發(fā)布時(shí)間：2019-05-05 19:02

【摘要】： 背景與目的: Cajal間質(zhì)細(xì)胞原來被認(rèn)為是僅存在于胃腸道的一種特殊類型細(xì)胞,起著起搏胃腸道慢波、傳遞電信號、介導(dǎo)腸神經(jīng)與平滑肌之間調(diào)節(jié)信號的作用,與病理狀態(tài)下的多種胃腸動力紊亂疾病(如便秘、假性腸道梗阻等)密切相關(guān),是胃腸道平滑肌節(jié)律性收縮功能調(diào)節(jié)的重要因素。后來,在胃腸道外其他組織中發(fā)現(xiàn)了與胃腸道Cajal間質(zhì)細(xì)胞免疫學(xué)特性相同、形態(tài)學(xué)特點(diǎn)相似的細(xì)胞,既往曾稱之為ICC樣細(xì)胞(ICC-like cells),目前已統(tǒng)稱為Cajal間質(zhì)細(xì)胞(ICCs)。 生理情況下,輸尿管平滑肌具有與胃腸道十分相似的特點(diǎn),即存在不依賴于神經(jīng)的自發(fā)性蠕動,但確切機(jī)制目前尚未闡明。目前已有的研究發(fā)現(xiàn),在豚鼠和人的全尿路均存在ICCs。有文獻(xiàn)報(bào)道,先天性腎盂輸尿管梗阻的患兒腎盂和輸尿管ICCs較正常兒童明顯減少,提示ICCs與輸尿管興奮起源和調(diào)控有密切關(guān)系。進(jìn)一步研究ICCs在輸尿管自主收縮中的作用及其對神經(jīng)遞質(zhì)的反應(yīng),有助于闡明ICCs在輸尿管平滑肌功能調(diào)控中的作用及其機(jī)制,為上尿路功能障礙性疾病的治療提供新的切入點(diǎn)。 本課題通過肌條實(shí)驗(yàn)觀察離體的豚鼠輸尿管肌條,在使用非特異性M型膽堿能受體激動劑卡巴可前后自主收縮的變化,并在特異性阻斷ICCs功能后,觀察肌條的自主收縮及對卡巴可的反應(yīng)是否發(fā)生改變,此外還應(yīng)用免疫熒光雙標(biāo)染色法檢測輸尿管ICCs上M受體亞型的表達(dá)情況,從而為闡明ICCs上M受體介導(dǎo)的膽堿能信號在輸尿管平滑肌自主收縮中的作用提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法: 實(shí)驗(yàn)動物均采用清潔級健康Hartley豚鼠。(1)卡巴可對輸尿管平滑肌自主收縮的影響及ICCs在此影響中的作用:將20只豚鼠隨機(jī)分為正常對照組、阻斷ICCs組,每組10只。阻斷ICCs組的肌條檢測前平衡及檢測中均置于含終濃度10-4mol/L Glivec的Kreb’s液中,正常對照組置于不含Glivec的Kreb’s液中。取豚鼠左側(cè)輸尿管上段1.0cm組織制成離體平滑肌肌條,檢測其在終濃度為10-4mol/L卡巴可作用前后的自主收縮頻率和幅度。(2)輸尿管ICCs上M受體亞型的表達(dá)情況:通過c-kit+M1～M5免疫熒光雙標(biāo)染色法檢測豚鼠輸尿管ICCs上M受體亞型的表達(dá)情況。 結(jié)果: (1)在一定前負(fù)荷(2.0g)下,加入1mol/L KCl溶液200μL可誘發(fā)正常對照組豚鼠的離體輸尿管平滑肌肌條出現(xiàn)自主收縮,頻率為(3.4±0.84)次/分,波幅為(0.105±0.0228)g。 (2)在肌條出現(xiàn)穩(wěn)定的自主收縮后,加入0.01mol/L卡巴可100μL,肌條自主收縮頻率為(4.9±0.88)次/分,較加藥前明顯增快(p0.01);而收縮幅度為(0.106±0.0210)g,較加藥前無明顯變化(p0.05)。 (3)用10-4mol/L Glivec平衡30分鐘、特異性阻斷ICCs后,同法進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn),阻斷ICCs組的輸尿管肌條無自主收縮出現(xiàn),加入0.01mol/L卡巴可100μL仍無反應(yīng)。 (4)免疫熒光雙標(biāo)染色發(fā)現(xiàn),豚鼠輸尿管ICCs上表達(dá)M2、M3兩種M受體亞型。 結(jié)論: ICCs很可能是輸尿管平滑肌自主收縮興奮的起源,并通過M2、M3受體亞型接受膽堿能神經(jīng)的調(diào)控。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R339.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2469831