【摘要】： 背景和目的先天性多指(趾)(preaxial polydactyly,PPD)是一種常見(jiàn)的肢體畸形病征,臨床表現(xiàn)主要為超出正常數(shù)目的手指(腳趾)贅生,在新生兒中的發(fā)生率居于各類(lèi)肢體畸形之首。多指畸形除了獨(dú)立發(fā)生外,還可以作為一些綜合征的部分癥狀而伴隨出現(xiàn)。軸前多指(趾)為發(fā)生在肢體橈(脛)側(cè)的多余指(趾),按照受累指(趾)發(fā)生部位,可劃分為4個(gè)亞型(Ⅰ-Ⅳ),分別代表二指節(jié)拇指多指、三指節(jié)拇指多指、食指多指與多指并指。軸前多指(趾)家系大多為常染色體顯性遺傳(autosomal dominant,AD),從簡(jiǎn)單的三指節(jié)拇指單個(gè)指骨增加直至完整的額外指(趾)的產(chǎn)生,患病個(gè)體表型有明顯差異。指(趾)的發(fā)育過(guò)程是一個(gè)圖式發(fā)育過(guò)程,在這個(gè)過(guò)程中,Shh(Sonic hedgehog)作為ZPA(Zoneof Polarizing Activity)區(qū)的形態(tài)發(fā)生蛋白起著重要的作用。有報(bào)道表明Shh通過(guò)擴(kuò)散影響第二指(趾)的發(fā)生,而三到五指(趾)的發(fā)育不需要通過(guò)蛋白的擴(kuò)散,第一指(趾)的發(fā)生不需要Shh的參與。Shh異位表達(dá)在肢芽前部就會(huì)出現(xiàn)多指現(xiàn)象,表現(xiàn)為先天性多指(趾)。通過(guò)對(duì)軸前多指家系血清進(jìn)行連鎖分析和單倍型構(gòu)建,將該家系的致病位點(diǎn)定位在染色體7q36上的1.7cM范圍內(nèi),并且通過(guò)遺傳分析排除了shh基因自身序列改變致病的可能。ZPA調(diào)控序列(ZPA regulationsequence,ZRS)位于染色體7q36的LMBR1內(nèi)含子5上,其基因位點(diǎn)發(fā)生突變后,影響Shh在肢芽上的表達(dá)。正常情況下,Shh只表達(dá)在肢芽后部,PPD突變的個(gè)體中Shh在肢芽前后部都有表達(dá)。本項(xiàng)目以小鼠為研究對(duì)象,研究胚胎發(fā)育時(shí)Shh在正常肢芽上的表達(dá)狀況。以此為基礎(chǔ),將突變后的ZRS基因?qū)胄∈笈咛ジ杉?xì)胞中,研究突變后的小鼠Shh表達(dá)狀況和突變后的小鼠肢芽生長(zhǎng)情況。 實(shí)驗(yàn)方法將適齡的ICR小鼠進(jìn)行交配,次日檢查,將產(chǎn)生陰栓的母鼠標(biāo)記為E0.5天,E8.0天開(kāi)始進(jìn)行解剖取胚,E8.0-E12.5天進(jìn)行整胚免疫組化染色,E12.5-E16.5天進(jìn)行切片免疫組化染色,染色后的切片在顯微鏡下進(jìn)行拍片。對(duì)Shh質(zhì)粒擴(kuò)增后抽提,進(jìn)行酶切鑒定和電泳鑒定。 結(jié)果E8-E12.5天的小鼠全胚免疫組化棕黑色的部分表示的是陽(yáng)性,黑色部分越大,陽(yáng)性率越高。結(jié)果E10天時(shí)Shh開(kāi)始有表達(dá),E10.5天時(shí)表達(dá)量逐漸增多,E11天時(shí)在肢芽后部大量表達(dá),E12天時(shí)表達(dá)量減少,E12.5天時(shí)已檢測(cè)不出Shh的表達(dá)。E12.5-E16.5天的胚胎為切片免疫組化,Shh在E12.5-E16.5天時(shí)免疫組化染色結(jié)果都是陰性。電泳鑒定結(jié)果獲得了清晰的Shh質(zhì)粒酶切片段電泳圖。 結(jié)論本研究運(yùn)用整胚免疫組化和切片免疫組化相結(jié)合的方法,得到了Shh在各個(gè)時(shí)期的胚胎肢芽上的表達(dá)圖,Shh在小鼠胚胎發(fā)育的E10-E12天在肢芽后部有表達(dá)。
[Abstract]:Background and objective congenital polydactyly () (preaxial polydactyly,PPD) is a common sign of limb deformities. The clinical manifestation is more than normal number of fingers (toes) vegetations. The incidence of congenital polyphylla () (preaxial polydactyly,PPD) is the highest among all kinds of limb deformities in newborns. In addition to occurring independently, polyphalangeal deformities can be associated with some syndromes. The anterior phalanx (toe) is the superfluous finger (toe) which occurs in the radial (tibial) side of the limb. According to the location of the affected finger (toe), it can be divided into four subtypes (鈪，

本文編號(hào)：2395979