【摘要】：目的:探討腫瘤壞死因子-α(TNF-α)對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)凋亡的影響。方法:分離培養(yǎng)大鼠BMSCs,經(jīng)成骨、成脂誘導(dǎo)分化鑒定后,分別用濃度為0、20、40μg/L的TNF-α對(duì)其進(jìn)行刺激。24 h后,通過細(xì)胞活性檢測(cè)觀察不同濃度TNF-α對(duì)BMSCs的活性影響;Tunel染色觀察不同濃度TNF-α對(duì)BMSCs凋亡的影響;Western blot檢測(cè)不同濃度TNF-α刺激后,BMSCs中Bax、Bcl-2蛋白的表達(dá)量。結(jié)果:BMSCs經(jīng)體外培養(yǎng)擴(kuò)增后,成骨、成脂鑒定均為陽(yáng)性。臺(tái)盼藍(lán)染色、Tunel染色結(jié)果顯示,隨TNF-α濃度增高,BMSCs的死亡率增高,細(xì)胞凋亡率則呈濃度依賴性增高(P0.05);Western blot結(jié)果顯示,隨TNF-α濃度增高,BMSCs中Bax表達(dá)逐漸增加,Bcl-2表達(dá)逐漸降低(P0.05)。結(jié)論:TNF-α可誘導(dǎo)BMSCs的凋亡。
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圖片說明： s)進(jìn)行單因素方差分析(one－wayANOVA)，兩兩比較用SNK檢驗(yàn);檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0．05。2結(jié)果2．1BMSCs細(xì)胞培養(yǎng)和鑒定倒置顯微鏡觀察可見，原代培養(yǎng)的大鼠BM-SCs呈梭形或不規(guī)則的多邊形，可貼壁生長(zhǎng)，并有若干集落形成(生長(zhǎng)形態(tài)類似于旋渦狀)。第3代BMSCs經(jīng)成骨誘導(dǎo)14、21d后，分別進(jìn)行堿性磷酸酶染色及茜素紅染色，其結(jié)果均為陽(yáng)性(圖1a、b);經(jīng)成脂誘導(dǎo)14d后，可見脂滴形成(圖1c)，油紅O染色結(jié)果為陽(yáng)性(圖1d)。a．成骨誘導(dǎo)14d后ALP染色b．成骨誘導(dǎo)21d后茜素紅染色c．成脂誘導(dǎo)14d脂滴形成情況d．成脂誘導(dǎo)14d油紅O染色圖1BMSCs成骨、成脂誘導(dǎo)分化鑒定結(jié)果(×100)2．2細(xì)胞活性檢測(cè)結(jié)果臺(tái)盼藍(lán)可穿透變性的細(xì)胞膜，并通過與解體的DNA結(jié)合而使其著色(藍(lán)染);而活細(xì)胞因能阻止臺(tái)盼藍(lán)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，故不著色。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，20、40μg/L的TNF－α均能明顯降低BMSCs的細(xì)胞活性，分別與0μg/L相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);其中以40μg/L組的細(xì)胞活性降低最明顯，與20μg/L組相比，差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)(圖2)。2．3Tunel染色觀察結(jié)果熒光顯微鏡下可見，凋亡細(xì)胞呈紅色熒光，并隨著TNF－α濃度的升高，紅色熒光率逐漸增加(圖3)。各組細(xì)胞的凋亡率以40μg/L組最高，0μg/L組最低，各組間兩兩相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)(圖4)。*與0μg/L組相比P＜0．05;#與20μg/L組相比P＜0．05圖2不同濃度TNF－α對(duì)BMSCs細(xì)胞活力影響的比較圖3各組BMSCs經(jīng)Tunel染色后熒光顯微鏡觀察(箭頭示凋亡細(xì)胞)(×200)牙體牙髓牙周病學(xué)雜志(ChinJConservDent)2015，25(7)·393·
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圖片說明： 為陽(yáng)性(圖1d)。a．成骨誘導(dǎo)14d后ALP染色b．成骨誘導(dǎo)21d后茜素紅染色c．成脂誘導(dǎo)14d脂滴形成情況d．成脂誘導(dǎo)14d油紅O染色圖1BMSCs成骨、成脂誘導(dǎo)分化鑒定結(jié)果(×100)2．2細(xì)胞活性檢測(cè)結(jié)果臺(tái)盼藍(lán)可穿透變性的細(xì)胞膜，并通過與解體的DNA結(jié)合而使其著色(藍(lán)染);而活細(xì)胞因能阻止臺(tái)盼藍(lán)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，故不著色。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，20、40μg/L的TNF－α均能明顯降低BMSCs的細(xì)胞活性，分別與0μg/L相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);其中以40μg/L組的細(xì)胞活性降低最明顯，與20μg/L組相比，差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)(圖2)。2．3Tunel染色觀察結(jié)果熒光顯微鏡下可見，凋亡細(xì)胞呈紅色熒光，并隨著TNF－α濃度的升高，紅色熒光率逐漸增加(圖3)。各組細(xì)胞的凋亡率以40μg/L組最高，0μg/L組最低，各組間兩兩相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)(圖4)。*與0μg/L組相比P＜0．05;#與20μg/L組相比P＜0．05圖2不同濃度TNF－α對(duì)BMSCs細(xì)胞活力影響的比較圖3各組BMSCs經(jīng)Tunel染色后熒光顯微鏡觀察(箭頭示凋亡細(xì)胞)(×200)牙體牙髓牙周病學(xué)雜志(ChinJConservDent)2015，25(7)·393·
【作者單位】： 北京武警總醫(yī)院口腔醫(yī)學(xué)中心;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所全軍細(xì)胞與再生醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：武警總醫(yī)院二類課題基金項(xiàng)目(WZ20130209)
【分類號(hào)】：R329.2

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2516221