【摘要】： 研究背景:近年來(lái)神經(jīng)菌毛素(Neuropilin-1,Nrp-1/NP1/Npn-1)在免疫學(xué)領(lǐng)域及腫瘤生物學(xué)領(lǐng)域的研究逐漸成為熱點(diǎn)。Nrp-1在多種免疫細(xì)胞如樹突狀細(xì)胞(Dendritic cells,DC)、T細(xì)胞上都有表達(dá),有研究提示Nrp-1可能是經(jīng)典CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(CD4~+CD25~+ regulatory T cells,CD4~+CD25~+Treg)的新表面標(biāo)志分子,但Nrp-1~+T細(xì)胞是否具有免疫調(diào)節(jié)功能鮮有報(bào)道。Nrp-1也表達(dá)于多種腫瘤細(xì)胞上,在腫瘤增殖及擴(kuò)散等生物學(xué)行為中發(fā)揮重要作用。由于各種類型的Treg在腫瘤免疫領(lǐng)域中的作用是目前的一個(gè)研究熱點(diǎn),以Nrp-1為橋梁將Treg與腫瘤免疫聯(lián)系起來(lái)是值得探索的問(wèn)題。 目的:研究Nrp-1在淋巴細(xì)胞及T細(xì)胞上的表達(dá)特點(diǎn)、Nrp-1~+T細(xì)胞與經(jīng)典CD4~+CD25~+Treg的關(guān)系及二者在腫瘤免疫中調(diào)節(jié)功能的比較,探討Nrp-1可否作為新的Treg表面標(biāo)志分子、Nrp-1~+T細(xì)胞是否一種新的Treg,并對(duì)Nrp-1~+T細(xì)胞在腫瘤免疫中發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的機(jī)制進(jìn)行初步分析。 方法:利用流式細(xì)胞術(shù)分析Nrp-1在淋巴細(xì)胞及T細(xì)胞的表達(dá)特點(diǎn)、Nrp-1~+T細(xì)胞與經(jīng)典CD4~+CD25~+Treg的關(guān)系;建立小鼠B16-F10-1uc-G5黑色素瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)方法,利用熒光染料羧基熒光素乙酰乙酸(Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFDA-SE)標(biāo)記腫瘤細(xì)胞并利用阻斷抗體,經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)分析Nrp-1及其配體在腫瘤細(xì)胞體外增殖中的作用;利用先進(jìn)的螢光成像技術(shù),在體外實(shí)驗(yàn)中研究Nrp-1~+T細(xì)胞對(duì)自然殺傷細(xì)胞(Natural killer cells,NK細(xì)胞)殺傷小鼠黑色素瘤細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用,并與經(jīng)典CD4~+CD25~+Treg進(jìn)行比較,在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中(腫瘤模型),研究Nrp-1~+T細(xì)胞在小鼠黑色素瘤腫瘤免疫中的調(diào)節(jié)作用。 結(jié)果:小鼠脾臟淋巴細(xì)胞中,Nrp-1~+T細(xì)胞在CD4~+CD25~+Treg中所占的比例明顯高于在CD4~+CD25~-T細(xì)胞中所占的比例(P＜0.01),CD4~+CD25~+Treg在Nrp-1~+T細(xì)胞中所占的比例明顯高于在Nrp-1~-T細(xì)胞中所占的比例(P＜0.01);利用螢光成像技術(shù)測(cè)得的光子數(shù)與腫瘤細(xì)胞數(shù)目/腫瘤體積之間呈良好線性相關(guān);Nrp-1及血管內(nèi)皮因子165(Vascular endothelialgrowth factor 165,VEGF165)被阻斷后,小鼠B16-F10-1uc-G5黑色素瘤細(xì)胞增殖指數(shù)下降,與非阻斷組相比有極顯著差異(P＜0.01);在體外抑制NK細(xì)胞殺傷黑色素瘤細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中,Nrp-1~+T細(xì)胞組的腫瘤細(xì)胞數(shù)目在各時(shí)間點(diǎn)均顯著高于CD4~+CD25~+Treg組(P＜0.01),體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,Nrp-1~+T細(xì)胞組的腫瘤體積顯著大于對(duì)照組(P＜0.01)。 結(jié)論:Nrp-1~+T細(xì)胞是一群與經(jīng)典CD4~+CD25~+Treg在數(shù)量與功能上關(guān)系密切而又不同的新的T細(xì)胞亞群;體外/體內(nèi)螢光成像檢測(cè)均操作簡(jiǎn)便、效果直觀、結(jié)果可靠。Nrp-1及VEGF165均能促進(jìn)小鼠B16-F10-1uc-G5黑色素瘤細(xì)胞的增殖;Nrp-1~+T細(xì)胞在體內(nèi)及體外均能抑制針對(duì)小鼠B16-F10-1uc-G5黑色素瘤細(xì)胞的免疫反應(yīng),這種負(fù)性免疫調(diào)節(jié)功能比經(jīng)典CD4~+CD25~+Treg更強(qiáng),其作用機(jī)制可能通過(guò)Nrp-1~+T/效應(yīng)性T細(xì)胞(Effective T cells,Teff)、Nrp-1~+T/NK、Nrp-1~+T/DC及Nrp-1~+T/腫瘤細(xì)胞直接作用有關(guān)。Nrp-1可以作為Treg新的表面標(biāo)志分子,Nrp-1~+T細(xì)胞可能是一種新的Treg亞群,其負(fù)性免疫調(diào)節(jié)作用機(jī)制具有多樣性。
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【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2399504