【摘要】：目的通過(guò)革蘭陰性菌LPS(脂多糖,Lipopolyssacride,LPS)預(yù)處理體外培養(yǎng)大腦皮質(zhì)小膠質(zhì)細(xì)胞,模擬輕型細(xì)菌感染,嘗試建立體外LPS耐受模型,探討小膠質(zhì)細(xì)胞促炎細(xì)胞因子分泌反應(yīng)的變化情況。方法體外培養(yǎng)與分離小鼠大腦皮質(zhì)小膠質(zhì)細(xì)胞,免疫熒光法進(jìn)行純度鑒定。純化的小膠質(zhì)細(xì)胞分為未刺激對(duì)照組、0.01μg/m L LPS單次刺激組、1μg/m L LPS刺激組、預(yù)處理組(先采用0.01μg/m L LPS刺激18h后,再用1μg/m L LPS刺激6、24、48h)。處理后收獲各組細(xì)胞培養(yǎng)上清,采用ELISA法檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞TNF-α、IL-6分泌水平與變化趨勢(shì)。結(jié)果經(jīng)過(guò)LPS處理的小膠質(zhì)細(xì)胞(0.01μg/m L LPS單次刺激組、1μg/m L LPS單次刺激組與預(yù)處理組)TNF-α與IL-6分泌增加,但預(yù)處理組在經(jīng)過(guò)1μg/m L LPS再次刺激不同時(shí)間點(diǎn)(6h、24 h、48 h)分泌的總體水平變化不大(P0.05)。在6 h,1μg/m L單次刺激組、預(yù)處理組的TNF-α與IL-6水平比對(duì)照組水平明顯升高,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);在48 h,TNF-α水平在1μg/m L單次刺激組、預(yù)刺激組中也較對(duì)照組水平明顯升高(P0.01)。另外,在LPS預(yù)處理24h與48h后,TNF-α水平較1μg/m L單次刺激組均有下降趨勢(shì),其中在48h,預(yù)刺激組較1μg/m L單次刺激組分泌減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但I(xiàn)L-6水平預(yù)刺激組較1μg/m L單次刺激組分泌具有增加趨勢(shì)。結(jié)論體外LPS預(yù)處理可在小膠質(zhì)細(xì)胞中誘導(dǎo)部分耐受效應(yīng),表現(xiàn)為某些關(guān)鍵炎性細(xì)胞因子的分泌抑制,但并非是一種全面的抑制,這可能與細(xì)胞來(lái)源以及信號(hào)通路分子的重新調(diào)配有關(guān)。
[Abstract]:Objective to culture cerebral cortex microglia by LPS (lipopolysaccharide (Lipopolyssacride,LPS), to simulate mild bacterial infection, and to establish a model of LPS tolerance in vitro. To investigate the changes of inflammatory cytokine secretion in microglia. Methods Mouse cerebral cortex microglia cells were cultured and isolated in vitro and purified by immunofluorescence. The purified microglia were divided into three groups: unstimulated control group, 0. 01 渭 g / mL LPS single stimulation group, 1 渭 g / mL LPS stimulation group, pretreatment group (0. 01 渭 g / mL LPS for 18 h, then 1 渭 g / mL LPS for 6? 24 h). After treatment, the supernatants of each group were harvested and the levels and trends of TNF- 偽 and IL-6 secretion in microglia cells were detected by ELISA assay. Results the secretion of TNF- 偽 and IL-6 was increased in LPS treated microglia (0. 01 渭 g / mL LPS, 1 渭 g / mL LPS single stimulation and pretreatment group). But in pretreatment group, the total level of secretion was not changed at different time points (6 h ~ 24 h ~ 48 h) after 1 渭 g / mL LPS stimulation (P0.05). The levels of TNF- 偽 and IL-6 in preconditioning group were significantly higher than those in control group at 6 h after 1 渭 g / mL single stimulation (P0.05). The level of TNF- 偽 in 1 渭 g / mL single stimulation group and prestimulation group was significantly higher than that in control group at 48 h (P0.01). In addition, after pretreatment with LPS for 24 h and 48 h, the level of TNF- 偽 decreased compared with that of 1 渭 g / mL single stimulation group, and at 48 h, the secretion of TNF- 偽 in prestimulation group was significantly lower than that in 1 渭 g / mL single stimulation group (P0.05). However, the secretion of IL-6 in prestimulation group was higher than that in 1 渭 g / mL prestimulation group. Conclusion LPS pretreatment in vitro can induce partial tolerance in microglia, which is shown by the inhibition of the secretion of some key inflammatory cytokines, but it is not a comprehensive inhibition. This may be related to cell sources and signal pathway molecules reassignment.
【作者單位】： 汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院;汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)與免疫學(xué)教研室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.81001340,No.81471622) 廣東省醫(yī)學(xué)科研基金項(xiàng)目(No.B2010211) 廣東省優(yōu)秀青年教師培訓(xùn)計(jì)劃(No.Yq2013079) 汕頭市科技計(jì)劃(No.2013-88)
【分類號(hào)】：R329.2

【共引文獻(xiàn)】

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10 薛e，

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