GILZ在脂肪細(xì)胞分化中的作用及其調(diào)節(jié)機(jī)制研究
發(fā)布時(shí)間:2019-05-24 17:22
【摘要】: 脂肪細(xì)胞是哺乳動(dòng)物的一類(lèi)重要功能細(xì)胞,在維持脂類(lèi)代謝及能量代謝平衡方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。前脂肪細(xì)胞分化為成熟脂肪細(xì)胞是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程,這一過(guò)程受到許多轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞因子以及激素的調(diào)節(jié)。脂肪細(xì)胞分化與調(diào)控失?蓪(dǎo)致人類(lèi)多種疾病如肥胖癥、2型糖尿病、脂肪肝、高脂血癥及乳腺癌等。前脂肪細(xì)胞的增殖和分化過(guò)程可能是研究肥胖癥發(fā)生機(jī)制的核心,同時(shí)對(duì)前脂肪細(xì)胞的增殖和分化過(guò)程的研究還可以有助于尋找減肥藥物作用的靶點(diǎn)。因此,在細(xì)胞和分子水平上對(duì)脂肪細(xì)胞分化調(diào)控機(jī)制研究,對(duì)探討上述重大生命和疾病過(guò)程、探索預(yù)防與治療的新途徑具有重要理論意義和應(yīng)用價(jià)值。 糖皮質(zhì)激素(glucocorticoid, GC)誘導(dǎo)亮氮酸拉鏈蛋白(glucocorticoid induced leucine zipper, GILZ)被報(bào)道是一種糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)蛋白,具有炎癥抑制、促護(hù)T細(xì)胞凋亡等多項(xiàng)作用。糖皮質(zhì)激素具有誘導(dǎo)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和凋亡等多種功能,被認(rèn)為是較好的抗炎及免疫抑制劑,已廣泛用于多種疾病的治療,如關(guān)節(jié)炎、肺氣腫、哮喘、器官抑制排斥反應(yīng)等。但重要的是長(zhǎng)期的使用糖皮質(zhì)激素,會(huì)加速骨的丟失導(dǎo)致骨質(zhì)疏松,取而代之的是骨髓脂肪細(xì)胞數(shù)量的增加。報(bào)道初步顯示GILZ可能通過(guò)抑制脂肪發(fā)生而拮抗糖皮質(zhì)激素的作用,在GC作用當(dāng)中起了負(fù)反饋?zhàn)饔。GILZ屬于亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄因子家族成員,一些研究還表明GILZ可作為一種轉(zhuǎn)錄抑制因子,與NF-KB(nuclear transcription factor kappa B, NF-κB)、轉(zhuǎn)錄因子活化蛋白-1(activator protein-1, AP-1)直接作用后參與抑制基因表達(dá),參與了Fas/FasL、NF-κB、Ap1、Raf21等多條信號(hào)通路的信號(hào)傳遞。 在脂肪細(xì)胞形成過(guò)程中,作為細(xì)胞相關(guān)信號(hào)通路作用靶點(diǎn)的轉(zhuǎn)錄因子,過(guò)氧化物增殖活化受體(Peroxisome Proliferative Activated Receptor,PPARs)家族和CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白家族(CCAAT/enhance binding proteins, C/EBPs)起了重要的作用。PPARγ屬于能與靶基因調(diào)節(jié)區(qū)特異DNA反應(yīng)元件結(jié)合的核激素受體轉(zhuǎn)錄因子家族,由于啟動(dòng)子和拼接方式不同,有PPARγ1、PPARγ2及PPARγ3三種亞型。PPARγ2主要表達(dá)于脂肪組織,在脂肪細(xì)胞分化的早期就表達(dá),是對(duì)脂肪細(xì)胞分化具有決定性作用的一個(gè)異構(gòu)體。PPARγ2可以激活一系列脂肪代謝必需基因,包括脂蛋白脂酶(Lipoprotein lipase,LPL)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(Phosphoenolpyruvate Carboxykinase, PEPCK)、脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)與結(jié)合蛋白(Fatty acid binding protein, FABP)、硬脂酰輔酶A去飽和酶-1(Stearoyl CoA desat urease-1, SCD-1)等,在這些基因的啟動(dòng)子區(qū)都發(fā)現(xiàn)有功能性的PPAR反應(yīng)元件。