【摘要】： 原發(fā)性膽汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis, PBC)是一種好發(fā)于成年女性的自身免疫性肝病,病因不明且發(fā)病率逐年上升。PBC患者的免疫系統(tǒng)對部分線粒體及細胞核抗原的免疫耐受遭到破壞,致使大部分患者的血清中出現(xiàn)抗線粒體抗體和抗核抗體,其中95%的患者血清中存在抗線粒體內(nèi)膜PDC-E2的自身抗體。此外,多數(shù)患者外周血存在PDC-E2自身反應(yīng)性T細胞,而正常人外周血無此類細胞。然而,什么原因?qū)е翽BC的免疫耐受平衡破壞及T細胞的免疫耐受調(diào)節(jié)機制發(fā)生了怎樣的改變目前尚不清楚。 被自身抗原活化的T細胞通常經(jīng)由凋亡途徑被機體清除。在眾多的凋亡機制中,活化誘導(dǎo)細胞凋亡(Activation induced cell death, AICD)是機體維持外周免疫耐受的重要機制,外周免疫系統(tǒng)通過誘導(dǎo)自身反應(yīng)性T細胞活化后凋亡可有效的控制其對人體的器官、組織等造成免疫損傷,阻止自身免疫病的發(fā)生。器官特異性自身免疫病是由逃逸于外周耐受清除的自身反應(yīng)性T細胞引起的組織損傷和功能異常。PBC的病變特征即是肝內(nèi)匯管區(qū)大量的淋巴細胞浸潤,自身反應(yīng)性T細胞不斷破壞小膽管上皮細胞,導(dǎo)致膽管逐漸減少,膽汁淤積并最終引起進行性的肝臟損傷。 研究表明在PBC匯管區(qū)浸潤的T細胞中以CD4+T細胞居多,大約是CD8+T細胞的2.5倍,由此推斷CD4+T細胞可能在免疫炎癥中發(fā)揮重要作用。原位雜交分析發(fā)現(xiàn)PBC患者匯管區(qū)表達IFN-γmRNA的細胞明顯增加,說明Th1細胞介導(dǎo)的免疫炎癥反應(yīng)在致PBC肝臟病變過程中具有重要作用。 聚肌苷酸胞苷酸(polyinosinic polycytidylic acid, polyI:C)是Toll樣受體3(TLR3)的配體,可以誘導(dǎo)I型干擾素(IFN-α)的分泌。研究表明polyI:C與自身免疫病的發(fā)生和進展具有相關(guān)性。而IFN-α能夠刺激體內(nèi)的細胞產(chǎn)生多種細胞因子、趨化因子等,同時還可以刺激機體分泌抗核抗體、抗甲狀腺抗體、抗胰島細胞等多種自身抗體。1995年D'Amico等報道一例慢性丙肝(chronic hepatitis C, CHC)患者在接受IFN-α治療的過程中出現(xiàn)PBC樣病變,血清堿性磷酸酶水平達到正常人的3倍以上,且出現(xiàn)抗線粒體抗體,同時匯管區(qū)出現(xiàn)單個核細胞浸潤。另外,Takii等通過免疫組化研究發(fā)現(xiàn)PBC患者匯管區(qū)單個核細胞中IFN-α表達較自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis, AIH)和CHC患者顯著升高。 在臨床治療方面主要依靠藥物治療緩解病人的瘙癢、骨質(zhì)疏松、門脈高壓等并發(fā)癥,但無法延長患者的生存年限,更不可能從根本上治愈該病。因此有必要從免疫耐受的角度出發(fā),尋找更為有效的治療手段,從而在根本上治療PBC。 