【摘要】： 為了篩選微小隱孢子蟲黏附相關蛋白基因,提取微小隱孢子蟲總RNA并分離mRNA,通過反轉錄酶合成cDNA,將EcoRⅠ和HindⅢ粘性末端連到雙鏈cDNA的兩端,定向插入到T7 Select 10-3b載體,用包裝蛋白進行包裝并對初始文庫進行擴增,構建微小隱孢子蟲噬菌體展示文庫。用微小隱孢子蟲易感的Caco-2細胞和高免血清對構建好的文庫進行篩選,并對篩選得到的部分蛋白質進行定位。 本試驗構建的微小隱孢子蟲T7噬菌體展示文庫未擴增文庫的滴度為3.3×10~7pfu/mL,文庫容量為1.0×10~7個重組子,文庫重組率為94%,92%的插入片段大于300bp,擴增后文庫滴度為3.1×10~(10)pfu/mL。用Caco-2細胞篩選到5個微小隱孢子蟲黏附相關蛋白質,其中1個為已知蛋白質CP2,已有報道推測其參與子孢子與宿主上皮細胞的黏附過程。其余4個蛋白質功能未知。用微小隱孢子蟲高免血清篩選到3個蛋白質,其中1個為已知蛋白質CP2,另2個蛋白質功能未知。對篩選出來的兩個蛋白質基因(CP389和CP245)的部分編碼區(qū)進行原核表達,分別命名為rCP389和rCP245,通過免疫熒光定位證實,CP389和CP245在卵囊壁和子孢子表面均有表達,推測篩選得到的蛋白質可能參與了子孢子與宿主的黏附過程。本研究為揭示隱孢子蟲的致病機制提供了依據。
[Abstract]:In order to screen the adhesion related protein gene of Cryptosporidium parvum, the total RNA of Cryptosporidium parvum was extracted and mRNA, was isolated and the viscous ends of EcoR 鈪，

本文編號：2477004