另一類(lèi)重要的脂肪細(xì)胞分化轉(zhuǎn)錄因子C/EBPs,它有C/EBPα, C/EBPβ和c/EBPδ等幾種異構(gòu)體,都能促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化。C/EBPα可能介導(dǎo)GILZ在前脂肪細(xì)胞分化中的作用,同PPARγ2可以相互激活轉(zhuǎn)錄,啟動(dòng)脂肪細(xì)胞的分化。 GILZ作為一種重要的信號(hào)蛋白分子和核轉(zhuǎn)錄因子是否參與了脂肪細(xì)胞的分化,是否通過(guò)C/EBPα和PPARγ2的介導(dǎo)等分子機(jī)制還不十分清楚。因此,有關(guān)GILZ在脂肪細(xì)胞分化中的作用及其機(jī)制的闡明,將對(duì)預(yù)防和治療肥胖及2型糖尿病具有重要的意義。 本文共分三部分對(duì)GILZ在脂肪細(xì)胞分化中的作用及其機(jī)制作初步探討。 1)常規(guī)構(gòu)建HA-GILZ/PcDNA3重組真核表達(dá)載體、進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)表達(dá)定位;聯(lián)合3-異丁基-1-甲基-黃嘌呤(3-isobutyl-1-methyl-xanthine, MIX)、地塞米松和胰島素誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞,摸索建立脂肪細(xì)胞分化模型;脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染3T3-L1細(xì)胞,G418篩選轉(zhuǎn)染細(xì)胞,建立HA-GILZ穩(wěn)定、高表達(dá)的3T3-L1前脂肪細(xì)胞細(xì)胞系。主要是為探討GILZ的生物學(xué)功能提供基因和細(xì)胞研究工具。 2)比較GILZ對(duì)前脂肪細(xì)胞增殖、前脂肪細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)特異性著色、甘油三酯相對(duì)含量及脂肪細(xì)胞分化相關(guān)基因PPARγ2, C/EBPα, LPL和FAS的mRNA表達(dá)的影響。在細(xì)胞和基因mRNA表達(dá)水平探討GILZ的生物學(xué)作用及機(jī)制。 3)初步分析C/EBP和AP-1順式作用元件在GILZ抑制PPARγ2啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性中的作用,在DNA轉(zhuǎn)錄順式作用元件分子調(diào)控水平研究GILZ的作用機(jī)制。 第一部分GILZ真核表達(dá)載體的構(gòu)建、表達(dá)定位,穩(wěn)定高表達(dá)GILZ的3T3-L1前脂肪細(xì)胞株的克隆 目的: 克隆、構(gòu)建HA標(biāo)簽的糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)亮氨酸拉鏈蛋白GILZ真核表達(dá)載體,觀察其在細(xì)胞中表達(dá)與定位,建立3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化模型及GILZ穩(wěn)定高表達(dá)株,為研究GILZ在脂肪細(xì)胞分化中的作用提供基因和細(xì)胞工具。 方法: 1.采用逆轉(zhuǎn)錄PCR (RT-PCR)法從C3H10T1/2多能干細(xì)胞中擴(kuò)增GILZ cDNA編碼區(qū),并將其重組于帶有HA標(biāo)簽的真核表達(dá)載體PcDNA3中。BamHⅠ/XhoⅠ雙酶切、DNA測(cè)序鑒定HA-GILZ/PcDNA3重組表達(dá)載體。 2.采用lipofectamine 2000脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HA-GILZ/PcDNA3重組表達(dá)載體至C3H10T1/2多能干細(xì)胞;采用CaCl2方法瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HA-GILZ/PcDNA3重組表達(dá)載體至293T細(xì)胞。 3.采用HA-GILZ/PcDNA3重組表達(dá)載體通過(guò)lipofectamine 2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染3T3-L1細(xì)胞,采用G418篩選HA-GILZ穩(wěn)定表達(dá)的3T3-L1前脂肪細(xì)胞細(xì)胞系。 