【摘要】： 研究背景：同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)可通過誘導內(nèi)皮細胞凋亡而促進動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。研究提示,內(nèi)源性非對稱二甲基精氨酸(Asymmetric dimethylarginine, ADMA)升高所誘導的氧化應激介導了Hcy的作用。ADMA是一種主要的內(nèi)源性NOS抑制物,能競爭性抑制NOS活性,減少NO合成。二甲基精氨酸二甲氨水解酶(Dimethylarginine dimethylaminohydrolase, DDAH)能特異性水解ADMA。DDAH有1、2兩種亞型,其中DDAH2主要分布于內(nèi)皮及血管組織。研究表明,DDAH/ADMA通路介導的內(nèi)皮細胞凋亡是多種疾病的病理基礎。 近來研究提示,DNA甲基化是AS的早期標志,并與內(nèi)皮細胞功能密切相關。且DNA甲基化在調(diào)節(jié)DDAH表達中起關鍵作用。 表沒食子兒茶素-3-沒食子酸(Epigallocatechin-3-gallate, EGCG)為多酚類物質,是綠茶的主要活性成分,具有抗氧化、抗炎等多種活性。最新研究發(fā)現(xiàn),EGCG可抑制癌細胞中DNA甲基轉移酶(DNMTs)活性并可重新激活癌細胞中的甲基化沉默基因,從而起到抑制癌癥進展的作用。 目的：觀察Hcy對人臍靜脈內(nèi)皮細胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)凋亡的影響是否與誘導DDAH2基因啟動子的甲基化進而降低其表達有關。同時確定EGCG對HUVECs凋亡的保護作用是否與抑制DNMT1的表達進而抑制Hcy誘導的DDAH2高甲基化有關。 方法：HUVECs活性及細胞凋亡率分別用MTT法和流式細胞儀法檢測；DDAH2表達水平通過實時定量PCR檢測,DDAH2啟動子甲基化程度通過甲基化PCR檢測(methylation-specific PCR, MSP),并通過Western blot檢測DNMT1的蛋白表達水平。 結果：Hcy可降低HUVECs活性并誘導其凋亡。同時,Hcy可呈劑量依賴性(0.3 to 3.0 mM)抑制DDAH2 mRNA表達,同時伴有DNMT1蛋白的表達水平顯著上調(diào)以及DDAH2基因的啟動子區(qū)域的高甲基化。DNMT抑制劑5-Aza或者EGCG可顯著抑制Hcy的上述作用。 結論：Hcy呈劑量依賴性抑制HUVECs的活性并誘導HUVECs凋亡。此種作用與其上調(diào)DNMT1表達進而誘導DDAH2啟動子高甲基化使其表達降低有關。EGCG可抑制Hcy的上述作用。這些結果闡述了Hcy致動脈粥樣硬化的新機制,為預防和治療動脈粥樣硬化提供了新的思路。
【圖文】：

Contrd 1.0.西 111七y圖2一 1EGeG(20林M)或s一Aza(5林M)對 Hcy(1.0mM)誘導的細胞凋亡的影響 A:AmiexioVFITC用I雙染色檢測細胞凋亡:門)Control組 :(2)1.0n1MHey處理組 :(3)1.olnMHey+20叫 MEGCG:(4)1.omMHcy+5闊MS一Asa。B:Annexin一 VFITC于I雙染色后用流式細胞儀分析結果。Mean士SEM，，n=3，*:尸<0.05，與空白對照組相比，#:尸<0.05，與Hey處理組相比。
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R341

【引證文獻】

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1 龔婷;冠心病患者DDAH2啟動子甲基化對內(nèi)皮祖細胞功能的調(diào)節(jié)及機制[D];中南大學;2012年

本文編號：2535339