【摘要】： 【目的】測定臨床分離鮑曼不動桿菌的喹諾酮耐藥表型,探討其基因之間的同源性;研究其耐藥表型與其染色體上gyrA和parC基因突變的關(guān)系;研究臨床分離鮑曼不動桿菌的外排泵基因的表達情況。 【方法】 (1)采用微量肉湯稀釋法測定左氧氟沙星和加替沙星對90株臨床分離鮑曼不動桿菌的最低抑菌濃度;采用基因外回文序列進行同源性分析。 (2)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴增鮑曼不動桿菌的gyrA和parC基因,對PCR產(chǎn)物進行變性高效液相色譜(DHPLC)分析及DNA測序。 (3)瓊脂稀釋法測定外排泵抑制劑(CCCP)對喹諾酮藥物對鮑曼不動桿菌的抗菌活性的影響。RT-PCR擴增鮑曼不動桿菌外排蛋白基因(adeB),利用圖像分析軟件(Bandscan)測定其相對灰度值,分析耐藥株和敏感株在表達adeB基因方面的差異。 【結(jié)果】 (1) 90株鮑曼不動桿菌中,對左氧氟沙星和加替沙星耐藥率分別為63.3%和60.0%。同源性分析可分成9種基因型。其中A型3株(3.33%)、B型40株(44.44%)、C型22株(24.44%)、D型5株(5.56%)、E型7株(7.78%)、F型2株(2.22%)、G型2株(2.22%)、H型7株(7.78%)、I型2株(2.22%)。其中以B型數(shù)目在各型中數(shù)目是最多的。 (2) 90株均擴增出了343 bp的gyrA基因和327bp的parC基因產(chǎn)物。9種基因型中,3種表型耐藥的基因型PCR產(chǎn)物經(jīng)DHPLC檢測均出現(xiàn)異常雙峰或者多峰。測序證實gyrA基因存在83位Ser→Leu突變,parC基因存在80位Ser→Leu突變,同時parC基因還存在3個位點的同義突變;敏感株運用DHPLC檢測只出現(xiàn)單峰,測序未發(fā)現(xiàn)突變。 (3)使用CCCP后,有71株MIC值出現(xiàn)不同程度的下降,其中16株出現(xiàn)泵表型陽性(耐藥株14株,敏感株2株)。90株逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后,有84株表達adeB基因。耐藥株中有96.7%(63/65)表達adeB基因,敏感株中有84.0%(21/25)表達adeB基因。 【結(jié)論】 (1)目前細菌對四代喹諾酮類藥物的耐藥情況已經(jīng)開始接近三代喹諾酮類藥物,值得臨床密切關(guān)注。 (2)2007年12月至2008年4月之間我院可能存在某一基因型鮑曼不動桿菌的感染流行。 (3)DHPLC在檢測耐藥基因突變方面具有高靈敏,經(jīng)濟快捷等優(yōu)點,具有廣泛的應(yīng)用前景。 (4)鮑曼不動桿菌對喹諾酮類藥物的耐藥與gyrA和parC基因的高頻突變密切相關(guān)。parC基因的3個位點的同義突變提示parC基因更易于發(fā)生突變。 (5)外排泵抑制劑可以增強喹諾酮藥物的抗菌活性,藥物的主動外排現(xiàn)象已經(jīng)普遍存在于臨床分離的鮑曼不動桿菌之中。 (6)主動外排作用是鮑曼不動桿菌產(chǎn)生耐藥的一個重要機制,其中adeB基因表達增強在細菌對喹諾酮類藥物耐藥方面起著重要作用。
【圖文】：

gyrA基因的DHPLC圖譜

19注： A、B、C為表型耐藥株，， D為敏感株圖4 parC基因的DHPLC圖譜3 株標(biāo)本 gyrA 基因的測序結(jié)果發(fā)現(xiàn)存在相同的突變位點，而存在相同的突變位點。其中 gyrA 基因 83 位氨基酸 TCA 中的氨基酸由絲氨酸(Ser)→亮氨酸(Leu)；parC 基因 80 位堿基 中的 C→T，導(dǎo)致絲氨酸(Ser)→亮氨酸(Leu)，另外 A、B、rC基因測序還存在3個位點的同義突變(71G→T,75T→C,81T
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R378.99