4.轉(zhuǎn)染48h后,采用免疫熒光檢測(cè)GILZ在C3H10T1/2多能干細(xì)胞和3T3-L1前脂肪細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)、分布定位;采用免疫印跡法檢測(cè)GILZ在293T細(xì)胞和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HA-GILZ/PcDNA3的3T3-L1前脂肪細(xì)胞系內(nèi)的穩(wěn)定表達(dá)及分子量大小。 5.用含0.5 mmol/L 3-異丁基-1-甲基-黃嘌呤(MIX)、10μg/ml胰島素和0.25μmol/L地塞米松的脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)劑(MID)誘導(dǎo)3T3-Ll前脂肪細(xì)胞分化,用油紅0染色法觀測(cè)脂肪細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)特異性著色及測(cè)定甘油三酯相對(duì)含量。 結(jié)果: 1.HA-GILZ/PcDNA3重組表達(dá)載體經(jīng)酶切鑒定和測(cè)序分析確認(rèn)構(gòu)建成功。進(jìn)一步免疫熒光顯示GILZ在C3H10T1/2細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核都有表達(dá),但主要表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)。免疫印跡法檢測(cè)在轉(zhuǎn)染HA-GILZ/PcDNA3重組載體的293T和3T3-Ll細(xì)胞中有一特異的分子量約20kD的蛋白條帶,獲得了高效的表達(dá)。 2.3T3-L1前脂肪細(xì)胞經(jīng)MID誘導(dǎo)的第3天開(kāi)始,細(xì)胞內(nèi)可以觀察到反光的脂質(zhì)小滴,并隨著分化的進(jìn)展越來(lái)越多的細(xì)胞出現(xiàn)脂質(zhì)小滴。到了第9天,脂肪細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)有大量圓形脂滴,而正常生長(zhǎng)細(xì)胞無(wú)脂滴。油紅0染色顯示分化的3T3-L1脂肪細(xì)胞胞漿中脂滴呈桔紅色。與未含MID培養(yǎng)基對(duì)照組相比,甘油三酯相對(duì)含量顯著增加(0.139±0.022 vs 0.356±0.014,t=14.521,p=0.000)。 3.將該HA-GILZ/PcDNA3重組表達(dá)載體通過(guò)lipofectamine 2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染3T3-L1細(xì)胞后,經(jīng)G418篩選的3T3-L1細(xì)胞,免疫熒光和免疫印跡均顯示有GILZ高表達(dá),并且跟C3H10T1/2細(xì)胞一樣,GILZ也主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)。 小結(jié): 1.成功構(gòu)建和表達(dá)HA-GILZ/PcDNA3重組表達(dá)載體,為GILZ的功能研究提供了穩(wěn)定的基因工具。 2.實(shí)驗(yàn)表明GILZ主要定位表達(dá)于C3H10T1/2和3T3-Ll細(xì)胞質(zhì)中。 3.成功地誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞的分化,并成功建立穩(wěn)定、高表達(dá)的3T3-L1細(xì)胞克隆,為GILZ的功能研究提供了穩(wěn)定的細(xì)胞工具。 第二部分:GILZ對(duì)前脂肪細(xì)胞增殖、脂肪細(xì)胞分化及相關(guān)基因表達(dá)的影響 目的: 觀測(cè)GILZ對(duì)3T3-Ll前脂肪細(xì)胞增殖、分化的作用,研究GILZ對(duì)脂肪細(xì)胞分化相關(guān)標(biāo)志基因PPARγ2, C/EBPα, LPL和FAS mRNA表達(dá)的影響,探討GILZ調(diào)節(jié)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的分子機(jī)制。 方法: 1.采用MTT法,從第1天到第11天,每隔2天檢測(cè)GILZ穩(wěn)定表達(dá)3T3-L1細(xì)胞細(xì)胞的增殖情況。 