基于以上研究現(xiàn)狀,我們擬通過注射M2蛋白及polyI:C誘導(dǎo)建立PBC小鼠模型,并在此基礎(chǔ)上對其外周血、脾臟、肝組織的CD4+T細胞活化誘導(dǎo)細胞凋亡情況進行分析,了解其外周免疫耐受機制,最后將PBC自身抗原M2與交聯(lián)劑ECDI及脾臟淋巴細胞共同作用,經(jīng)尾靜脈注射PBC小鼠誘導(dǎo)重建外周免疫耐受,觀察PBC小鼠的疾病進展情況。旨在為進一步研究PBC的免疫耐受機制及其免疫治療的探索提供思路。 第一部分M2三聯(lián)體抗原的基因工程生產(chǎn) PBC的主要自身抗原是位于線粒體內(nèi)膜的丙酮酸脫氫酶復(fù)合體(PDC)、側(cè)鏈二氧酸脫氫酶復(fù)合體(BCOADC)、2-氧戊二酸脫氫酶復(fù)合體(OGDC)的E2亞基。本科室將以上三種主要自身抗原免疫優(yōu)勢表位基因重組后經(jīng)克隆表達出三聯(lián)體抗原。為了建立PBC小鼠模型并進行免疫耐受研究,我們通過大量發(fā)酵生產(chǎn)獲得該抗原。首先以IPTG在試管及燒瓶中進行小量誘導(dǎo)表達,條件成熟后進行發(fā)酵罐大量發(fā)酵,最后以安瑪西亞蛋白純化儀純化獲得的蛋白。 結(jié)果表明,小量誘導(dǎo)時IPTG 1mg/ml誘導(dǎo)4小時蛋白表達量明顯升高。之后以3.5L發(fā)酵罐大量發(fā)酵,2.5小時后溶氧量下降,此時開始添加補料。我們分別以葡萄糖和甘油作為補料提供碳源,結(jié)果發(fā)現(xiàn)以甘油作為碳源時蛋白的表達量顯著高于葡萄糖碳源。發(fā)酵罐IPTG誘導(dǎo)6小時菌體密度最高,此后不再有明顯變化,溶氧控制在30%以上,最大轉(zhuǎn)速達到500rpm/min,pH為6.8-7.4,最終菌體密度OD600達到12.7,濕菌重約30g。經(jīng)蛋白純化儀純化后得到的蛋白濃度為1.5mg/ml。 第二部分原發(fā)性膽汁性肝硬化動物模型的建立PBC是一種慢性遷延性疾病,病程很長,且患者往往伴有病毒感染等其他病變,更為重要的是病變組織局限于肝臟,很難獲得足夠的組織用于研究。因此,短期內(nèi)建立一個有效的動物模型能夠從根本上解決以上問題。 我們分別以M2抗原50μg和polyI:C 5mg/kg、10mg/kg劑量免疫C57BL/6雌性小鼠,在不同時間段處死分離血清、肝、腎、腦、小腸、胃等組織進行抗線粒體抗體、抗核抗體、堿性磷酸酶(AKP)、病理分析,觀察小鼠病變情況。同時對小鼠外周血細胞進行流式分析,了解T細胞亞群的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn),蛋白免疫組ANA陽性率為30%,AMA陽性率則高達80%,且滴度均1:100,對照組未見陽性結(jié)果;PolyI:C免疫后,陰性對照組、5mg/kg、10mg/kg組ANA分別在第12、8、4周時陽性率達到100%;對照組及5mg/kg組小鼠從注射第8周開始出現(xiàn)滴度1:100的ANA,10mg/kg組小鼠則從第4周開始出現(xiàn)1:100的ANA,而且polyI:C組小鼠均從注射第8周開始出現(xiàn)滴度為1:10000的高滴度ANA;血清AMA檢測發(fā)現(xiàn),對照組AMA均為陰性,5mg/kg組隨著注射時間延長陽性率逐漸增加,16周達到80%并保持不變,10mg/kg組小鼠在注射后的第4周AMA陽性率即達到80%,但是隨著注射時間延長AMA陽性率卻出現(xiàn)下降,第12周降至20%并保持不變。AMA抗體滴度:5mg/kg組高滴度抗體的小鼠數(shù)量隨藥物注射逐漸增加,而10mg/kg組則呈現(xiàn)下降趨勢。 