【摘要】：胚胎干細(xì)胞是從內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離得到的一群具有多向分化潛能和自我更新能力的細(xì)胞,發(fā)育上的全能性賦予其在臨床上廣泛的應(yīng)用前景。對(duì)胚胎干細(xì)胞全能性機(jī)制的研究是其在臨床上得以應(yīng)用的前提和基礎(chǔ)。Nanog在胚胎干細(xì)胞全能性的維持中起著至關(guān)重要的作用,為了更詳盡地研究Nanog在胚胎干細(xì)胞全能性維持中的作用,我們采用RNA干擾的方法,特異性地降低胚胎干細(xì)胞中Nanog的表達(dá),并觀察伴隨Nanog的表達(dá)下降J1細(xì)胞的變化。在本試驗(yàn)中,我們?cè)O(shè)計(jì)合成了四條針對(duì)Nanog的干擾片段,轉(zhuǎn)染J1細(xì)胞,利用RT-PCR、Real-Time PCR、Western印跡檢測(cè)各個(gè)片段對(duì)J1細(xì)胞中Nanog表達(dá)的影響。結(jié)果顯示,Nanog-P1對(duì)J1細(xì)胞中Nanog的干擾效率可達(dá)90%以上。Nanog表達(dá)下降后J1細(xì)胞中全能性相關(guān)基因utf1的表達(dá)顯著降低,而分化相關(guān)基因gata6的表達(dá)有明顯升高,說明Nanog在胚胎干細(xì)胞的全能性維持中起重要作用。
[Abstract]:Embryonic stem cells (es) are a group of cells with multidirectional differentiation potential and self-renewal ability, which are isolated from the inner cell mass. The developmental totipotency of embryonic stem cells gives it a wide range of application prospects in clinical practice. The research on the mechanism of embryonic stem cell totipotency is the premise and foundation of its clinical application. Nanog plays an important role in the maintenance of embryonic stem cell totipotency. In order to study the role of Nanog in maintaining totipotency of embryonic stem cells in detail, we used RNA interference method to specifically reduce the expression of Nanog in embryonic stem cells, and observe the changes of J1 cells accompanied by Nanog expression down-regulation. In this experiment, we designed and synthesized four interference fragments targeting Nanog and transfected J1 cells. The effects of each fragment on the expression of Nanog in J1 cells were detected by RT-PCR,Real-Time PCR,Western blot. The results showed that the interference efficiency of Nanog-P1 on Nanog in J1 cells was more than 90%. After the decrease of Nanog expression, the expression of totipotency-related gene utf1 in J1 cells was significantly decreased, while the expression of differentiation-related gene gata6 was significantly increased. These results suggest that Nanog plays an important role in maintaining totipotency of embryonic stem cells.
【作者單位】： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院血液學(xué)研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.30570357)~~
【分類號(hào)】：Q78

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本文編號(hào)：2452257