發(fā)布時(shí)間：2019-04-13 21:20

【摘要】： 研究背景和目的: 腎臟系膜是腎小球毛細(xì)血管袢之間重要的支持成分,由系膜細(xì)胞和系膜基質(zhì)組成。系膜細(xì)胞對(duì)保持毛細(xì)血管袢的開放并維持有效的。腎臟灌注和濾過(guò)有重要意義。系膜細(xì)胞的損傷可見于各種臨床腎臟疾病,并將會(huì)導(dǎo)致一系列病理變化,最終導(dǎo)致腎功能的衰竭。 近年的研究顯示骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)具有跨系分化成非造血細(xì)胞的能力,包括成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、心肌細(xì)胞、肝細(xì)胞、神經(jīng)元及星形膠質(zhì)細(xì)胞等。而既往研究表明,骨髓來(lái)源的細(xì)胞可以補(bǔ)充腎小球系膜細(xì)胞,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)和體外均有分化成為腎小球系膜細(xì)胞的潛能,從而成為腎損傷組織修復(fù)的細(xì)胞來(lái)源。 在腎小球毛細(xì)血管袢發(fā)育過(guò)程中,許多生長(zhǎng)因子與細(xì)胞因子參與其中并發(fā)揮重要作用。其中血小板源生長(zhǎng)因子(platelet-derived growth factor,PDGF)與系膜細(xì)胞的發(fā)育有確切相關(guān)證據(jù),PDGFB~(-/-)或PDGF受體(platelet-derivedgrowth factor receptor,PDGFR)β~(-/-)動(dòng)物模型中,腎小球毛細(xì)血管袢不發(fā)育,且缺乏系膜細(xì)胞。提示PDGFB/PDGFRβ對(duì)系膜細(xì)胞的招募具有重要意義。目前尚未見到BMSCs向。腎臟系膜細(xì)胞分化機(jī)制研究的相關(guān)報(bào)道,推測(cè)可能是通過(guò)干細(xì)胞表面的PDGFR的介導(dǎo),激活細(xì)胞內(nèi)各種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及分子,產(chǎn)生定向誘導(dǎo)分化作用。本研究選用的絲裂原活化蛋白激酶/細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase/external-signal regulated kinase,MAPK/ERK)途徑參與了胚胎發(fā)育、細(xì)胞分化、轉(zhuǎn)化和增殖的過(guò)程。且據(jù)目前資料顯示此信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)了BMSCs向其他種類細(xì)胞的定向誘導(dǎo)分化。本研究旨在證實(shí)PDGF-BB體外誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向腎臟系膜細(xì)胞分化的潛能,并初步探討MAPK/ERK途徑在此誘導(dǎo)分化過(guò)程中發(fā)揮的作用。 實(shí)驗(yàn)方法: 1、利用貼壁法獲取SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,體外培養(yǎng)增殖,用以PDGF-BB為主的培養(yǎng)體系對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化,觀察誘導(dǎo)分化細(xì)胞的生長(zhǎng)情況,并對(duì)其進(jìn)行形態(tài)學(xué)、系膜細(xì)胞高表達(dá)分子的檢測(cè)以及功能學(xué)鑒定。 2、在此誘導(dǎo)分化體系中,加入ERK活化阻斷劑PD98059,觀察細(xì)胞形態(tài)變化及其系膜細(xì)胞高表達(dá)分子mRNA的表達(dá)情況。 研究結(jié)果: 1、在PDGF-BB 7天的誘導(dǎo)分化作用下,約10%骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(占原始骨髓有核細(xì)胞0.1～0.5%)的細(xì)胞保持粘附在Ⅳ型膠原包被的培養(yǎng)皿底,分化為多角形的系膜細(xì)胞樣細(xì)胞,而對(duì)照組細(xì)胞仍保持長(zhǎng)梭形漩渦狀干細(xì)胞外觀。誘導(dǎo)分化組細(xì)胞的系膜細(xì)胞高表達(dá)分子α-Actin及Desmin免疫熒光染色呈陽(yáng)性,誘導(dǎo)分化組及對(duì)照組細(xì)胞的Ⅷ因子免疫熒光染色均呈陰性。培養(yǎng)7天的誘導(dǎo)分化組細(xì)胞α-Actin、Desmin、Thy-1、Myosin及Vimentin mRNA表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組(P＜0.05),誘導(dǎo)分化的細(xì)胞具備對(duì)血管緊張素Ⅱ刺激產(chǎn)生收縮反應(yīng)的功能。 2、經(jīng)PDGF-BB誘導(dǎo)分化7天的細(xì)胞,其PDGF受體(包括PDGFRα及PDGFRβ)mRNA表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。在此誘導(dǎo)分化體系中,加入MAPK/ERK1/2活化阻斷劑的細(xì)胞,保持了長(zhǎng)梭形的干細(xì)胞外觀,阻斷了大部分的系膜細(xì)胞高表達(dá)分子(α-Actin、Desmin、Thy-1及Myosin)mRNA的上調(diào)表達(dá),而對(duì)于Vimentin mRNA表達(dá)的影響不顯著。 研究結(jié)論: 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)PDGF-BB為主的誘導(dǎo)分化體系誘導(dǎo)后,可以分化為腎臟系膜細(xì)胞樣細(xì)胞,MAPK/ERK1/2介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在此誘導(dǎo)分化機(jī)制中發(fā)揮了重要作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R329

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本文編號(hào)：2457955