【摘要】： 脂肪組織是生物體內(nèi)最大的儲(chǔ)能組織,而且也是十分活躍的脂肪代謝的主要器官。近年來的研究發(fā)現(xiàn),脂肪組織作為一個(gè)十分重要的內(nèi)分泌器官,能夠分泌許多細(xì)胞因子和細(xì)胞因子樣分子,如:瘦素(leptin)、脂聯(lián)素(adiponectin)、抵抗素(resistin)等脂肪細(xì)胞因子(adipocytokines)。這些脂肪細(xì)胞因子通過內(nèi)分泌或旁分泌方式對(duì)全身各器官系統(tǒng)功能具有重要調(diào)節(jié)作用,特別是參與調(diào)節(jié)與肥胖相關(guān)的胰島素抵抗和葡萄糖代謝紊亂。 成肌作用是一個(gè)復(fù)雜并受到高度調(diào)控的過程,包括細(xì)胞周期阻滯和肌肉特異性轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)。骨骼肌已經(jīng)被確定作為一個(gè)主要的糖代謝組織。肌細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì),作為一種重要的能量來源,在運(yùn)動(dòng)中提供線粒體氧化所需要的能量。越來越多的研究證明,肌細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過度積累與胰島素抵抗明顯呈正相關(guān)。研究脂肪-骨骼肌之間的對(duì)話(crosstalk)對(duì)闡明骨骼肌胰島素抵抗的發(fā)生的機(jī)理有重要的意義。 脂聯(lián)素是近年來新發(fā)現(xiàn)的一個(gè)脂肪細(xì)胞因子,脂聯(lián)素由脂肪細(xì)胞分泌后進(jìn)入血液,以多種形式在血液中循環(huán)。脂聯(lián)素球狀區(qū)在體內(nèi)獨(dú)立存在,與完整的脂聯(lián)素功能相似。脂聯(lián)素能夠促進(jìn)肌肉脂肪酸氧化、降低血漿甘油三酯、通過增強(qiáng)胰島素的敏感性而促進(jìn)葡萄糖代謝。 本研究采用Real-Time PCR和細(xì)胞轉(zhuǎn)染等技術(shù),研究了肌細(xì)胞成肌過程中細(xì)胞脂肪含量情況,脂聯(lián)素對(duì)該過程的影響,促卵泡生成素對(duì)AdipoR1的表達(dá)調(diào)控,豬APPL1和APPL2基因的克隆和生物學(xué)特性等進(jìn)行了研究,結(jié)果如下: 1.以C2C12成肌細(xì)胞為研究模型,添加2%馬血清作為誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基,用油紅O染色的方法對(duì)C2C12在成肌過程細(xì)胞內(nèi)脂肪含量進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)在這個(gè)過程中,細(xì)胞內(nèi)脂肪含量急劇減少 2.用Real-Time PCR的方法,研究了在C2C12成肌過程中,糖脂代謝相關(guān)基因以及脂聯(lián)素受體相關(guān)基因的mRNA表達(dá)模式,證明了C2C12成肌過程中,肌細(xì)胞脂肪含量的減少是由于脂肪酸氧化增加,合成減少導(dǎo)致;并發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素受體的表達(dá)模式與成肌過程有相關(guān)性。 3.用基因轉(zhuǎn)染的方法,證實(shí)脂聯(lián)素參與了成肌過程脂肪含量減少的過程,并證明了脂聯(lián)素通過增加脂肪酸氧化途徑,而不是水解和合成途徑參與上述過程。 4.通過同源分析比較,以人的APPL1和APPL2基因序列為參照,運(yùn)用RT-PCR的方法,獲得了豬APPL1和APPL2基因;以豬的心、肝、脾和肺等10個(gè)組織樣品作為研究材料,通過定量PCR分析獲得了豬APPL1和APPL2的組織表達(dá)譜;通過電子定位的方法進(jìn)行APPL1和APPL2的染色體定位。 5.用重組人促卵泡生成素刺激體外培養(yǎng)的3T3-L1細(xì)胞和C2C12細(xì)胞,并用Real-Time PCR的方法,證明了FSH在5ng/ml時(shí)能夠增加AdipoR1 mRNA表達(dá)水平;在NIH3T3細(xì)胞中,FSH對(duì)AdipoR1的表達(dá)具有相反的作用。
【圖文】：

常重要的意義。脂肪細(xì)胞能夠分泌大量細(xì)胞因子，脂聯(lián)素和瘦素己經(jīng)被證明能夠增加脂肪酸氧化并減少肌肉脂肪含量，因此增加肌肉胰島素敏感性(圖1)，而另外兩種脂肪細(xì)胞因子，resistin和TNF一a顯示了能夠促進(jìn)胰島素抵抗 (Dyeketal.，2006)，MCp一l能夠誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞和肌細(xì)胞胰島素抵抗 (Selletal.，2006)，RBP一4能夠促進(jìn)體內(nèi)胰島素抵抗(、認(rèn) ngetal.，2005)。以前研究認(rèn)為

FigZDomainstruetureofhumanadiPoneetin.脂聯(lián)素在在血漿中含量很高，，在健康人血漿中達(dá)到1.gmg/ml一17.om歲m1(Aritaetal.，1999)。位于非同源區(qū)的Cys36對(duì)脂聯(lián)素形成六聚體非常重要(圖2)。脂聯(lián)素單體與另一個(gè)單體之間形成二硫鍵，然后與第三個(gè)單體形成三聚體，最后第三個(gè)單體通過自身的cys36與另一個(gè)三聚體形成六聚體。HMW由非共價(jià)鍵連接，但依賴于完整的六聚體形成。另外，對(duì)脂聯(lián)素的高級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，脂聯(lián)素球狀區(qū)的高級(jí)結(jié)構(gòu)與TNF家族蛋白質(zhì)很相似(盡管一級(jí)結(jié)構(gòu)沒有同源性)，說明二者在進(jìn)化上有一定的親緣關(guān)系 (shapiroandscherer，1998)。1.5脂聯(lián)素受體基因1.5.1脂聯(lián)素受體的發(fā)現(xiàn)丫功lauchi等用脂聯(lián)素的球狀結(jié)構(gòu)域(gAD)篩選骨骼肌表達(dá)文庫(kù)發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素有兩個(gè)受體AdiPoRI和AdipoRZ(Y初 rnauchietal.，2003)，受體1和2都含有七個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R341

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本文編號(hào)：2522831