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 武大偉;魏殿軍;馬全玲;門昆;曹陽;;亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌由插入序列ISAba1點突變引起的bla_(OXA-23)表達減低[J];中國抗生素雜志;2011年05期

2 馬真;蔡紹曦;佟萬成;阮世沖;王輝;;耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌外排泵AdeABC的研究[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2011年08期

3 王曉成;王景紅;蘇鳳成;;基層醫(yī)院外科病房610例患者感染細菌分析[J];河北北方學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版);2011年04期

4 ;本刊2011年第10期專題:病原菌及耐藥株檢測[J];軍醫(yī)進修學(xué)院學(xué)報;2011年09期

5 張蕓;劉明濤;盛美艷;李玉;;苯丙氨酸-精氨酸-β-萘酰胺對泛耐藥銅綠假單胞菌作用的體內(nèi)外研究[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2011年11期

6 許亞豐;王春新;陳國千;耿先龍;趙琪;周麗珍;糜祖煌;;泛耐藥鮑氏不動桿菌攜帶多種轉(zhuǎn)座子與插入序列[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2011年13期

7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

相關(guān)會議論文 前10條

1 曹陽;馬全玲;魏殿軍;趙猛;;天津地區(qū)鮑曼不動桿菌喹諾酮類耐藥基因分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中國醫(yī)院協(xié)會臨床檢驗管理專業(yè)委員會第六屆全國臨床檢驗實驗室管理學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

2 李先平;王敏;秦章順;曹虹;;鮑曼不動桿菌的喹諾酮類耐藥基因突變的分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中華醫(yī)學(xué)會檢驗分會成立30周年慶典大會資料匯編[C];2009年

3 黃艷飛;王俊瑞;顧海彤;尚欣榮;曹晶晶;王玫;魯辛辛;;醫(yī)院爆發(fā)流行泛耐藥鮑曼不動桿菌關(guān)鍵因素分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中國醫(yī)院協(xié)會臨床檢驗管理專業(yè)委員會第六屆全國臨床檢驗實驗室管理學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

4 羅宇芬;賴偉華;潘夢瑩;;院內(nèi)鮑曼不動桿菌感染及臨床用藥分析[A];2008第十一次全國臨床藥理學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2008年

5 孫立穎;黃磊;徐國賓;夏鐵安;;碳氫霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌流行株的改變[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中國醫(yī)院協(xié)會臨床檢驗管理專業(yè)委員會第六屆全國臨床檢驗實驗室管理學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

6 盧雅敏;鄒安慶;侯佳惠;費靜嫻;郭美艷;周鐵麗;;頭孢哌酮/舒巴坦對鮑曼不動桿菌體外藥敏試驗結(jié)果評價[A];2011年浙江省檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2011年

7 史莉;;130株鮑曼不動桿菌的分布及耐藥性分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中華醫(yī)學(xué)會檢驗分會成立30周年慶典大會資料匯編[C];2009年

8 唐吉斌;翁偉;周東升;吳志平;;多重耐藥鮑曼不動桿菌外排泵基因表達的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中國醫(yī)院協(xié)會臨床檢驗管理專業(yè)委員會第六屆全國臨床檢驗實驗室管理學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

9 董琳;張同強;王志遠;李海燕;;兒童耐碳青霉烯類抗生素鮑曼不動桿菌感染的臨床及耐藥性分析[A];2011年浙江省醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會學(xué)術(shù)年會暨兒內(nèi)科疾病診治新進展國家級學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2011年

