【摘要】：目的通過(guò)研究卵巢凍存過(guò)程中及FSH干預(yù)后內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ERS）分子伴侶GRP78、凋亡相關(guān)蛋白CHOP、caspase-12的表達(dá)水平，探討凍存過(guò)程中是否激活了卵巢內(nèi)ERS，后期卵巢中存在的卵泡丟失是否與ERS途徑介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡相關(guān)聯(lián)，以及FSH對(duì)凍存過(guò)程中ERS的作用影響。 方法領(lǐng)取4周齡ICR雌性小鼠，取其雙側(cè)卵巢，剝離外膜后縱向?qū)η谐蓛砂�，以半卵巢的形式進(jìn)行培養(yǎng)。首先進(jìn)行對(duì)照組部分建模，包括衣霉素（TM）誘導(dǎo)卵巢ERS模型的建立（包括新鮮對(duì)照組、凍存組、TM濃度梯度組：1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml）和牛磺熊去氧膽酸鈉（TUDCA）緩解卵巢ERS模型的建立（包括新鮮對(duì)照組、TUDCA濃度梯度組：1mM、5mM、10mM）。模型建立后獲取卵巢隨機(jī)分到對(duì)照部分：新鮮組、TM組、TM+TUDCA組；實(shí)驗(yàn)部分：凍存組、凍存+TUDCA組、凍存+FSH組、保護(hù)劑滲透組、保護(hù)劑滲透+TUDCA組、保護(hù)劑滲透+FSH組中。采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各分組中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激伴侶分子GRP78、凋亡相關(guān)蛋白CHOP、Caspase-12蛋白表達(dá)水平，Real-time-PCR技術(shù)檢測(cè)GRP78、CHOP、caspase-12mRNA表達(dá)水平。TUNEL法檢測(cè)各組卵巢內(nèi)細(xì)胞凋亡水平。 結(jié)果免疫組織化學(xué)法檢測(cè)TM誘導(dǎo)卵巢ERS模型建立各組中GRP78表達(dá)水平結(jié)果顯示：凍存組分別與5-1、20-1、30-1組兩兩比較有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。在TUDCA緩解卵巢ERS模型建立過(guò)程中以新鮮組作為陰性對(duì)照，以10μg/mLTM誘導(dǎo)組作為陽(yáng)性對(duì)照，將各濃度TUDCA與10μg/mLTM共同作用于小鼠卵巢培養(yǎng)12h，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組卵巢中GRP78蛋白表達(dá)水平結(jié)果顯示，隨著TUDCA濃度的增加，GRP78蛋白表達(dá)水平呈現(xiàn)逐漸下降趨勢(shì)，在TUDCA濃度達(dá)到10mM時(shí)卵巢內(nèi)GRP78表達(dá)水平及細(xì)胞形態(tài)基本恢復(fù)到新鮮組水平。建模完成后免疫組織化學(xué)法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)部分凍存組卵巢內(nèi)GRP78、CHOP及Caspase-12表達(dá)水平顯示：凍存組ERS伴侶分子GRP78表達(dá)水平明顯高于新鮮對(duì)照組，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）；凍存組ERS凋亡相關(guān)蛋白CHOP蛋白表達(dá)水平顯著高于新鮮對(duì)照組，兩組對(duì)比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01)；凍存組內(nèi)Caspase-12表達(dá)低于新鮮對(duì)照組；而保護(hù)劑滲透組內(nèi)GRP78、CHOP及Caspase-12蛋白表達(dá)水平均高于新鮮對(duì)照組。Real-time PCR結(jié)果顯示：凍存組GRP78、CHOP mRNA表達(dá)水平明顯高于新鮮對(duì)照組，其中CHOP上調(diào)幅度更明顯，而Caspase-12mRNA表達(dá)水平低于新鮮對(duì)照組；保護(hù)劑滲透組中GRP78、CHOP、Caspase-12mRNA表達(dá)水平較新鮮對(duì)照組均有明顯上調(diào)。保護(hù)劑滲透組、凍存組和TM組在添加ERS抑制劑TUDCA后各基因表達(dá)水平均有明顯下降；FSH干預(yù)凍存組后GRP78及Caspase-12表達(dá)水平均高于未干預(yù)凍存組，CHOP表達(dá)水平較凍存組下調(diào)；FSH干預(yù)保護(hù)劑滲透組后GRP78表達(dá)水平較未干預(yù)時(shí)上升，而CHOP及Caspase-12的表達(dá)水平則低于未干預(yù)組。TUNEL法檢測(cè)結(jié)果顯示：凍存組及保護(hù)劑滲透組細(xì)胞凋亡水平均顯著高于新鮮對(duì)照組，其中保護(hù)劑滲透組細(xì)胞凋亡水平高于凍存組，且保護(hù)劑滲透組、凍存組、TM組在添加TUDCA及FSH后，細(xì)胞凋亡水平均明顯降低。 結(jié)論凍存過(guò)程可以誘導(dǎo)卵巢發(fā)生ERS，且ERS抑制劑TUDCA對(duì)其ERS水平有明顯下調(diào)作用。其中保護(hù)劑滲透組內(nèi)ERS較劇烈，細(xì)胞凋亡主要由ERS引起，F(xiàn)SH干預(yù)對(duì)由保護(hù)劑滲透誘發(fā)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激水平及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡有緩解作用；凍存這一動(dòng)作對(duì)由保護(hù)劑滲透誘導(dǎo)的ERS有緩解作用，使得卵巢內(nèi)細(xì)胞并不因ERS走向凋亡，，凍存后存在的ERS主要由保護(hù)劑滲透這一過(guò)程誘導(dǎo)，凍存后細(xì)胞凋亡主要由其他通路介導(dǎo)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R394

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉金晶;顆粒酶殺細(xì)胞的機(jī)制[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2002年04期

2 張春玲,吳立軍,田代真一,小野寺敏,池島喬;冬凌草甲素通過(guò)激活caspase誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2003年05期

3 曾建新,王文亮;細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子研究新進(jìn)展[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2000年06期

4 盧國(guó)棟,金泰^

本文編號(hào)：2408065