【摘要】：目的研究原核表達(dá)的登革病毒(dengue virus,DV)1-4型融合的E蛋白結(jié)構(gòu)域III直接抑制登革病毒感染及其抗體的中和作用;研究rEIII融合蛋白在昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)的分泌表達(dá)情況,探討不同表達(dá)系統(tǒng)對(duì)融合蛋白功能的影響。 方法①通過(guò)連接肽將1-4型登革病毒包膜蛋白Ⅲ區(qū)串聯(lián)起來(lái),將串聯(lián)基因產(chǎn)物插入PET30a在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)、純化后,應(yīng)用Western blot及間接ELISA驗(yàn)證表達(dá)產(chǎn)物。將融合蛋白新西蘭大白兔制備免疫血清,應(yīng)用間接免疫熒光檢測(cè)以確定多抗血清的活性。將融合蛋白及多抗血清分別進(jìn)行阻斷實(shí)驗(yàn)和中和實(shí)驗(yàn),對(duì)抗原及抗體的功能進(jìn)行研究。②將rEIII基因克隆到桿狀病毒表達(dá)載體pAcSecG2T上,轉(zhuǎn)染SF9細(xì)胞,傳代增強(qiáng)毒力,間接免疫熒光結(jié)果顯示,融合蛋白在昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)中傳代5代后表達(dá)明顯增強(qiáng),分別收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液.ELISA及Western blot檢測(cè)融合蛋白分泌表達(dá)情況。 結(jié)果在大腸桿菌中成功表達(dá)了串聯(lián)的登革病毒1～4型E蛋白結(jié)構(gòu)域III融合蛋白,并得到兔抗免疫血清,分別對(duì)融合蛋白及兔抗免疫血清進(jìn)行驗(yàn)證,進(jìn)行了一系列功能試驗(yàn)。融合蛋白能夠阻斷1-4型DV感染,兔抗免疫血清能中和1-4型DV,但中和抗體效價(jià)不同。同時(shí)利用昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)純化了真核rEIII融合蛋白,為以后登革病毒抗原表位的篩選和疫苗研究打下了基礎(chǔ)。 結(jié)論串聯(lián)表達(dá)的登革病毒包膜蛋白Ⅲ區(qū)可抑制登革病毒感染,串聯(lián)rEⅢ蛋白免疫新西蘭大白兔產(chǎn)生的針對(duì)DV1-4型包膜蛋白結(jié)構(gòu)域Ⅲ區(qū)的抗體對(duì)登革病毒具有中和作用。融合蛋白可以在昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)細(xì)胞內(nèi)高表達(dá),但極少分泌。
[Abstract]:Objective to study the direct inhibition of dengue virus (dengue virus,DV) infection and neutralization of antibodies by the fusion of E protein domain III of prokaryotic expression of dengue virus (dengue virus,DV) 1-4. To study the secretory expression of rEIII fusion protein in insect expression system and the effect of different expression system on the function of the fusion protein. Methods 1Recombinant peptide was used to connect the 1-4 dengue virus envelope protein 鈪，

本文編號(hào)：2406643