【摘要】： 目的：為了更好地模擬體內(nèi)成骨微環(huán)境,建立一種安全的體外誘導(dǎo)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化的新體系,SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與包埋在海藻酸鈉-聚賴氨酸-海藻酸鈉(alginate-poly-lysine-alginate,APA)微膠囊中的SD大鼠成骨細(xì)胞進(jìn)行體外共培養(yǎng)。 方法：首先利用流式細(xì)胞儀分析了SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的表型,然后進(jìn)行了向成骨、脂肪多向誘導(dǎo)分化鑒定。第3代成骨細(xì)胞被包埋在直徑400微米的APA微膠囊中,之后含有成骨細(xì)胞的微膠囊和外部的干細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng),初始成骨細(xì)胞和干細(xì)胞的數(shù)量比約為10：1。共培養(yǎng)之后,通過堿性磷酸酶(ALP)以及von Kossa染色來評價骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞定向分化的程度。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)CD45-和CD29+,并具有向成骨和脂肪的多向分化能力。在體外微囊化共培養(yǎng)數(shù)周后,ALP定性和定量分析以及von Kossa染色證實(shí)微囊化成骨細(xì)胞能夠體外促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞定向分化。 結(jié)論：在微囊化共培養(yǎng)新體系中成骨細(xì)胞通過分泌一些重要的生長因子和細(xì)胞外基質(zhì)作用于干細(xì)胞,從而模擬了體內(nèi)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化的微環(huán)境；微膠囊膜可以將成骨細(xì)胞和干細(xì)胞進(jìn)行免疫隔離,從而避免了兩者的混合,利于徹底分離外部的目的細(xì)胞。由此,本論文證實(shí)微膠囊是一種新型的共培養(yǎng)隔離新手段,微囊化共培養(yǎng)新體系將為骨組織工程中控制干細(xì)胞的體外定向分化提供一種工程化新思路。
[Abstract]:Objective: in order to simulate the osteogenic microenvironment in vivo, a new system of induction and differentiation of stem cells in vitro was established. Bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) of SD rats were co-cultured with SD rat osteoblasts embedded in sodium alginate-polylysine-alginate (alginate-poly-lysine-alginate,APA) microcapsules in vitro. Methods: the phenotypes of SD rat bone marrow mesenchymal stem cells were analyzed by flow cytometry. The third generation of osteoblasts were embedded in the APA microcapsules with a diameter of 400 渭 m, then the microcapsules containing osteoblasts were co-cultured with external stem cells. The initial ratio of osteoblasts to stem cells was about 10: 1. After co-culture, the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into osteoblasts was evaluated by alkaline phosphatase (ALP) and von Kossa staining. Results: bone marrow mesenchymal stem cells expressed CD45- and CD29 and had the ability to differentiate into bone and fat. After in vitro microencapsulation co-culture, ALP qualitative and quantitative analysis and von Kossa staining confirmed that microencapsulated osteoblasts could promote the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into osteoblasts in vitro. Conclusion: in the new microencapsulated co-culture system, osteoblasts act on stem cells by secreting some important growth factors and extracellular matrix, thus mimicking the microenvironment of stem cells transforming into osteoblasts in vivo. The microencapsulated membrane can isolate osteoblasts and stem cells from each other, thus avoiding the mixing of the two and facilitating the complete separation of external target cells. Therefore, microencapsulation is a new method of co-culture and isolation, and the new microencapsulated co-culture system will provide a new engineering idea for controlling the directional differentiation of stem cells in bone tissue engineering in vitro.
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R329

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本文編號：2371349