2.油紅0染色觀察GILZ過(guò)表達(dá)對(duì)脂肪細(xì)胞分化和甘油三酯相對(duì)含量的影響。共分四組:1,轉(zhuǎn)染對(duì)照PcDNA3,沒(méi)有MID誘導(dǎo);2,轉(zhuǎn)染HA-GILZ/PcDNA3,沒(méi)有MID誘導(dǎo);3,轉(zhuǎn)染對(duì)照PcDNA3, MID誘導(dǎo)9天;4,轉(zhuǎn)染HA-GILZ/PcDNA3,MID誘導(dǎo)9天。 3.常規(guī)構(gòu)建GILZ-shRNA/pLentiLox 3.7(簡(jiǎn)稱(chēng)GILZ-shRNA)慢病毒重組載體、測(cè)序、lipofectamine 2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、293T細(xì)胞包裝、感染GILZ穩(wěn)定表達(dá)的3T3-L1細(xì)胞、實(shí)時(shí)熒光定量PCR (Real-time PCR)檢測(cè)脂肪細(xì)胞GILZ mRNA表達(dá)。 4.實(shí)時(shí)熒光定量PCR (Real-time PCR)法檢測(cè)脂肪細(xì)胞分化相關(guān)標(biāo)志基因PPARγ2、C/EBPα、LPL和FAS的mRNA表達(dá)。對(duì)于GILZ過(guò)表達(dá)共分二組:轉(zhuǎn)染PcDNA3對(duì)照空載體;轉(zhuǎn)染HA-GILZ/PcDNA3重組載體;對(duì)于GILZ沉默共分二組:感染pLentiLox 3.7空載體對(duì)照;感染GILZ-shRNA/pLentiLox 3.7重組載體。 結(jié)果: 1.MTT法檢測(cè)結(jié)果,在細(xì)胞增殖的第1、3、5、7、9、11天,轉(zhuǎn)染PcDNA3空載體對(duì)照組的OD值分別是:0.090±0.008,0.154±0.004,0.273±0.017,0.471±0.008,0.609±0.013,0.610±0.018;而穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HA-GILZ的OD值分別是:0.083±0.002,0.164±0.012,0.294±0.031,0.473±0.008,0.605±0.005,0.583±0.007。與對(duì)照組相比,GILZ過(guò)表達(dá)不能顯著促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的增殖(F=2.460,P=0.068),提示GILZ對(duì)脂肪細(xì)胞的增殖沒(méi)有明顯影響。 2. GILZ-shRNA/pLentiLox 3.7測(cè)序結(jié)果與設(shè)計(jì)序列一致,將包裝的shRNA慢病毒感染至3T3-L1細(xì)胞,48h后熒光顯微鏡觀察,可見(jiàn)95%以上細(xì)胞呈綠色。GILZ-shRNA慢病毒感染至3T3-L1細(xì)胞48h后,在GILZ穩(wěn)定表達(dá)3T3-L1細(xì)胞內(nèi),以實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)GILZmRNA表達(dá),與pLentiLox 3.7空載體對(duì)照組相比,shRNA慢病毒基因沉默組GILZmRNA表達(dá)顯著降低(0.191±0.027 vs0.125±0.018,t=3.459,p=0.026) 3.3T3-L1細(xì)胞生長(zhǎng)融合48h后,用脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)基MID處理48h,然后換成10μg/ml胰島素的正常培養(yǎng)基(隔天換液)培養(yǎng)9天,油紅0染色顯示,與對(duì)照組相比,GILZ過(guò)表達(dá)組的桔紅色細(xì)胞大大的減少。用100%異丙醇溶解油紅0染色的細(xì)胞,500nm吸光波長(zhǎng)測(cè)定分化9天的脂肪細(xì)胞內(nèi)甘油三酯相對(duì)含量顯著降低(0.365±0.012 vs 0.181±0.014,F=80.023,P=0.000)。以GILZ-shRNA沉默GILZ表達(dá)能減少這種抑制作用,與對(duì)照組相比,甘油三酯相對(duì)含量顯著增加(0.184±0.027 vs 0.335±0.029,F=27.189,P=0.000)。 