【摘要】：目的利用小鼠星形膠質細胞和腦微血管內皮細胞共培養(yǎng)建立穩(wěn)定的體外血腦屏障模型。 方法1.取昆明小白鼠晚期胎鼠腦皮質,胰酶消化,過濾法培養(yǎng)原代星形膠質細胞,并利用差速培養(yǎng)和恒溫搖床去除雜細胞,采用GFAP免疫組化法鑒定;2.取昆明小白鼠3d內新生小鼠的腦皮質,采用II型膠原酶消化,BSA梯度離心,膠原酶/分散酶消化進行微血管內皮細胞原代培養(yǎng),24h后換全液去除雜細胞。倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài),采用Ⅷ因子相關抗原免疫組化法進行鑒定;3.利用transwell小室將Ⅳ代星形膠質細胞與Ⅱ代腦微血管內皮細胞共培養(yǎng)。通過光鏡觀察,腦微血管內皮細胞AKP活性測定,及4h試漏實驗、辣根過氧化物酶通透性測定來鑒定模型。 結果原代培養(yǎng)小鼠星形膠質細胞傳至第四代細胞經GFAP免疫組化鑒定陽性率達95%,腦微血管內皮細胞,傳至第二代后通過Ⅷ免疫組化鑒定,陽性率達90%,共培養(yǎng)后的微血管內皮細胞AKP活性與單獨培養(yǎng)的微血管內皮細胞的相比有明顯的提高。而通過4h試漏實驗,及辣根過氧化物酶通透性實驗均說明共培養(yǎng)模型的通透性較單層細胞有明顯降低。 結論利用來源同一種系小鼠的細胞可以構建穩(wěn)定的血腦屏障模型,為進一步的開放血腦屏障研究打下基礎,也為初步鑒定診斷治療性藥物能否通過血腦屏障提供較好的實驗模型。 目的探討Tat肽段介導的超順磁性納米氧化鐵顆粒(Tat-MNPs)是否能通過血腦屏障。 方法利用transwell共培養(yǎng)小室體外構建血腦屏障模型,用不同稀釋倍數(shù)的FITC熒光標記Tat肽段介導的超順磁性納米氧化鐵顆粒(FITC-Tat-MNPs)加入transwell供池,在不同時間段,利用倒置熒光顯微鏡觀察受池是否有熒光顯示,來判斷FITC-Tat-MNPs是否能通過血腦屏障模型。 結果加入FITC-Tat-MNPs后4hPET膜上均可見不同程度的綠色熒光,并且與FITC-Tat-MNPs稀釋的倍數(shù)有相關性,4d后在受池底部的細胞可見綠色熒光。 結論FITC-Tat-MNPs有可能通過血腦屏障模型,并有可能是利用Tat穿透細胞的作用通過,這為利用核磁共振技術早期診斷Alzheimer病提供了基礎。
【圖文】：

12圖1. 星形膠質細胞原代培養(yǎng)第10天 ×100圖2、3. 星形膠質細胞GFAP免疫組化鑒定，左為光鏡下 ×200，，右為同一視野熒光顯微鏡下所見 ×200圖4、5. 左4腦微血管內皮細胞原代第3天光鏡下所見 ×100，右5為原代第7天光鏡下所見 ×100

12圖1. 星形膠質細胞原代培養(yǎng)第10天 ×100圖2、3. 星形膠質細胞GFAP免疫組化鑒定，左為光鏡下 ×200，右為同一視野熒光顯微鏡下所見 ×200圖4、5. 左4腦微血管內皮細胞原代第3天光鏡下所見 ×100，右5為原代第7天光鏡下所見 ×100
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R-332

【共引文獻】

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4 董孟杰;正電子發(fā)射斷層（PET）基礎與臨床研究[D];復旦大學;2006年

5 高永紅;清開靈有效組分對大鼠腦微血管內皮細胞缺血再灌注損傷炎癥反應的影響[D];北京中醫(yī)藥大學;2005年

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本文編號：2533937