發(fā)布時間：2018-12-30 18:40

【摘要】： 背景和目的先天性多指(趾)(preaxial polydactyly,PPD)是一種常見的肢體畸形病征,臨床表現(xiàn)主要為超出正常數(shù)目的手指(腳趾)贅生,在新生兒中的發(fā)生率居于各類肢體畸形之首。多指畸形除了獨立發(fā)生外,還可以作為一些綜合征的部分癥狀而伴隨出現(xiàn)。軸前多指(趾)為發(fā)生在肢體橈(脛)側(cè)的多余指(趾),按照受累指(趾)發(fā)生部位,可劃分為4個亞型(Ⅰ-Ⅳ),分別代表二指節(jié)拇指多指、三指節(jié)拇指多指、食指多指與多指并指。軸前多指(趾)家系大多為常染色體顯性遺傳(autosomal dominant,AD),從簡單的三指節(jié)拇指單個指骨增加直至完整的額外指(趾)的產(chǎn)生,患病個體表型有明顯差異。指(趾)的發(fā)育過程是一個圖式發(fā)育過程,在這個過程中,Shh(Sonic hedgehog)作為ZPA(Zoneof Polarizing Activity)區(qū)的形態(tài)發(fā)生蛋白起著重要的作用。有報道表明Shh通過擴散影響第二指(趾)的發(fā)生,而三到五指(趾)的發(fā)育不需要通過蛋白的擴散,第一指(趾)的發(fā)生不需要Shh的參與。Shh異位表達在肢芽前部就會出現(xiàn)多指現(xiàn)象,表現(xiàn)為先天性多指(趾)。通過對軸前多指家系血清進行連鎖分析和單倍型構(gòu)建,將該家系的致病位點定位在染色體7q36上的1.7cM范圍內(nèi),并且通過遺傳分析排除了shh基因自身序列改變致病的可能。ZPA調(diào)控序列(ZPA regulationsequence,ZRS)位于染色體7q36的LMBR1內(nèi)含子5上,其基因位點發(fā)生突變后,影響Shh在肢芽上的表達。正常情況下,Shh只表達在肢芽后部,PPD突變的個體中Shh在肢芽前后部都有表達。本項目以小鼠為研究對象,研究胚胎發(fā)育時Shh在正常肢芽上的表達狀況。以此為基礎(chǔ),將突變后的ZRS基因?qū)胄∈笈咛ジ杉毎?研究突變后的小鼠Shh表達狀況和突變后的小鼠肢芽生長情況。 實驗方法將適齡的ICR小鼠進行交配,次日檢查,將產(chǎn)生陰栓的母鼠標記為E0.5天,E8.0天開始進行解剖取胚,E8.0-E12.5天進行整胚免疫組化染色,E12.5-E16.5天進行切片免疫組化染色,染色后的切片在顯微鏡下進行拍片。對Shh質(zhì)粒擴增后抽提,進行酶切鑒定和電泳鑒定。 結(jié)果E8-E12.5天的小鼠全胚免疫組化棕黑色的部分表示的是陽性,黑色部分越大,陽性率越高。結(jié)果E10天時Shh開始有表達,E10.5天時表達量逐漸增多,E11天時在肢芽后部大量表達,E12天時表達量減少,E12.5天時已檢測不出Shh的表達。E12.5-E16.5天的胚胎為切片免疫組化,Shh在E12.5-E16.5天時免疫組化染色結(jié)果都是陰性。電泳鑒定結(jié)果獲得了清晰的Shh質(zhì)粒酶切片段電泳圖。 結(jié)論本研究運用整胚免疫組化和切片免疫組化相結(jié)合的方法,得到了Shh在各個時期的胚胎肢芽上的表達圖,Shh在小鼠胚胎發(fā)育的E10-E12天在肢芽后部有表達。
[Abstract]:Background and objective congenital polydactyly () (preaxial polydactyly,PPD) is a common sign of limb deformities. The clinical manifestation is more than normal number of fingers (toes) vegetations. The incidence of congenital polyphylla () (preaxial polydactyly,PPD) is the highest among all kinds of limb deformities in newborns. In addition to occurring independently, polyphalangeal deformities can be associated with some syndromes. The anterior phalanx (toe) is the superfluous finger (toe) which occurs in the radial (tibial) side of the limb. According to the location of the affected finger (toe), it can be divided into four subtypes (鈪，

本文編號：2395979