肝組織H.E染色并對浸潤細胞數(shù)大于50的匯管區(qū)進行統(tǒng)計分析,結(jié)果以百分率表示,發(fā)現(xiàn)5mg/kg組小鼠浸潤的匯管區(qū)數(shù)量逐漸增加至第16周,16周與20周比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義,而10mg/kg組第12周即達到穩(wěn)定水平,與16周和20周比較均無統(tǒng)計學(xué)意義,陰性對照組小鼠肝臟匯管區(qū)均未發(fā)現(xiàn)明顯的炎癥細胞浸潤。對腎臟、胃、大腦、小腸和心肌組織進行H.E染色,顯微鏡觀察均未發(fā)現(xiàn)炎癥反應(yīng);polyI:C組小鼠的血清ALP水平隨著藥物注射逐漸增加,5mg/kg組和10mg/kg組ALP水平均60U/L,而陰性對照組則在60U/L以下,且隨著時間的變化無明顯改變,5mg/kg組和10mg/kg組兩組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。M2免疫組小鼠未出現(xiàn)匯管區(qū)炎癥改變及血清AKP變化。各組小鼠的外周血CD4+、CD8+ T細胞分布比例各組之間沒有出現(xiàn)顯著差異(P0.05),同時各組內(nèi)也沒有隨著時間發(fā)生變化。 polyI:C 5mg/kg劑量注射得到的模型符合PBC實驗室診斷指標,具有良好的代表性,可用于后續(xù)研究。 第三部分PBC模型中細胞增殖及活化誘導(dǎo)凋亡研究體內(nèi)T細胞活化誘導(dǎo)凋亡(activation induced cell death, AICD)是清除自身反應(yīng)性T細胞維持外周免疫耐受的重要機制,效應(yīng)性T細胞AICD缺陷可能會導(dǎo)致自身免疫性疾病的發(fā)生。研究表明在PBC患者的匯管區(qū)存在著大量的Th細胞,尤以Th1細胞為主。 本部分我們以polyI:C 5mg/kg劑量注射C57小鼠重新建立PBC小鼠模型,16周后分離淋巴細胞并以磁珠純化獲得肝臟、脾臟CD4+T細胞,以M2蛋白及ConA結(jié)合anti-CD3刺激細胞增殖及活化后凋亡實驗,并對凋亡相關(guān)基因及信號蛋白FLIP、caspase-8進行檢測。此外,為了了解M2蛋白是否對T細胞功能產(chǎn)生影響,我們按照第二部分的方法同時注射M2抗原。結(jié)果發(fā)現(xiàn):1)M2蛋白刺激后,空白對照組、PBS組、M2蛋白組之間的細胞增殖能力差異也無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),但是PBC組小鼠細胞增殖能力與以上三組相比顯著增強,且PBC小鼠肝內(nèi)淋巴細胞增殖能力強于脾淋巴細胞,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.001);2)空白組、PBS組、M2蛋白組AICD之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),但是這三組細胞的凋亡率均顯著高于PBC組的脾臟和肝臟CD4+T細胞(p0.001)。比較PBC組小鼠的肝臟和脾臟CD4+ T細胞凋亡結(jié)果表明,肝臟CD4+ T細胞的凋亡率顯著低于脾臟細胞,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.001);3)模型組小鼠肝脾淋巴細胞FasL基因的表達較對照組均明顯降低(p0.01),而兩組小鼠淋巴細胞Fas表達水平無明顯改變。