【摘要】： 目的:探討鹽酸米托蒽醌(mitoxantrone hydrochloride,MIT)對B16細(xì)胞鈣網(wǎng)蛋白(CRT)表達(dá)的影響,觀察高表達(dá)CRT的黑素瘤B16細(xì)胞膜抗原疫苗對小鼠抗腫瘤免疫反應(yīng)所產(chǎn)生的影響;同時觀察高表達(dá)CRT的B16細(xì)胞膜抗原沖擊后DCs誘導(dǎo)的CTL細(xì)胞對荷黑素瘤小鼠的治療效果。 方法:用MIT處理B16細(xì)胞,免疫熒光法檢測B16細(xì)胞膜表面CRT的表達(dá),檢測得知MIT可以上調(diào)B16細(xì)胞CRT的表達(dá)。分別用不同劑量的MIT治療荷瘤小鼠,用普通B16細(xì)胞膜抗原和MIT處理過的B16細(xì)胞膜蛋白作為疫苗對荷瘤小鼠模型進(jìn)行預(yù)防接種。體外用普通B16細(xì)胞膜抗原和MIT處理過的B16細(xì)胞膜抗原分別沖擊DCs之后誘導(dǎo)特異性CTLs治療荷瘤小鼠。流式細(xì)胞學(xué)觀察小鼠腫瘤組織中CRT表達(dá),脾臟不同T細(xì)胞比例變化,免疫組化檢測小鼠腫瘤內(nèi)T淋巴細(xì)胞、DCs的浸潤情況,描計小鼠腫瘤體積曲線,觀察對荷黑素瘤小鼠的治療效果。 結(jié)果: 1.分別用0.0μg/ml、0.25μg/ml、1.0μg/ml、4.0μg/ml濃度MIT處理B16細(xì)胞,4組腫瘤細(xì)胞CRT的表達(dá)陽性率分別為:(29.40±3.57)%;(42.80±4.59)%;(56.20±5.55)%;(72.20±2.94)%,CRT表達(dá)均上調(diào)(P0.05),且CRT表達(dá)呈劑量依賴性(P0.05)。Western blotting鑒定顯示,4.0μg/ml濃度MIT組B16細(xì)胞膜CRT相對表達(dá)為472±23,0.0μg/ml MIT組B16細(xì)胞膜CRT相對表達(dá)為117±18(P0.01)。 2.用2.0、4.0、8.0 mg/kg MIT注射治療荷瘤小鼠,與對照組相比3種劑量MIT可以不同程度可以提高小鼠模型腫瘤組織CRT表達(dá),流式細(xì)胞學(xué)檢測其CRT表達(dá)量分別為:5.13±0.95; 7.40±0.86;9.17±1.06,與對照組3.21±1.37相比有顯著差別(P0.05)。 3.免疫組化實驗顯示:2.0、4.0、8.0 mg/kg MIT組和MIT-B16蛋白疫苗組小鼠模型腫瘤組織內(nèi)部的DCs數(shù)量均顯著高于荷瘤對照組小鼠(P0.05);2.0、4.0 mg/kg MIT組和MIT-B16蛋白疫苗組小鼠模型腫瘤組織內(nèi)部的T細(xì)胞數(shù)量均顯著高于荷瘤對照組小鼠(P0.01) 4.流式細(xì)胞學(xué)檢測小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞顯示:4.0 mg/kg MIT組、MIT-B16蛋白疫苗組、B16-DCs-CTLs組、MIT-B16-DCs-CTLs組小鼠脾臟中CD4~+T淋巴細(xì)胞比例與荷瘤小鼠相比有顯著提高(P0.01);2.0、4.0、8.0 mg/kg MIT組、MIT-B16蛋白疫苗組、B16-DCs-CTLs組、MIT-B16-DCs-CTLs組小鼠脾臟中CD8~+T淋巴細(xì)胞比例與荷瘤小鼠相比有顯著提高(P0.05) 5.第14日處死小鼠測量腫瘤體積(cm3),各實驗組腫瘤體積均明顯小于與荷瘤對照組小鼠6.94±0.81(P0.01),其中2.0、4.0、8.0 mg/kg MIT組小鼠腫瘤體積分別為4.07±0.77、2.35±0.54、1.21±0.39,3組有明顯差別(P0.05);B16蛋白疫苗組,MIT-B16蛋白疫苗組腫瘤體積分別為4.15±0.57、1.67±0.33,2組有明顯差別(P0.05);B16-DCs-CTLs組、MIT-B16-DCs-CTLs組腫瘤體積分別為:1.09±0.25、0.59±0.21,2組有明顯差別(P0.05);其中各治療組中MIT-B16-DCs-CTLs組腫瘤體積均小于其他各組(P0.05)。 結(jié)論: 1. MIT能夠上調(diào)CRT在B16腫瘤細(xì)胞表面的表達(dá),相似的MIT可以提高小鼠黑色素瘤組織中CRT的表達(dá),且在小鼠承受的范圍內(nèi)CRT表達(dá)呈現(xiàn)劑量依賴性;適當(dāng)劑量的MIT能夠提高小鼠黑色素瘤組織中浸潤的DCs和T細(xì)胞的數(shù)量,提高小鼠脾臟中CD4~+、CD8~+T淋巴細(xì)胞比例,形成特異性的抗腫瘤免疫。 2.高表達(dá)CRT的B16細(xì)胞膜蛋白疫苗能夠提高腫瘤組織中浸潤的DCs和T細(xì)胞的數(shù)量,提高小鼠黑色素瘤組織中浸潤的DCs和T細(xì)胞的數(shù)量,提高小鼠脾臟中CD4~+、CD8~+T淋巴細(xì)胞比例,改善小鼠機(jī)體抗腫瘤免疫環(huán)境,對小鼠產(chǎn)生腫瘤特異性保護(hù)。 3.利用高表達(dá)CRT的B16腫瘤膜抗原沖擊后的DCs-CTLs細(xì)胞治療荷瘤小鼠,小鼠脾臟中CD4~+、CD8~+T淋巴細(xì)胞比例提高,改善小鼠機(jī)體抗腫瘤免疫環(huán)境,能夠取得理想療效。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R392

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本文編號：2532440