【摘要】：目的于漢遜酵母中表達(dá)腸道病毒71型(enterovirus 71,EV71)類病毒顆粒(virus-like particle,VLP),并分析其免疫原性。方法將鑒定正確的重組質(zhì)粒p MV-P1-3CD轉(zhuǎn)化漢遜酵母AU0501,經(jīng)篩選獲得穩(wěn)定整合P1和3CD基因的重組菌株p MV-P1-3CD/AU。30 L發(fā)酵罐培養(yǎng)重組菌株,發(fā)酵產(chǎn)物純化后進(jìn)行SDS-PAGE、Western blot、HPLC檢測(cè)、電鏡分析及動(dòng)態(tài)光散射分析檢測(cè)。采用不同方法制備EV71疫苗,分別免疫小鼠和家兔,檢測(cè)動(dòng)物血清中和抗體幾何平均滴度(GMT),評(píng)價(jià)其免疫原性及不同佐劑對(duì)疫苗免疫原性的影響。結(jié)果重組菌株p MV-P1-3CD/AU表達(dá)產(chǎn)物及疫苗原液的SDS-PAGE分析顯示,于相對(duì)分子質(zhì)量26 000、33 000和35 000處均可見VP3、VP1和VP0蛋白條帶,且相對(duì)分子質(zhì)量33 000的蛋白可與EV71-VP1單克隆抗體發(fā)生特異性結(jié)合;疫苗原液的純度達(dá)99%以上;電鏡觀察可見30 nm的VLP,顆粒均一度較好;小鼠血清GMT最高可達(dá)1 536,家兔血清GMT最高可達(dá)586,磷酸鋁佐劑及氫氧化鋁佐劑均可明顯提高小鼠血清GMT。結(jié)論于漢遜酵母中成功實(shí)現(xiàn)EV71的P1和3CD基因的共表達(dá),可形成EV71 VLP,且具有良好的免疫原性,為今后EV71 VLP疫苗的研制提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:Aim to express enterovirus 71 (enterovirus 71, EV 71) like virus granules (virus-like particle,VLP) in Hanson yeast and analyze its immunogenicity. Methods the recombinant strain pMV-P1-3CD/AU.30 L, which stably integrated P1 and 3CD genes, was obtained by transforming the recombinant plasmid p MV-P1-3CD into yeast AU0501,. The recombinant strain with stable integration of P1 and 3CD genes was cultured in fermentor. After purification, the fermentation products were detected by SDS-PAGE,Western blot,HPLC, electron microscopy and dynamic light scattering analysis. EV71 vaccines were prepared by different methods and immunized mice and rabbits respectively. The geometric mean titers of neutralizing antibodies in serum of mice and rabbits were detected to evaluate the immunogenicity of the vaccines and the effects of different adjuvant on the immunogenicity of the vaccines. Results SDS-PAGE analysis of the recombinant strain p-MV-P1-3CD/AU expression product and vaccine solution showed that the VP3,VP1 and VP0 protein bands were found at 26 000, 33 000 and 35 000 relative molecular weight. The protein with relative molecular weight of 33 000 could specifically bind to EV71-VP1 monoclonal antibody. The purity of the original vaccine solution was over 99%, and the VLP, particles of 30 nm were found to be good at one degree under electron microscope. The highest serum GMT in mice was 1536, and the highest GMT in rabbits was 586. Both aluminum phosphate adjuvant and aluminum hydroxide adjuvant could significantly increase the serum GMT. in mice. Conclusion the co-expression of P1 and 3CD genes of EV71 in Hanson yeast can form EV71 VLP, and have good immunogenicity, which provides experimental basis for the development of EV71 VLP vaccine in the future.
【作者單位】： 北京民海生物科技有限公司研發(fā)中心;
【分類號(hào)】：R392

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