TRAIL在模型組小鼠肝脾淋巴細胞中的表達也顯著低于對照組小鼠(P0.01);4)模型組caspase-8表達較對照組無明顯變化,而FLIPL表達則明顯升高,大部分在升高5倍以上,且肝臟中CD4+ T淋巴細胞FLIPL表達高于脾臟,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.001)。 以上結(jié)果說明,PBC組小鼠體內(nèi)存在大量自身反應(yīng)性淋巴細胞,且肝內(nèi)居多;CD4+T淋巴細胞的抗凋亡能力增強使得PBC小鼠模型淋巴細胞AICD明顯降低,最終導(dǎo)致外周免疫耐受平衡被破壞;FLIPL的表達增高可能是AICD受到抑制的重要原因并參與匯管區(qū)炎癥反應(yīng),同時FasL和TRAIL mRNA表達降低可能也起到一定的作用。 第四部分重建外周免疫耐受抑制原發(fā)性膽汁性肝硬化 原發(fā)性膽汁性肝硬化目前尚無十分有效的根治手段,只能針對患者出現(xiàn)瘙癢、骨質(zhì)疏松、高脂血癥、門脈高壓等并發(fā)癥進行對癥治療,而對于晚期患者肝臟移植則是最佳治療措施。因此,從免疫學(xué)角度出發(fā)尋找更為有效的根治手段已經(jīng)迫在眉睫。我們將M2蛋白與新生小鼠的脾淋巴細胞及交聯(lián)劑ECDI共培養(yǎng),形成抗原負載的淋巴細胞,隨后通過尾靜脈注入小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)免疫系統(tǒng)對PBC自身抗原的免疫耐受,同時注射polyI:C誘導(dǎo)PBC病變,對照組注射與牛血清白蛋白(BSA)共培養(yǎng)的脾細胞,16周后觀察小鼠的各項實驗室指標,分析重建PBC小鼠外周免疫耐受是否能夠有效的阻止病變產(chǎn)生或緩解病程。 結(jié)果發(fā)現(xiàn):1)AMA:免疫耐受組與BSA對照組、模型對照組相比陽性率顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.007, P=0.003);BSA對照組和模型對照組間無明顯差異(P=0.74);2)免疫耐受組、BSA對照組、模型對照組的AKP水平分別為80.5±9.8U/L、93.8±15.7U/L、92.5±17.7U/L;其中BSA組和模型組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.83),而免疫耐受組低于BSA組(P=0.0095)和模型對照組(P=0.029);3)免疫耐受組、BSA對照組、模型對照組的膽管陽性浸潤率分別為:42.67±12.3%、57.07±11.35%、51.53±9.96%;其中免疫耐受組陽性浸潤率低于模型對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.039),同時顯著低于BSA對照組(P=0.0024),而且BSA對照組和模型對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.167)。 綜上,本研究以M2抗原在體外與初始狀淋巴細胞相互作用后,經(jīng)尾靜脈注射小鼠誘導(dǎo)外周免疫耐受,在一定程度上抑制了PBC小鼠的病變程度,為今后進一步研究PBC的免疫治療提供思路。
【圖文】：

