【摘要】： 背景與目的: Cajal間質細胞原來被認為是僅存在于胃腸道的一種特殊類型細胞,起著起搏胃腸道慢波、傳遞電信號、介導腸神經(jīng)與平滑肌之間調(diào)節(jié)信號的作用,與病理狀態(tài)下的多種胃腸動力紊亂疾病(如便秘、假性腸道梗阻等)密切相關,是胃腸道平滑肌節(jié)律性收縮功能調(diào)節(jié)的重要因素。后來,在胃腸道外其他組織中發(fā)現(xiàn)了與胃腸道Cajal間質細胞免疫學特性相同、形態(tài)學特點相似的細胞,既往曾稱之為ICC樣細胞(ICC-like cells),目前已統(tǒng)稱為Cajal間質細胞(ICCs)。 生理情況下,輸尿管平滑肌具有與胃腸道十分相似的特點,即存在不依賴于神經(jīng)的自發(fā)性蠕動,但確切機制目前尚未闡明。目前已有的研究發(fā)現(xiàn),在豚鼠和人的全尿路均存在ICCs。有文獻報道,先天性腎盂輸尿管梗阻的患兒腎盂和輸尿管ICCs較正常兒童明顯減少,提示ICCs與輸尿管興奮起源和調(diào)控有密切關系。進一步研究ICCs在輸尿管自主收縮中的作用及其對神經(jīng)遞質的反應,有助于闡明ICCs在輸尿管平滑肌功能調(diào)控中的作用及其機制,為上尿路功能障礙性疾病的治療提供新的切入點。 本課題通過肌條實驗觀察離體的豚鼠輸尿管肌條,在使用非特異性M型膽堿能受體激動劑卡巴可前后自主收縮的變化,并在特異性阻斷ICCs功能后,觀察肌條的自主收縮及對卡巴可的反應是否發(fā)生改變,此外還應用免疫熒光雙標染色法檢測輸尿管ICCs上M受體亞型的表達情況,從而為闡明ICCs上M受體介導的膽堿能信號在輸尿管平滑肌自主收縮中的作用提供新的實驗依據(jù)。 方法: 實驗動物均采用清潔級健康Hartley豚鼠。(1)卡巴可對輸尿管平滑肌自主收縮的影響及ICCs在此影響中的作用:將20只豚鼠隨機分為正常對照組、阻斷ICCs組,每組10只。阻斷ICCs組的肌條檢測前平衡及檢測中均置于含終濃度10-4mol/L Glivec的Kreb’s液中,正常對照組置于不含Glivec的Kreb’s液中。取豚鼠左側輸尿管上段1.0cm組織制成離體平滑肌肌條,檢測其在終濃度為10-4mol/L卡巴可作用前后的自主收縮頻率和幅度。(2)輸尿管ICCs上M受體亞型的表達情況:通過c-kit+M1～M5免疫熒光雙標染色法檢測豚鼠輸尿管ICCs上M受體亞型的表達情況。 結果: (1)在一定前負荷(2.0g)下,加入1mol/L KCl溶液200μL可誘發(fā)正常對照組豚鼠的離體輸尿管平滑肌肌條出現(xiàn)自主收縮,頻率為(3.4±0.84)次/分,波幅為(0.105±0.0228)g。 (2)在肌條出現(xiàn)穩(wěn)定的自主收縮后,加入0.01mol/L卡巴可100μL,肌條自主收縮頻率為(4.9±0.88)次/分,較加藥前明顯增快(p0.01);而收縮幅度為(0.106±0.0210)g,較加藥前無明顯變化(p0.05)。 (3)用10-4mol/L Glivec平衡30分鐘、特異性阻斷ICCs后,同法進行檢測發(fā)現(xiàn),阻斷ICCs組的輸尿管肌條無自主收縮出現(xiàn),加入0.01mol/L卡巴可100μL仍無反應。 (4)免疫熒光雙標染色發(fā)現(xiàn),豚鼠輸尿管ICCs上表達M2、M3兩種M受體亞型。 結論: ICCs很可能是輸尿管平滑肌自主收縮興奮的起源,并通過M2、M3受體亞型接受膽堿能神經(jīng)的調(diào)控。
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【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R339.2

【參考文獻】

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本文編號：2469831