導(dǎo)組；B.高劑量虎杖苷聯(lián)合生長因子誘導(dǎo)組；C.生長因子誘導(dǎo)組；D.對照組。CDAB3.2定量PCR鑒定分化細胞見圖4。與對照組比較，hUC-MSC經(jīng)誘導(dǎo)后，β-tubulin-ⅢmRNA的表達在高劑量和低劑量虎杖苷聯(lián)合生長因子組分別上調(diào)了7.44倍和7.98倍（P<0.05），在單純生長因子誘導(dǎo)組上調(diào)了2.22倍（P<0.05），且聯(lián)合使用虎杖苷后β-tubulin-Ⅲ的表達較單純生長因子誘導(dǎo)顯著增加（P<0.05）。MAP2基因表達在高劑量虎杖苷聯(lián)合生長因子組增加了18.14倍（P<0.05），在低劑量虎杖苷聯(lián)合生長因子組增加了6.68倍（P<0.05），，在單純生長因子誘導(dǎo)組增加了6.20倍（P<0.05）。與生長因子誘導(dǎo)組比較，Nurr1mRNA在高劑量虎杖苷聯(lián)合生長因子組顯著上調(diào)，為對照組的2.37倍（P<0.05）。3.3細胞免疫熒光染色鑒定分化細胞β-tubulin-Ⅲ主要定位于胞漿。低劑量和高劑量虎杖苷聯(lián)合生長
【作者單位】： 嘉興市第二醫(yī)院;浙江省安吉縣人民醫(yī)院;
【基金】：浙江省中醫(yī)藥科學(xué)研究基金項目(No.2011ZA104) 國家自然青年科學(xué)基金項目(No.811010707) 嘉興科技局項目(No.2012AY1071-2)~~
【分類號】：R329
【參考文獻】
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【二級參考文獻】
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本文編號：2536466
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