【摘要】：目的利用小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞和腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)建立穩(wěn)定的體外血腦屏障模型。 方法1.取昆明小白鼠晚期胎鼠腦皮質(zhì),胰酶消化,過濾法培養(yǎng)原代星形膠質(zhì)細(xì)胞,并利用差速培養(yǎng)和恒溫?fù)u床去除雜細(xì)胞,采用GFAP免疫組化法鑒定;2.取昆明小白鼠3d內(nèi)新生小鼠的腦皮質(zhì),采用II型膠原酶消化,BSA梯度離心,膠原酶/分散酶消化進(jìn)行微血管內(nèi)皮細(xì)胞原代培養(yǎng),24h后換全液去除雜細(xì)胞。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),采用Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫組化法進(jìn)行鑒定;3.利用transwell小室將Ⅳ代星形膠質(zhì)細(xì)胞與Ⅱ代腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)。通過光鏡觀察,腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞AKP活性測(cè)定,及4h試漏實(shí)驗(yàn)、辣根過氧化物酶通透性測(cè)定來鑒定模型。 結(jié)果原代培養(yǎng)小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞傳至第四代細(xì)胞經(jīng)GFAP免疫組化鑒定陽性率達(dá)95%,腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞,傳至第二代后通過Ⅷ免疫組化鑒定,陽性率達(dá)90%,共培養(yǎng)后的微血管內(nèi)皮細(xì)胞AKP活性與單獨(dú)培養(yǎng)的微血管內(nèi)皮細(xì)胞的相比有明顯的提高。而通過4h試漏實(shí)驗(yàn),及辣根過氧化物酶通透性實(shí)驗(yàn)均說明共培養(yǎng)模型的通透性較單層細(xì)胞有明顯降低。 結(jié)論利用來源同一種系小鼠的細(xì)胞可以構(gòu)建穩(wěn)定的血腦屏障模型,為進(jìn)一步的開放血腦屏障研究打下基礎(chǔ),也為初步鑒定診斷治療性藥物能否通過血腦屏障提供較好的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?目的探討Tat肽段介導(dǎo)的超順磁性納米氧化鐵顆粒(Tat-MNPs)是否能通過血腦屏障。 方法利用transwell共培養(yǎng)小室體外構(gòu)建血腦屏障模型,用不同稀釋倍數(shù)的FITC熒光標(biāo)記Tat肽段介導(dǎo)的超順磁性納米氧化鐵顆粒(FITC-Tat-MNPs)加入transwell供池,在不同時(shí)間段,利用倒置熒光顯微鏡觀察受池是否有熒光顯示,來判斷FITC-Tat-MNPs是否能通過血腦屏障模型。 結(jié)果加入FITC-Tat-MNPs后4hPET膜上均可見不同程度的綠色熒光,并且與FITC-Tat-MNPs稀釋的倍數(shù)有相關(guān)性,4d后在受池底部的細(xì)胞可見綠色熒光。 結(jié)論FITC-Tat-MNPs有可能通過血腦屏障模型,并有可能是利用Tat穿透細(xì)胞的作用通過,這為利用核磁共振技術(shù)早期診斷Alzheimer病提供了基礎(chǔ)。
【圖文】：

12圖1. 星形膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)第10天 ×100圖2、3. 星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP免疫組化鑒定，左為光鏡下 ×200，，右為同一視野熒光顯微鏡下所見 ×200圖4、5. 左4腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞原代第3天光鏡下所見 ×100，右5為原代第7天光鏡下所見 ×100

12圖1. 星形膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)第10天 ×100圖2、3. 星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP免疫組化鑒定，左為光鏡下 ×200，右為同一視野熒光顯微鏡下所見 ×200圖4、5. 左4腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞原代第3天光鏡下所見 ×100，右5為原代第7天光鏡下所見 ×100
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R-332

【共引文獻(xiàn)】

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1 高永紅,王永炎,肖盛元,葉麗亞,婁晉寧,羅國安,王碩仁;清開靈有效組分透過體外模擬血腦屏障的研究[J];北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2005年02期

2 董孟杰,林祥通,趙軍;輕度認(rèn)知障礙~(18)F-FDG PET顯像的研究進(jìn)展[J];中國臨床神經(jīng)科學(xué);2005年02期

3 王欣;;中醫(yī)復(fù)方對(duì)血-腦脊液屏障影響的初步研究[J];山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2005年06期

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2 楊承芝;輕度認(rèn)知損害患者的記憶特征及中醫(yī)證候研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2006年

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4 董孟杰;正電子發(fā)射斷層（PET）基礎(chǔ)與臨床研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

5 高永紅;清開靈有效組分對(duì)大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺血再灌注損傷炎癥反應(yīng)的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2005年

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2 房立巖;輕度認(rèn)知損害證候及認(rèn)知特點(diǎn)研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2007年

3 熊玲;納米銀的細(xì)胞生物學(xué)及透過血腦屏障的體外研究[D];四川大學(xué);2007年

本文編號(hào)：2533937