10 劉天祥;薛曉東;張永明;;燒傷病房鮑曼不動桿菌質(zhì)粒介導(dǎo)的16S rRNA甲基化酶基因及耐藥性傳遞研究[A];中華醫(yī)學(xué)會燒傷外科學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 宋秀全;注意合理應(yīng)用第4代喹諾酮類抗菌藥[N];健康報;2005年

2 通訊員朱水英 記者李水根;鮑曼不動桿菌研究獲多項創(chuàng)新成果[N];健康報;2010年

3 ;關(guān)注喹諾酮類藥品的不良反應(yīng)[N];中國醫(yī)藥報;2011年

4 陳國東;喹諾酮類市場欣欣向榮[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

5 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院教授羅學(xué)宏;喹諾酮類用藥八不宜[N];大眾衛(wèi)生報;2002年

6 祝建芳邋朱水英 特約記者 俞欣;鮑曼不動桿菌存在新耐藥基因[N];健康報;2008年

7 實習(xí)記者 羅敏賢;規(guī)范使用,挽救喹諾酮[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2011年

8 陶慶春;警惕鮑曼不動桿菌[N];健康報;2006年

9 健康網(wǎng) 周健;喹諾酮類低價徘徊反彈需時機[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2009年

10 特約撰稿 蔡德山;降價大勢下喹諾酮類爭鋒依舊[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 符一騏;中國部分地區(qū)鮑曼不動桿菌多位點序列分型及碳青霉烯類抗生素耐藥機制研究[D];浙江大學(xué);2012年

2 陳威震;多重耐藥鮑曼不動桿菌的分子流行病學(xué)和耐藥相關(guān)機制的研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院;2011年

3 閆中強;多重耐藥鮑曼不動桿菌基因組多態(tài)性及耐藥基因組的研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院;2011年

4 許攀峰;多重耐藥鮑曼不動桿菌基因組與“耐藥島”的比較基因組學(xué)研究[D];浙江大學(xué);2012年

5 劉丁;鮑曼不動桿菌醫(yī)院感染流行病學(xué)調(diào)查及耐藥機制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2002年

6 邵宜波;枸櫞酸桿菌中質(zhì)粒介導(dǎo)喹諾酮耐藥基因的分子生物學(xué)特征及qnrB24基因分析[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2012年

7 王悅;泛耐藥鮑曼不動桿菌臨床株W61耐藥與播散機制的基因組學(xué)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

8 王明華;qnr介導(dǎo)細菌對喹諾酮類耐藥機制的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

9 皮博睿;多重耐藥菌消毒劑抗性和精氨酸代謝移動元件研究[D];浙江大學(xué);2009年

10 馬真;鮑曼不動桿菌對碳青霉烯類藥物耐藥機制和分子流行病學(xué)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 周云;多種外排泵抑制劑逆轉(zhuǎn)鮑曼不動桿菌耐藥性的研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2011年

2 袁星;臨床分離鮑曼不動桿菌對氟喹諾酮類抗菌藥物的耐藥性檢測和耐藥基因研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2010年

3 郭普;蚌埠地區(qū)鮑曼不動桿菌醫(yī)院感染流行病學(xué)調(diào)查及耐β-內(nèi)酰胺類藥物機制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2010年

4 賴智雙;重癥監(jiān)護病房鮑曼不動桿菌醫(yī)院感染危險因素的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

5 張秀麗;主動外排系統(tǒng)介導(dǎo)的鮑曼不動桿菌耐藥機制研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2010年

6 關(guān)曉宣;米諾環(huán)素與頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)合應(yīng)用多重耐藥鮑曼不動桿菌體外抗菌活性的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2010年

7 王臨英;抗菌藥物聯(lián)合對泛耐藥鮑曼不動桿菌體外和體內(nèi)抗菌作用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

8 蔣顏;碳青霉烯耐藥鮑曼不動桿菌對多粘菌素B耐藥機制研究[D];浙江大學(xué);2010年

9 趙媛媛;多重耐藥銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌耐藥基因研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

10 楊培洪;耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌OXA酶基因及調(diào)控研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2010年

本文編號：2526991