【摘要】：目的:擴增hRev7綠色熒光質(zhì)粒,,轉(zhuǎn)染N2A細(xì)胞和神經(jīng)元細(xì)胞,并初步探討hRev7對神經(jīng)元的凋亡的作用機制。 方法:通過細(xì)菌接種,感受態(tài)細(xì)胞的制備,質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化,搖菌擴增,提取質(zhì)粒,在熒光拍照系統(tǒng)中看其條帶,并用分光光度儀對其純度進(jìn)行測試,擴增構(gòu)建于綠熒光載體于PEGFP-1中hRev7,培養(yǎng)N2A細(xì)胞,Lipofectamin2000瞬時轉(zhuǎn)染N2A細(xì)胞,Annexin V-APC標(biāo)記凋亡細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測hRev7對細(xì)胞凋亡的影響。 結(jié)果:(1)通過通過細(xì)菌接種,感受態(tài)細(xì)胞的制備,質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化,搖菌擴增,提取到較高純度的的質(zhì)粒。(2)利用含hRev7帶綠熒光的質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染N2A細(xì)胞后通過流式細(xì)胞檢測儀檢測,轉(zhuǎn)染pEGFP—N1—hRev7的細(xì)胞,凋亡率為14.8,而轉(zhuǎn)染pEGFP—N1的細(xì)胞其凋亡率為6.5,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析,差異具有顯著性(p0.05),不拒絕原假設(shè),即實驗組凋亡率與對照組凋亡率差異有顯著性。數(shù)據(jù)結(jié)果顯示與對照空白質(zhì)粒組相比較hRev7促進(jìn)了細(xì)胞的凋亡。 結(jié)論:擴增PEGFP-hRev7質(zhì)粒,通過流式檢測表明,瞬時轉(zhuǎn)染hRev7,能促進(jìn)N2A細(xì)胞的凋亡,為進(jìn)一步的研究唐氏綜合癥及hRev7對神經(jīng)元的凋亡影響機制奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2519209