【摘要】： 流行性感冒是由流感病毒(influenza virus)感染引起的一種呼吸道疾病,能感染人和多種動(dòng)物,其特點(diǎn)是短期突然爆發(fā),迅速流行,并具有廣泛的破壞性。目前防治流感的最有效方法是接種流感疫苗。市面上所用的流感疫苗是以雞胚為基質(zhì)生產(chǎn)的滅活疫苗。使用雞胚生產(chǎn)流感疫苗存在許多需要改進(jìn)的方面,比如不利于應(yīng)對(duì)大規(guī)模流感爆發(fā)等問(wèn)題。限于雞胚生產(chǎn)流感疫苗的局限性,開(kāi)發(fā)細(xì)胞流感疫苗稱為當(dāng)務(wù)之急。Vero細(xì)胞是WHO積極推薦用于流感疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞基質(zhì),能夠利用生物反應(yīng)器進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng),在流感疫苗生產(chǎn)上有著廣闊的應(yīng)用前景。但Vero細(xì)胞不是流感病毒的天然易感細(xì)胞,因此獲得流感病毒Vero細(xì)胞高產(chǎn)適應(yīng)株對(duì)于流感疫苗的生產(chǎn)具有重要意義。 本實(shí)驗(yàn)利用傳統(tǒng)的流感病毒重配方法,制備Vero細(xì)胞適應(yīng)性高產(chǎn)的H1N1流感病毒株,試圖解決以Vero細(xì)胞為基質(zhì)制備流感疫苗病毒產(chǎn)量低等瓶頸問(wèn)題。以流感病毒Vero細(xì)胞適應(yīng)株A/yunnan/1/2005Va(H3N2)為母本株與WHO推薦的2007-2008年度北半球流感疫苗生產(chǎn)用毒株A/Caledonia/20/99(H1N1)共同感染SPF雞胚和Vero細(xì)胞,重配病毒用抗A/yunnan/1/2005Va(H3N2)抗體篩選,在Vero細(xì)胞連續(xù)傳代12代,血凝抑制試驗(yàn)、免疫熒光、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)表明重配病毒為H1N1;RT-PCR擴(kuò)增后基因序列分析證明含有A/Caledonia/20/99(H1N1)的HA和NA。將重配病毒在Vero細(xì)胞上大量培養(yǎng),經(jīng)甲醛滅活,制備滅活疫苗,免疫動(dòng)物觀察其免疫原性。結(jié)果表明:獲得了一株Vero細(xì)胞適應(yīng)性的高產(chǎn)的H1N1流感病毒株,免疫原性與重配前的毒株沒(méi)有顯著性差異。通過(guò)流感病毒Vero細(xì)胞適應(yīng)株與流行株的重配和抗體篩選,可以獲得流行株流感病毒Vero細(xì)胞適應(yīng)株。
【圖文】：

證明其亞型確實(shí)為HINI，其HA序列與習(xí)Caledonl暇側(cè)99〔HINI)的HA序列完全相同，Maxident為1的%。NA序列與川Caledoul暇0/99(HINI)的NA序列相比僅216位一個(gè)堿基的差別，其相似性結(jié)果見(jiàn)圖6和圖7和圖8。圖‘.HA的序列在NCBI上BL銘T后結(jié)果 Rg6J七 eresultof11Asequeneea飯 rBLASTontheNCBI鐘毗翻娜如詢，妙i團(tuán)t吐妙.切:險(xiǎn)比地妞昌協(xié)即比沈抽必)麟.姚哄姚吼叭叭吼叭然吼叭姚姚叭叭熱姚憋吼幼勃叨叨勁叻叻叻幼幼叻叻助咖叻叻助知0.0叻濺眼叭濺眠眼濺濺呱濺濺濺濺濺濺眠鵬眠鵬濺一洲洲洲蹦蹦淵附麒附粼蒯娜魏瀚朋洲泌朋泌姍一絲塑塑絲洲一一一一泌那珊一珊塑一姍溯l腺l鯉堡些鯉些絲塑}絲迎迷渾巡彭}夔!絲址}旦巡叁}迷遨墜退1巡衛(wèi)西退}旦塑邀‘例塑矍醚l雨抽流能例物以向的咖}襯以娜扮儷哪!而棲A毗閣腸的她鋤娜洲)}洲耐衣。二1而油八髓閣儷的網(wǎng)瞰洲陰協(xié)卿耐4袱】血翔人附例靦幽目勿璐批肛)!!抓叻靦l而抽4柑例儷流樹(shù)卿l洲繃1))靦喇?dāng)鄋1而抽A能閃靦的網(wǎng)腳側(cè)l}}恤剛咖扭I雨姻人能(確日黝側(cè)卸呀均州繃In娜俄41’1雨.人毗潮.湯側(cè)目】田1，，蝴m1)}物例毛渝她碑附傭儷創(chuàng)1班剛川ID加姍咖而網(wǎng)1雨抽A毗隨耐網(wǎng)叨料月叫】娜側(cè)謐4，蒯… 11翻厄人毗(叭剛己心洲酬甩月1}!蜘時(shí)氣咖比1雨她A皿蜘喇.耐瀏洲出川物時(shí)毛咖山l而煙盛皿倆枷悶1習(xí)酬附徽})姍以毛四咖l血翔盛秘閃樹(shù)咖喇喇出川物翻4，咖曲喻翻.人腿{珊翻蒯2引訓(xùn)H洲}黝耐氣溯曉l面翔典皿}習(xí)柑甄蒯萬(wàn)繃姍”洲m以氣枷海l胡謂.A髓姍蜘闊酬?duì)N晰徹喊4，咖海1確腳.A毗沁咐幽南娜2叫洲叫}翎帥以氣耐1雨翻A毗閃訓(xùn)咖tyil叫酬川功卿鄺以峨訓(xùn)I涌峪如A撇例湯臼成的州到圳棍腳鋤獻(xiàn)4，墨黔置儷一巡﨏繼一﨑一﨑一﨑一
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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