【摘要】： 適宜的營養(yǎng)水平是兒童免疫系統(tǒng)發(fā)揮正常生理功能并不斷向前發(fā)育成熟的重要保證�，F(xiàn)實中對兒童的營養(yǎng)性干預(yù)主要見于兩個方面：糾正營養(yǎng)失衡所造成的免疫功能受損及發(fā)育受阻,恢復(fù)正常狀態(tài)下機(jī)體對疾病的防御能力；通過營造一個良好的營養(yǎng)環(huán)境,促進(jìn)兒童時期免疫系統(tǒng)的生長發(fā)育,提高兒童時期的免疫能力,進(jìn)而發(fā)揮疾病預(yù)防和促進(jìn)遠(yuǎn)期健康的作用。本研究就維生素A調(diào)節(jié)腸粘膜免疫功能的作用途徑與機(jī)制、雙歧桿菌對局部和全身免疫系統(tǒng)發(fā)育的影響分別進(jìn)行了探討,以期在上述兩個方面豐富兒童營養(yǎng)與免疫關(guān)系的認(rèn)識。 目的通過研究維生素A在體內(nèi)的活性代謝產(chǎn)物—視黃酸(retinoic acid, RA)對腸粘膜樹突狀細(xì)胞(dedritic cell, DC)的數(shù)量、成熟分化和細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響,及其作用的途徑,從免疫應(yīng)答的初始環(huán)節(jié)探討維生素A調(diào)節(jié)腸粘膜免疫的作用及其機(jī)制,為臨床正確應(yīng)用維生素A營養(yǎng)防治疾病提供理論和實驗依據(jù)。 方法大鼠腸粘膜的集合淋巴結(jié)(Peyer's patches, PP結(jié))體外培養(yǎng),分為：對照組；RA組,加入全反式視黃酸(at-RA); RA+RO組,同時加入RA和視黃酸受體RARα特異性拮抗劑(Ro 41-5253)。于培養(yǎng)24h、48h收獲組織塊后,1、采用流式細(xì)胞儀檢測大鼠DC表面分化標(biāo)志,觀察RA對PP結(jié)DC數(shù)目(OX62陽性細(xì)胞百分比)和成熟分化(OX6、CD86熒光強(qiáng)度)的影響；2、采用熒光定量PCR的方法,觀察RA對PP結(jié)細(xì)胞因子基因轉(zhuǎn)錄水平的影響,以及RARαmRNA表達(dá)水平的相應(yīng)變化。 結(jié)果1、培養(yǎng)24h和48h,三組PP結(jié)DC數(shù)目均無顯著差異,但RA處理后DC的成熟度明顯升高,該作用于培養(yǎng)24h顯著；2、RA處理使得PP結(jié)細(xì)胞因子IL-12(主要由DC分泌)和IFN-γ(Thl細(xì)胞因子)的mRNA水平下調(diào),調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子IL-10的mRNA表達(dá)升高,而Th2細(xì)胞因子IL-4的產(chǎn)生無明顯變化。此外,加入RA后可使RARα在PP結(jié)的基因表達(dá)上調(diào)；3、當(dāng)Ro同時加入時,則可逆轉(zhuǎn)RA的上述作用。 結(jié)論1、視黃酸可促進(jìn)體外培養(yǎng)的PP結(jié)中DC的成熟,并使后續(xù)的免疫應(yīng)答反應(yīng)向調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的方向偏倚,有利于粘膜免疫穩(wěn)態(tài)的維持,防止局部過度炎癥反應(yīng)的發(fā)生；2、RARα參與了視黃酸對腸粘膜免疫的調(diào)節(jié)作用。 