【摘要】： 為了發(fā)掘出在活化巨噬細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的過程中,發(fā)揮主要介導(dǎo)作用的效應(yīng)分子,我們利用質(zhì)譜技術(shù)分別對BCG活化和TGC誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞膜蛋白進(jìn)行了鑒定。通過對兩組蛋白的比較和分析,我們得到了421個差異表達(dá)在BCG活化巨噬細(xì)胞的膜蛋白。然后,我們按照GO分類標(biāo)準(zhǔn)對各個蛋白分子的功能預(yù)測進(jìn)行了注釋,其中42個成員被鑒定為亞細(xì)胞定位在細(xì)胞質(zhì)膜上的膜蛋白。其余分子功能分布廣泛,從細(xì)胞組成到代謝組分等等。 我們進(jìn)而對所鑒定出的差異性膜蛋白進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。通過聚類分析、表達(dá)模式分析及表達(dá)模式關(guān)系預(yù)測等研究手段,我們發(fā)現(xiàn),這些分子中的大部分,在巨噬細(xì)胞中的表達(dá)水平都隨著活化時(shí)間的延長表現(xiàn)出上調(diào)表達(dá)的趨勢。并且,這些蛋白相互間的表達(dá)模式相關(guān)性非常復(fù)雜,幾乎每一種蛋白的表達(dá)變化都與多種其它蛋白的表達(dá)變化緊密相關(guān)。 本研究鑒定出的大量活化相關(guān)蛋白分子,為深入研究巨噬細(xì)胞活化機(jī)制及腫瘤細(xì)胞殺傷機(jī)制積累了必要的數(shù)據(jù)資料。作為下一階段對目標(biāo)蛋白進(jìn)行功能研究的初始階段,我們選取了一個全新蛋白INATase。通過構(gòu)建其重組表達(dá)載體,我們獲得了一定量的重組蛋白,并制備了兔血清多克隆抗體。為了檢測這一蛋白在活化巨噬細(xì)胞中的表達(dá)情況,我們進(jìn)行了活化巨噬細(xì)胞的免疫組織化學(xué)鑒定,初步證實(shí)了INATase在活化巨噬細(xì)胞中的存在。為下一步進(jìn)行活化巨噬細(xì)胞功能機(jī)制的研究奠定了一定的基礎(chǔ)。 對于活化巨噬細(xì)胞的基因水平變化,已有相關(guān)的研究結(jié)果。本研究首次從轉(zhuǎn)錄水平和蛋白質(zhì)組水平兩個方面對巨噬細(xì)胞活化過程中的大分子變化進(jìn)行了分析和研究,鑒定出相當(dāng)數(shù)量的膜蛋白分子,進(jìn)一步豐富了巨噬細(xì)胞膜蛋白數(shù)據(jù)庫,并成功獲得了一個有潛在研究價(jià)值的重組蛋白。本研究不但為巨噬細(xì)胞接觸依賴性殺傷機(jī)制及巨噬細(xì)胞活化的研究提供了大量非常有價(jià)值的資料,而且為后續(xù)工作提供了一種可靠的研究思路和可行的研究模式。
【圖文】：

第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果噬細(xì)胞膜蛋白的分離與質(zhì)譜分析取的活化巨噬細(xì)胞膜蛋白進(jìn)行 SDS-PAGE，每個道加樣 150μ干凈刀片將蛋白泳道平均切成 8 份，分別收集每份膠條，置于酶解。用 LCQ Deca XP system 對酶解的肽段進(jìn)行分析，采用，得到 16 套質(zhì)譜數(shù)據(jù)，待用。用 SEQUEST 軟件對小鼠數(shù)據(jù) 16 套檢索結(jié)果。SDS-PAGE 結(jié)果和從每個膠條中鑒定出的蛋

得到的質(zhì)譜數(shù)據(jù)用 BuiltSummary 軟件生成蛋白鑒定結(jié)果文件。通過比較分析 BCG 活化和 TGC 誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)，可以得到在 BCG 活化巨噬細(xì)胞中差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。在肽指紋圖譜檢索時(shí)，蛋白使用的是 IPI 編號，由于同一個蛋白質(zhì)在 IPI 數(shù)據(jù)庫中可能存在多個不同的編號，不利于比較分析，因此我們將蛋白的 IPI 編號通過檢索 MGI（Mouse Genome Infomatics，，www.informatics.jax.org/）數(shù)據(jù)庫轉(zhuǎn)換為 MGI 編號。比較分析表明，與對照組 TGC 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞膜蛋白組分相比較，共有 421個蛋白質(zhì)差異表達(dá)在 BCG 活化巨噬細(xì)胞膜組分中，見表 3.1。為進(jìn)一步了解這些蛋白質(zhì)的功能相關(guān)信息，我們用基因本體（Gene Ontology, GO）分析了 BCG 活化巨噬細(xì)胞差異表達(dá)蛋白，結(jié)果見圖 3.2。GO 分析發(fā)現(xiàn)，這些蛋白主要參與了轉(zhuǎn)運(yùn)（Transport），代謝相關(guān)（Protein and DNA/RNAmetabolism）和信號傳導(dǎo)（Signal transduction）等功能。其中還包括一部分參與細(xì)胞粘附（Cell adhesion）和細(xì)胞間通信（cell-cell signaling）的相關(guān)蛋白。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R392

【共引文獻(xiàn)】

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1 李瀚e

本文編號：2519176