時的菌體總蛋白；b：IPTG 誘導(dǎo) 4 小時后菌體總培養(yǎng)基的確定時溶氧開始下降，表明起始培養(yǎng)基中的葡萄糖消原可用葡萄糖或甘油，但在我們的發(fā)酵過程中電達量明顯低于以甘油為碳原時（圖 2）。補料方又有恒速補料和指數(shù)補料兩種，我們使用蠕動泵料尤其是糖已經(jīng)消耗完畢，所以開始補料速度應(yīng)之后速度降為 1.5ml/min 直到補料結(jié)束。

的菌體總蛋白；b：IPTG 誘導(dǎo) 4 小時后菌體總養(yǎng)基的確定時溶氧開始下降，表明起始培養(yǎng)基中的葡萄糖消原可用葡萄糖或甘油，但在我們的發(fā)酵過程中電達量明顯低于以甘油為碳原時（圖 2）。補料方又有恒速補料和指數(shù)補料兩種，我們使用蠕動泵料尤其是糖已經(jīng)消耗完畢，所以開始補料速度應(yīng)后速度降為 1.5ml/min 直到補料結(jié)束。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R392

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 姚光弼;中國人原發(fā)性膽汁性肝硬化的前瞻性研究[J];肝臟;2002年03期

2 段雪飛,周麗雅,劉莊,赫嶸;72例原發(fā)性膽汁性肝硬化的臨床診治經(jīng)驗[J];醫(yī)師進修雜志;2005年05期

3 史旭華,張奉春;抗線粒體抗體與原發(fā)性膽汁性肝硬化[J];中華風(fēng)濕病學(xué)雜志;2005年08期

4 ;原發(fā)性膽汁性肝硬化和IgG_3[J];廣東醫(yī)學(xué);1983年10期

5 廖國祥;用蛋白質(zhì)抗原檢測肝硬化病人的自身抗體[J];國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志;1990年05期

6 劉秋香;樸云峰;;抗線粒體抗體M2亞型與原發(fā)性膽汁性肝硬化[J];臨床肝膽病雜志;2008年02期

7 陳俊飛;衣展華;曹濟生;;32例原發(fā)性膽汁性肝硬化臨床分析[J];實用肝臟病雜志;2009年05期

8 馮秀生;原發(fā)性膽汁性肝硬化16例臨床分析并文獻復(fù)習(xí)[J];實用醫(yī)技雜志;2004年01期

9 屠小卿,朱燁,徐玲玲,耿紅蓮,周琳,劉海英,顧鵬飛,范列英,仲人前;原發(fā)性膽汁性肝硬化85例實驗室檢測指標的分析[J];檢驗醫(yī)學(xué);2005年06期

10 鄒國輝;俞力軍;左新年;程平;;原發(fā)性膽汁性肝硬化41例臨床病例分析[J];臨床內(nèi)科雜志;2008年10期

相關(guān)會議論文 前10條

1 蔣廷旺;鄧安梅;朱燁;吳傳勇;周曄;陳燕;陳波;谷明莉;仲人前;;原發(fā)性膽汁性肝硬化動物模型的初步建立[A];中國免疫學(xué)會第五屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2006年

2 周淑芬;劉樹業(yè);;132例原發(fā)性膽汁性肝硬化的自身抗體特征及臨床分析[A];第四屆全國臨床檢驗學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

3 郭新會;陳義森;張?zhí)祠?;原發(fā)性膽汁性肝硬化的臨床與實驗室研究[A];2002全國中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2002年

4 賈繼東;;原發(fā)性膽汁性肝硬化的診斷、鑒別診斷及治療[A];2002全國中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2002年

5 馮雪;李永哲;張洋;包書萌;佟大偉;張蜀瀾;胡朝軍;;原發(fā)性膽汁性肝硬化患者抗線粒體抗體亞型檢測的臨床意義[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2008年

6 趙臣;李永哲;夏薇;胡朝軍;劉定華;佟大偉;張蜀瀾;;原發(fā)性膽汁性肝硬化患者共刺激分子B7-H4的檢測及臨床意義分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2008年

7 蔣健;何淼;;原發(fā)性膽汁性肝硬化的臨床特征及中西醫(yī)結(jié)合治療探討[A];第十二次全國中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2003年

8 李沛秋;王宣偉;;原發(fā)性膽汁性肝硬化合并潰瘍結(jié)腸炎一例[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會第十五次全國消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2003年

9 陳軍;陳燕;陳波;周曄;谷明莉;林艷;鄧安梅;仲人前;;原發(fā)性膽汁性肝硬化患者血清補體水平相關(guān)性分析[A];中國免疫學(xué)會第五屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2006年