4.MID誘導(dǎo)后,實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)顯示,分化過(guò)程中GILZ過(guò)表達(dá)的3T3-L1細(xì)胞內(nèi)脂肪細(xì)胞分化基因PPARγ2, C/EBPα, LPL和FAS的mRNA表達(dá)顯著降低(分化第九天時(shí)分別為11.447±0.831 vs 1.173±0.290,17.700±0.915 vs1.557±0.384,67.057±5.288 vs 9.467±3.406,40.946±3.968 vs 4.967±1.091,P=0.000);而沉默GILZ表達(dá)卻能顯著增加這些基因的表達(dá)(1.056±0.275 vs6.162±0.432,1.500±0.644 vs 9.147±0.958,8.967±1.046 vs 45.127±2.585,4.518±1.143 vs 27.974±1.634,P=0.000)。 小結(jié): 1. GILZ對(duì)前脂肪細(xì)胞的增殖沒(méi)有明顯的影響。 2.制備的shRNA慢病毒能成功沉默GILZ的mRNA表達(dá)。 3. GILZ過(guò)表達(dá)或沉默可顯著性抑制或增加PPARγ2, C/EBPα, LPL和FAS的mRNA表達(dá),表明GILZ可能通過(guò)下調(diào)脂肪細(xì)胞分化轉(zhuǎn)錄因子PPARγ2, C/EBPα的表達(dá)而抑制脂肪細(xì)胞特異性基因LPL和FAS的表達(dá),進(jìn)而抑制脂肪細(xì)胞的分化。 4. GILZ可抑制C/EBPα的表達(dá)。 第三部分:C/EBP和AP-1順式作用元件在GILZ抑制PPARγ2啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性中的作用 目的: 通過(guò)分析C/EBP和AP-1順式作用元件在GILZ抑制PPARγ2啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的作用,探討GILZ抑制脂肪細(xì)胞的調(diào)控機(jī)制。 方法: 使用熒光素酶(Luciferase)雙報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)GILZ對(duì)PPARγ2啟動(dòng)子區(qū)各順式作用元件轉(zhuǎn)錄活性的影響。 1.分別用0.1μg-615/-265-Luc報(bào)告基因(涵蓋了PPARγ2啟動(dòng)子區(qū)的含C/EBP順式作用元件)、-265/-1-Luc報(bào)告基因(涵蓋了PPARγ2啟動(dòng)子區(qū)的含AP-1順式作用元件),同時(shí)轉(zhuǎn)染0.01μg pRL-SV40(起校正作用報(bào)告基因)、PcDNA3(對(duì)照)與HA-GILZ/PcDNA3不同比例的質(zhì)粒于3T3-L1細(xì)胞,48h后檢測(cè)熒光素酶活性。根據(jù)PcDNA3與HA-GILZ/PcDNA3不同比例,共分四組:1,對(duì)照組,0.45μg PcDNA3;2,0.30μg PcDNA3+0.15μg HA-GILZ/PcDNA3;3,0.15μg PcDNA3+0.30μg HA-GILZ/PcDNA3;4,0.45μg HA-GILZ/PcDNA3。 2.分別用0.1μg-615/-1-Luc(含C/EBP和AP-1的PPARγ2啟動(dòng)子區(qū)報(bào)告基因)、-615/-265-Luc、-265/-1-Luc,同時(shí)轉(zhuǎn)染0.01μg pRL-SV40、PcDNA3或0.45μg HA-GILZ/PcDNA3質(zhì)粒于3T3-L1細(xì)胞,48h后檢測(cè)熒光素酶活性。根據(jù)報(bào)告基因的不同,共分四組:1,對(duì)照組,0.45μg PcDNA3+0.1μg-615/-1-Luc;2, 0.45μg HA-GILZ/PcDNA3+0.1μg -615/-265-Luc;3, 0.45μg HA-GILZ/PcDNA3+0.1μg-265/-1-Luc;4,0.45μg HA-GILZ/PcDNA3+0.1μg-615/-1-Luc 結(jié)果: 1.Luciferce檢測(cè)顯示HA-GILZ可以顯著性降低含C/EBP順式作用元件的-615/-265-Luc報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄活性(46.353±3.267 vs 22.683±1.588,F=44.394,P=0.000),隨著GILZ量的增加而抑制作用增加。 2.Luciferce檢測(cè)顯示HA-GILZ可以顯著性降低含AP-1順式作用元件的-265/-1-Luc報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄活性(46.476±1.859 vs 29.039±1.639,F=18.293,P=0.001),隨著GILZ量的增加而抑制作用增加。 