【摘要】： 研究背景：同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)可通過誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。研究提示,內(nèi)源性非對(duì)稱二甲基精氨酸(Asymmetric dimethylarginine, ADMA)升高所誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激介導(dǎo)了Hcy的作用。ADMA是一種主要的內(nèi)源性NOS抑制物,能競(jìng)爭(zhēng)性抑制NOS活性,減少NO合成。二甲基精氨酸二甲氨水解酶(Dimethylarginine dimethylaminohydrolase, DDAH)能特異性水解ADMA。DDAH有1、2兩種亞型,其中DDAH2主要分布于內(nèi)皮及血管組織。研究表明,DDAH/ADMA通路介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡是多種疾病的病理基礎(chǔ)。 近來研究提示,DNA甲基化是AS的早期標(biāo)志,并與內(nèi)皮細(xì)胞功能密切相關(guān)。且DNA甲基化在調(diào)節(jié)DDAH表達(dá)中起關(guān)鍵作用。 表沒食子兒茶素-3-沒食子酸(Epigallocatechin-3-gallate, EGCG)為多酚類物質(zhì),是綠茶的主要活性成分,具有抗氧化、抗炎等多種活性。最新研究發(fā)現(xiàn),EGCG可抑制癌細(xì)胞中DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMTs)活性并可重新激活癌細(xì)胞中的甲基化沉默基因,從而起到抑制癌癥進(jìn)展的作用。 目的：觀察Hcy對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)凋亡的影響是否與誘導(dǎo)DDAH2基因啟動(dòng)子的甲基化進(jìn)而降低其表達(dá)有關(guān)。同時(shí)確定EGCG對(duì)HUVECs凋亡的保護(hù)作用是否與抑制DNMT1的表達(dá)進(jìn)而抑制Hcy誘導(dǎo)的DDAH2高甲基化有關(guān)。 方法：HUVECs活性及細(xì)胞凋亡率分別用MTT法和流式細(xì)胞儀法檢測(cè)；DDAH2表達(dá)水平通過實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè),DDAH2啟動(dòng)子甲基化程度通過甲基化PCR檢測(cè)(methylation-specific PCR, MSP),并通過Western blot檢測(cè)DNMT1的蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果：Hcy可降低HUVECs活性并誘導(dǎo)其凋亡。同時(shí),Hcy可呈劑量依賴性(0.3 to 3.0 mM)抑制DDAH2 mRNA表達(dá),同時(shí)伴有DNMT1蛋白的表達(dá)水平顯著上調(diào)以及DDAH2基因的啟動(dòng)子區(qū)域的高甲基化。DNMT抑制劑5-Aza或者EGCG可顯著抑制Hcy的上述作用。 結(jié)論：Hcy呈劑量依賴性抑制HUVECs的活性并誘導(dǎo)HUVECs凋亡。此種作用與其上調(diào)DNMT1表達(dá)進(jìn)而誘導(dǎo)DDAH2啟動(dòng)子高甲基化使其表達(dá)降低有關(guān)。EGCG可抑制Hcy的上述作用。這些結(jié)果闡述了Hcy致動(dòng)脈粥樣硬化的新機(jī)制,為預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化提供了新的思路。
【圖文】：

Contrd 1.0.西 111七y圖2一 1EGeG(20林M)或s一Aza(5林M)對(duì) Hcy(1.0mM)誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的影響 A:AmiexioVFITC用I雙染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡:門)Control組 :(2)1.0n1MHey處理組 :(3)1.olnMHey+20叫 MEGCG:(4)1.omMHcy+5闊MS一Asa。B:Annexin一 VFITC于I雙染色后用流式細(xì)胞儀分析結(jié)果。Mean士SEM，，n=3，*:尸<0.05，與空白對(duì)照組相比，#:尸<0.05，與Hey處理組相比。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R341

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 龔婷;冠心病患者DDAH2啟動(dòng)子甲基化對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)及機(jī)制[D];中南大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2535339