10 王靜;陸偉;胡東勝;岳曉粉;;原發(fā)性膽汁性肝硬化臨床特點分析[A];第四屆中國醫(yī)師協(xié)會感染科醫(yī)師大會暨傳染病診治高峰論壇、浙江省醫(yī)學(xué)會肝病、感染病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2011年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 遼寧 主任醫(yī)師 王振坤;莫把原發(fā)性膽汁性肝硬化誤為肝炎[N];家庭醫(yī)生報;2003年

2 王 星;中西醫(yī)結(jié)合診治原發(fā)性膽汁性肝硬化[N];中國中醫(yī)藥報;2004年

3 ;中藥治療原發(fā)性膽汁性肝硬化療效滿意[N];中國中醫(yī)藥報;2004年

4 程云;特殊肝病———PBC[N];大眾衛(wèi)生報;2004年

5 程云;診治這種肝病貴在早[N];健康報;2003年

6 消化科副主任醫(yī)師 熊鋒寶整理;淤膽性肝炎是怎么加回事[N];家庭醫(yī)生報;2004年

7 程樹元;誰在左右你的免疫力[N];中國中醫(yī)藥報;2004年

8 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院急診科 教授 羅學(xué)宏;莫把AIH誤當(dāng)病毒性肝炎[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2009年

9 徐蜀遠;熊去氧膽酸在肝膽疾病中的應(yīng)用（上）[N];中國醫(yī)藥報;2001年

10 劉文山;環(huán)孢素A治療非血液病[N];中國醫(yī)藥報;2000年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 姜小華;人源M2三聯(lián)體靶抗原的克隆表達及其在原發(fā)性膽汁性肝硬化中的應(yīng)用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2002年

2 蔣廷旺;原發(fā)性膽汁性肝硬化動物模型的建立及其免疫耐受相關(guān)機制探討[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2009年

3 劉海英;原發(fā)性膽汁性肝硬化患者中抗原特異性T細胞的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

4 周運恒;SOCS在原發(fā)性膽汁性肝硬化發(fā)病機制中的作用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2009年

5 唐敏;TAK1/JNK和TAK1/p38信號通路在原發(fā)性膽汁性肝硬化中的意義及姜黃對其的影響[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

6 張建;原發(fā)性膽汁性肝硬化患者中CD4～+CD25～+免疫調(diào)節(jié)性T細胞的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

7 趙素賢;原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）臨床病理特點及LPS在其發(fā)病中作用的研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2008年

8 趙鵬;原發(fā)性膽汁性肝硬化比較蛋白質(zhì)組學(xué)的基礎(chǔ)與臨床研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2009年

9 楊再興;TLR4介導(dǎo)線粒體M2蛋白致原發(fā)性膽汁性肝硬化發(fā)病的作用機制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

10 潘盈;PBC小鼠模型中調(diào)節(jié)T細胞相關(guān)研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 林慧佳;原發(fā)性膽汁性肝硬化的臨床分析[D];浙江大學(xué);2006年

2 任慧瓊;78例原發(fā)性膽汁性肝硬化的臨床分析[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

3 丘燦明;原發(fā)性膽汁性肝硬化7例臨床分析[D];福建醫(yī)科大學(xué);2009年

4 陳芳;48例原發(fā)性膽汁性肝硬化的臨床分析[D];中南大學(xué);2009年

5 劉秋香;原發(fā)性膽汁性肝硬化38例臨床分析[D];吉林大學(xué);2008年

6 柳婧美;中國人群PBC家系成員的發(fā)病情況及機制初探[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

7 趙軍;PDC-E2的純化、活性鑒定及中國北方人群原發(fā)性膽汁性肝硬化HLA易感基因的初步研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院;2005年

8 季慧范;PBC患者臨床觀察及UDCA治療隨訪[D];吉林大學(xué);2006年

9 朱麗;44例原發(fā)性膽汁性肝硬化的臨床特征分析[D];中國醫(yī)科大學(xué);2010年

10 鄧垂文;原發(fā)性膽汁性肝硬化抗線粒體抗體陽性與陰性患者間血清差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

，

本文編號：2533317