【摘要】：本實(shí)驗(yàn)以副溶血弧菌為研究對(duì)象,分以下兩方面進(jìn)行研究: 一,副溶血弧菌分別在低溫逆境和饑餓逆境條件下的表性變化和基因表達(dá)變化情況 副溶血弧菌是一種重要的食源性致病菌,其基因組中各類基因的功能尚未完全明確,在不同的條件下其各類基因的表達(dá)狀況也不清楚。 三種不同基因型的副溶血弧菌8G、ATCC33847、ATCC17802在4℃低溫條件下處理后出現(xiàn)相似的表面形態(tài)變化。菌體從中心某點(diǎn)開(kāi)始向內(nèi)凹陷,菌體外壁隨之向內(nèi)翻卷。但這種凹陷不同于常見(jiàn)的空癟現(xiàn)象,菌體除了中心向內(nèi)翻卷以外,其余部位均相對(duì)飽滿,類似于甜甜圈的形狀。隨著處理時(shí)間增加,細(xì)胞外壁褶皺趨于平滑,最終松散潰破,呈粘膜狀脫落。三種副溶血弧菌在冷處理初期,細(xì)胞骨架類基因(MreB, FtsZ和MinE)表達(dá)上調(diào),這是導(dǎo)致菌體細(xì)胞出現(xiàn)上述表型變化的原因之一;同時(shí)與細(xì)胞抗逆性相關(guān)的抗氧化蛋白基因Ahpc也有輕微上調(diào),說(shuō)明冷處理會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)活性氧含量經(jīng)生變化。細(xì)胞代謝類基因(EF-TU和Gapd)在冷處理初期的變化均不明顯,說(shuō)明短時(shí)間的低溫環(huán)境不會(huì)影響細(xì)胞的代謝水平。 三種副溶血桿菌經(jīng)寫?zhàn)囸I處理(完全缺失碳源和氮源)后表現(xiàn)出完全不同的形態(tài)變化。8G對(duì)饑餓逆境的抵抗能力最強(qiáng),ATCC33847次之,ATCC17802最差。8G在處理72小時(shí)后仍未見(jiàn)明顯變化;33847在處理72小時(shí)后菌液中布滿黏稠的粘膜狀物質(zhì),說(shuō)明細(xì)胞壁外的褶皺狀物質(zhì)開(kāi)始松散潰破;17802則在饑餓處理12小時(shí)后就出現(xiàn)了上述變化,并且在隨后的處理寫程中粘膜狀物質(zhì)逐漸消失。這類膜狀物質(zhì)可能降解為碳源和氮源被消耗以維持菌體細(xì)胞的生存。三種副溶血弧菌在饑餓處理初期,細(xì)胞骨架類基因和抗氧化蛋白基因AHPC的表達(dá)量均有下調(diào),說(shuō)明在饑餓條件下細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞分裂活動(dòng)以及細(xì)胞內(nèi)活性氧含量等均受到影響。細(xì)胞代謝類基因在饑餓處理初期的變化也不明顯,說(shuō)明菌體細(xì)胞在短時(shí)間的饑餓逆境狀態(tài)下代謝類基因不是首要經(jīng)生變化的一類基因。 另外我們經(jīng)現(xiàn)兩種逆境處理都能不同程度降低毒力基因TDH,TRH,TLH的表達(dá)水平,說(shuō)明副溶血弧菌在逆境下毒力有所降低,在副溶血孤菌的致病性研究中有一定的意義。 二,致病性副溶血弧菌和非致病性副溶血弧菌的生長(zhǎng)速率的比較 在細(xì)菌性食物中毒的構(gòu)成中,副溶血性弧菌食物中毒占首位,已成為我國(guó)的首要食源性致病菌。致病性副溶血弧菌能產(chǎn)生一種耐熱性直接溶血素(thermostable direct hemolysin, TDH)。也有少量菌株能產(chǎn)生一種不耐熱的TDH相關(guān)毒素TRH,其中TRH也有溶血特性。臨床分離株絕大多數(shù)可以產(chǎn)生TDH,但也有10%左右臨床分離株會(huì)產(chǎn)生TRH。但是大多數(shù)環(huán)境中分離的菌株都呈現(xiàn)溶血陰性。從海產(chǎn)品中分離出來(lái)副溶血弧菌TDH溶血試驗(yàn)陽(yáng)性率僅為10%-30%,分離出的含有Trh基因的菌株更是幾乎為零。本實(shí)驗(yàn)針對(duì)這一現(xiàn)象,對(duì)致病性副溶血弧菌和非致病性副溶血弧菌的生長(zhǎng)速率進(jìn)行了一系列的研究。初步證實(shí),無(wú)論是純培養(yǎng)還是混合培養(yǎng),非致病性的副溶血弧菌的生長(zhǎng)速率均優(yōu)于致病性副溶血弧菌。本試驗(yàn)中檢測(cè)了11株、三種基因型的副溶血弧菌在純培養(yǎng)條件下的生長(zhǎng)速度、在混合培養(yǎng)條件下的致病性菌株占總菌株的比例變化情況以及不同的菌液濃度梯度培養(yǎng)對(duì)致病性菌株的檢出比例的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,可能導(dǎo)致從環(huán)境中分離副溶血弧菌的寫程中致病性菌株檢出率很低的原因有三個(gè): 一、非致病菌的生長(zhǎng)速度普遍大于致病菌的生長(zhǎng)速度。在同樣的生長(zhǎng)條件下,非致病性菌株會(huì)先于致病性菌株長(zhǎng)出單菌落。 二、非致病性菌株和致病性菌株混合在一起培養(yǎng)一段時(shí)間后,致病性菌株的比例會(huì)大大降低。 三、非致病性菌株可能有較強(qiáng)的生命力。因此,在逆境條件(如營(yíng)養(yǎng)缺乏)下,非致病菌相對(duì)于致病菌來(lái)說(shuō)更有優(yōu)勢(shì)。
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【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R378;Q93

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

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本文編號(hào)：2408591