【摘要】： 為了發(fā)掘出在活化巨噬細胞殺傷腫瘤細胞的過程中,發(fā)揮主要介導作用的效應(yīng)分子,我們利用質(zhì)譜技術(shù)分別對BCG活化和TGC誘導的小鼠巨噬細胞膜蛋白進行了鑒定。通過對兩組蛋白的比較和分析,我們得到了421個差異表達在BCG活化巨噬細胞的膜蛋白。然后,我們按照GO分類標準對各個蛋白分子的功能預測進行了注釋,其中42個成員被鑒定為亞細胞定位在細胞質(zhì)膜上的膜蛋白。其余分子功能分布廣泛,從細胞組成到代謝組分等等。 我們進而對所鑒定出的差異性膜蛋白進行了生物信息學分析。通過聚類分析、表達模式分析及表達模式關(guān)系預測等研究手段,我們發(fā)現(xiàn),這些分子中的大部分,在巨噬細胞中的表達水平都隨著活化時間的延長表現(xiàn)出上調(diào)表達的趨勢。并且,這些蛋白相互間的表達模式相關(guān)性非常復雜,幾乎每一種蛋白的表達變化都與多種其它蛋白的表達變化緊密相關(guān)。 本研究鑒定出的大量活化相關(guān)蛋白分子,為深入研究巨噬細胞活化機制及腫瘤細胞殺傷機制積累了必要的數(shù)據(jù)資料。作為下一階段對目標蛋白進行功能研究的初始階段,我們選取了一個全新蛋白INATase。通過構(gòu)建其重組表達載體,我們獲得了一定量的重組蛋白,并制備了兔血清多克隆抗體。為了檢測這一蛋白在活化巨噬細胞中的表達情況,我們進行了活化巨噬細胞的免疫組織化學鑒定,初步證實了INATase在活化巨噬細胞中的存在。為下一步進行活化巨噬細胞功能機制的研究奠定了一定的基礎(chǔ)。 對于活化巨噬細胞的基因水平變化,已有相關(guān)的研究結(jié)果。本研究首次從轉(zhuǎn)錄水平和蛋白質(zhì)組水平兩個方面對巨噬細胞活化過程中的大分子變化進行了分析和研究,鑒定出相當數(shù)量的膜蛋白分子,進一步豐富了巨噬細胞膜蛋白數(shù)據(jù)庫,并成功獲得了一個有潛在研究價值的重組蛋白。本研究不但為巨噬細胞接觸依賴性殺傷機制及巨噬細胞活化的研究提供了大量非常有價值的資料,而且為后續(xù)工作提供了一種可靠的研究思路和可行的研究模式。
【圖文】：

第三章 實驗結(jié)果第三章 實驗結(jié)果噬細胞膜蛋白的分離與質(zhì)譜分析取的活化巨噬細胞膜蛋白進行 SDS-PAGE，每個道加樣 150μ干凈刀片將蛋白泳道平均切成 8 份，分別收集每份膠條，置于酶解。用 LCQ Deca XP system 對酶解的肽段進行分析，采用，得到 16 套質(zhì)譜數(shù)據(jù)，待用。用 SEQUEST 軟件對小鼠數(shù)據(jù) 16 套檢索結(jié)果。SDS-PAGE 結(jié)果和從每個膠條中鑒定出的蛋

得到的質(zhì)譜數(shù)據(jù)用 BuiltSummary 軟件生成蛋白鑒定結(jié)果文件。通過比較分析 BCG 活化和 TGC 誘導的蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)，可以得到在 BCG 活化巨噬細胞中差異表達的蛋白質(zhì)。在肽指紋圖譜檢索時，蛋白使用的是 IPI 編號，由于同一個蛋白質(zhì)在 IPI 數(shù)據(jù)庫中可能存在多個不同的編號，不利于比較分析，因此我們將蛋白的 IPI 編號通過檢索 MGI（Mouse Genome Infomatics，，www.informatics.jax.org/）數(shù)據(jù)庫轉(zhuǎn)換為 MGI 編號。比較分析表明，與對照組 TGC 誘導巨噬細胞膜蛋白組分相比較，共有 421個蛋白質(zhì)差異表達在 BCG 活化巨噬細胞膜組分中，見表 3.1。為進一步了解這些蛋白質(zhì)的功能相關(guān)信息，我們用基因本體（Gene Ontology, GO）分析了 BCG 活化巨噬細胞差異表達蛋白，結(jié)果見圖 3.2。GO 分析發(fā)現(xiàn)，這些蛋白主要參與了轉(zhuǎn)運（Transport），代謝相關(guān)（Protein and DNA/RNAmetabolism）和信號傳導（Signal transduction）等功能。其中還包括一部分參與細胞粘附（Cell adhesion）和細胞間通信（cell-cell signaling）的相關(guān)蛋白。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R392

【共引文獻】

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1 李瀚e

本文編號：2519176