目的通過建立生后早期腸道雙歧桿菌減滅或額外定植的動物模型,研究在免疫發(fā)育過程中,雙歧桿菌對DC數(shù)量、成熟分化和功能的作用,以及對T細(xì)胞應(yīng)答類型的調(diào)節(jié)、對抗體生成的影響,從抗原提呈、細(xì)胞免疫和體液免疫三方面,探討雙歧桿菌促進(jìn)免疫系統(tǒng)發(fā)育的作用途徑與機(jī)制,為在兒童中科學(xué)合理應(yīng)用益生菌提供理論和實驗依據(jù)。 方法飼養(yǎng)在嚴(yán)格屏障環(huán)境的新生大鼠從出生起每天給予大劑量抗生素腸道滅菌(低菌組)或口服接種長雙歧桿菌(增菌組),分別于生后1W、3W和6W觀察以下免疫發(fā)育指標(biāo)：1、應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù),了解雙歧桿菌對PP結(jié)、脾臟和外周血中DC數(shù)目(OX62陽性細(xì)胞百分比)和成熟度(CD86熒光強(qiáng)度)、T細(xì)胞亞群分布,以及胸腺中T細(xì)胞發(fā)育成熟的影響；2、采用熒光定量PCR和ELISA的方法,了解雙歧桿菌對腸粘膜和血漿細(xì)胞因子表達(dá)水平,以及體外培養(yǎng)的外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)細(xì)胞因子基因轉(zhuǎn)錄水平的影響；3、應(yīng)用ELISA的方法,了解雙歧桿菌對PBMCs生成抗體(IgG和IgM)能力的影響。 結(jié)果1、低菌組PP結(jié)中DC的成熟度降低,增菌組則增高；低菌組胸腺中未成熟的CD4+CD8+T細(xì)胞向CD4+或CD8+成熟T細(xì)胞的分化發(fā)育延緩；2、低菌組的腸粘膜IL-12(主要由DC分泌)、IL-10(調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子)的mRNA以及IFN-γ/IL-4(Thl／Th2)比值均下調(diào),血漿IL-4分泌增多,PBMCs體外刺激后IFN-γ表達(dá)降低；增菌組的腸粘膜IL-12、IFN-γ、IL-10mRNA以及IFN-γ/IL-4均上調(diào),PBMCs的IFN-γ表達(dá)增高；3、低菌組體外培養(yǎng)的PBMCs合成抗體IgM減少,增菌組則升高。 結(jié)論生后早期,腸道定植的雙歧桿菌能夠：1、促進(jìn)PP結(jié)中DC的成熟及對IL-12的表達(dá),對腸外DC的作用則不明顯；2、影響著T細(xì)胞在中樞免疫器官胸腺中的發(fā)育成熟；3、誘導(dǎo)局部和全身的輔助性T細(xì)胞應(yīng)答向Thl方向偏倚,有助于機(jī)體Thl／Th2平衡的實現(xiàn)；同時促進(jìn)局部腸道調(diào)節(jié)性T細(xì)胞免疫應(yīng)答的發(fā)育；4、增強(qiáng)PBMCs合成抗體的能力,進(jìn)而促進(jìn)全身性的體液免疫應(yīng)答。
【圖文】：

圖1.sat一RA、Ro41一5253對PP結(jié)細(xì)胞因子m丑NA水平的影響與對照組相比，’P<0.05，**v<0.01，n一9(二)、RARamRNA水平的變化RA組RARa的mRNA拷貝數(shù)在培養(yǎng)24h高于對照組(P=0.015，LSD法)，，當(dāng)RO41一5253加入培養(yǎng)后(RA+RO組)，可拮抗RA的作用，表現(xiàn)為與對照組無差別(P=0.633，LSD法)。到48h時，三組RARa的mRNA拷貝數(shù)則無明顯差異。見圖1.6。

個數(shù)量級(P均<0.001，Bonferroni法);增菌組則在3W齡時，比同時點的對照組高出約4個數(shù)量級，達(dá)到logcFu/g糞便，并維持這一水平到6w齡(P均<0.001，Bonfermni法)。見圖2.1。一對照組一心一低菌組一一增菌組*t.霖!﨏l洲產(chǎn)//U1o璐

本文編號：2533122