3.Luciferce檢測(cè)顯示HA-GILZ對(duì)含C/EBP順式作用元件的PPARγ2啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的抑制作用強(qiáng)于含AP-1順式作用元件的PPARγ2啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性(22.567±1.653 vs 29.121±0.934,F=211.57,P0.05),而含C/EBP和AP-1順式作用元件的PPARγ2啟動(dòng)子-615/-1-Luc轉(zhuǎn)錄活性比單獨(dú)的C/EBP或AP-1順式作用元件則更顯著性降低(14.157±0.527,P0.05)。 小結(jié): 1.C/EBP和AP-1順式作用元件二者在GILZ對(duì)PPARγ2啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的抑制作用中都起了明顯的作用。 2. C/EBP和AP-l順式作用元件在G工LZ抑制PPARγ2啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄作用中,C/EBP作用要強(qiáng)于AP-1。 3. C/EBP和AP-1順式作用元件在GILZ抑制PPARγ2啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄作用中,具有協(xié)同作用。 結(jié)論: 三部分實(shí)驗(yàn)總結(jié)如下: 1.成功構(gòu)建HA-GILZ/PcDNA3重組表達(dá)載體和建立GILZ穩(wěn)定表達(dá)的3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化模型。 2.免疫熒光顯示GILZ在C3H10T1/2和3T3-L1細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核均有表達(dá),但主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)。 3.實(shí)驗(yàn)表明GILZ對(duì)前脂肪細(xì)胞的增殖沒(méi)有明顯的影響,但可抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞的分化。這種抑制作用的機(jī)制之一可能是GILZ通過(guò)PPARγ2啟動(dòng)子上的C/EBP、AP-1元件參與抑制PPARγ2啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄,從而進(jìn)一步抑制了脂肪細(xì)胞分化相關(guān)基因PPARγ2,C/EBPα,LPL和FAS的mRNA表達(dá)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】:南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2010
【分類(lèi)號(hào)】:R329
本文編號(hào):2485040
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】:南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2010
【分類(lèi)號(hào)】:R329
【參考文獻(xiàn)】
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4 周旭華,郭錫熔,金子林,倪毓輝,潘曉勤,陳榮華;解偶聯(lián)蛋白4基因在3T3-L1脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化中的表達(dá)水平[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2004年08期
5 李春霖;肖_g君;龔燕平;田慧;陸菊明;母義明;李明;潘長(zhǎng)玉;;NF-kB抑制劑對(duì)胰島素抵抗大鼠抵抗素、脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體表達(dá)的影響[J];中華內(nèi)分泌代謝雜志;2006年03期
,本文編號(hào):2485040
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