【摘要】：目的：對采自云南大理3縣市6地域的人體帶絳蟲標(biāo)本,運用形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)方法,鑒定該地區(qū)的帶絳蟲種類,為亞洲帶絳蟲具體的分類定位提供參考依據(jù),并為云南省帶絳蟲病和囊蟲病的防治提供科學(xué)依據(jù)。 方法：(1)形態(tài)學(xué)鑒定：選取云南大理3縣市6地域帶絳蟲成蟲的頭節(jié)、成節(jié)和孕節(jié)節(jié)片,采用鹽酸卡紅和孔雀綠溶液進(jìn)行染色,與豬帶絳蟲和傳統(tǒng)牛帶絳蟲比較,對云南大理帶絳蟲的種類進(jìn)行初步的形態(tài)學(xué)鑒定。(2)分子生物學(xué)鑒定：從云南大理3縣市6地域采集人體帶絳蟲標(biāo)本株成蟲節(jié)片,抽提蟲體基因組DNA, PCR擴(kuò)增線粒體DNA細(xì)胞色素B (mtDNA-Cytb)的部分序列,并測序；結(jié)合GenBank中已知的豬帶絳蟲、牛帶絳蟲和亞洲帶絳蟲mtDNA-Cytb序列,應(yīng)用DNAMAN (Version 5.2.2)軟件對各標(biāo)本測序結(jié)果進(jìn)行同源性分析,計算遺傳距離并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹狀圖。 結(jié)果：(1)由形態(tài)學(xué)分析結(jié)果顯示,云南大理洱源、大理市雙廊和挖色地區(qū)帶絳蟲標(biāo)本的頭節(jié)均略呈方形,具有四個吸盤,未見頂突和小鉤；成節(jié)卵巢分兩葉,即左右兩葉；孕節(jié)的子宮分支大致對稱,每側(cè)約13～20支。與報道的亞洲帶絳蟲相似。(2)根據(jù)PCR擴(kuò)增后mtDNA-Cytb序列測序結(jié)果,大理洱源、大理市雙廊和挖色地區(qū)的帶絳蟲標(biāo)本與GenBank中的亞洲帶絳蟲序列基本一致,同源性分別為99%和100%；大理鶴慶地區(qū)帶絳蟲標(biāo)本與豬帶絳蟲同源性為99%。構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹顯示：EY2、WS及EY1、SL、DY共5個標(biāo)本株與YZ聚為一支,屬于亞洲帶絳蟲；DL與ND聚為一支,屬于牛帶絳蟲；HQ1-3與ZD聚為一支,屬于豬帶絳蟲；亞洲帶絳蟲和牛帶絳蟲兩支交匯后再與豬帶絳蟲匯合。 結(jié)論：(1)云南大理洱源、云南大理市存在亞洲帶絳蟲,云南大理鶴慶存在豬帶絳蟲。豬帶絳蟲和亞洲帶絳蟲在云南大理地區(qū)有分布區(qū)域上的重疊性。(2)mtDNA-Cytb序列分析在鑒定不同種類的帶絳蟲標(biāo)本中顯示出了有效性。
[Abstract]:Objective: to identify the species of tapeworm in Dali, Yunnan Province by means of morphology and molecular biology, so as to provide reference for the classification and localization of tapeworm in Asia. It also provides scientific basis for the prevention and control of tapeworm and cysticercosis in Yunnan Province. Methods: (1) morphological identification: the head segments, adult segments and pregnant segments of Taenia solium were selected from 6 counties and cities of Dali, Yunnan Province, and stained with kahong hydrochloric acid and malachite green solution, which were compared with Taenia solium and traditional Taenia solium. The species of Taenia solium in Dali belt of Yunnan Province were identified by morphology. (2) Molecular biological identification: adult ganglia tablets of human tapeworm specimens were collected from 3 counties and 6 areas of Dali, Yunnan Province, and the genomic DNA, of Taenia solium was extracted. The partial sequence of mitochondrial DNA cytochrome B (mtDNA-Cytb) was amplified by PCR and sequenced. Based on the known mtDNA-Cytb sequences of Taenia solium, Taenia solium and Taenia solium in GenBank, the homology of the sequencing results of each specimen was analyzed by DNAMAN (Version 5.2.2) software, the genetic distance was calculated and the phylogenetic dendrogram was constructed. Results: (1) the results of morphological analysis showed that the head segments of tapeworm specimens in Dali Eryuan, Dali City and Dali area were slightly square, with four suckers, no apical process and hook, and the ovaries were divided into two leaves, that is, left and right leaves. The uterine branches of the gestational node are approximately symmetrical, with about 13 and 20 branches on each side. It is similar to the reported Asian tapeworm. (2) according to the sequencing results of mtDNA-Cytb sequence after PCR amplification, the tapeworm samples from Dali Eryuan, Dali Shuanglang and Dali area are basically consistent with the Asian Taeniasis sequence in GenBank. The homology was 99% and 100%, respectively. The homology between tapeworm specimens and Taenia solium in Dali Heqing area was 99%. The constructed phylogenetic trees showed that five strains of EY2,WS and EY1,SL,DY were aggregated into one strain with YZ, belonging to Asian tapeworm, one from DL and ND, one from Taenia solium, one from HQ1-3 and ZD, and one from Taenia solium. Asian tapeworm and Taenia solium meet with Taenia solium. Conclusion: (1) Asian tapeworm exists in Dali Eryuan, Yunnan Province, and Taenia solium exists in Dali Heqing, Yunnan Province. The overlap of Taenia solium and Taenia solium in Dali area of Yunnan Province. (2) mtDNA-Cytb sequence analysis showed that it was effective in the identification of different species of tapeworm.
【學(xué)位授予單位】：大理學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R383.32

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本文編號：2484632