【摘要】：p53蛋白因?yàn)槠鋵?duì)細(xì)胞基因組壓力的靈敏應(yīng)答和調(diào)控,而被認(rèn)為是“基因組的管家蛋白”。它是一個(gè)著名的腫瘤抑制因子,通過一系列的復(fù)雜機(jī)制精密調(diào)節(jié)細(xì)胞周期,細(xì)胞凋亡和細(xì)胞死亡等細(xì)胞生理過程。p53受泛素化,乙�；�,磷酸化,SUMO化,甲基化,糖基化等多種翻譯后修飾形式調(diào)控。其中泛素化是p53的一種最主要的調(diào)控方式之一。 Pirh2和MDM2都是環(huán)指結(jié)構(gòu)的p53泛素連接酶。我們實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),SCYL1-BP1蛋白能夠通過不同的分子機(jī)制分別與這兩個(gè)蛋白相互作用。SCYL1-BP1與Pirh2結(jié)合,進(jìn)而被Pirh2泛素化修飾、降解。它是Pirh2的一個(gè)泛素化底物。而SCYL1-BP1結(jié)合于MDM2的中心酸性結(jié)構(gòu)域,卻不能夠被MDM2泛素化修飾和降解。相反,SCYL1-BP1對(duì)MDM2有很強(qiáng)的抑制作用。一方面,它誘導(dǎo)MDM2的自我泛素化,從蛋白水平上促進(jìn)MDM2的降解；另一方面,SCYL1-BP1能夠抑制MDM2的轉(zhuǎn)錄活性,從mRNA層面上進(jìn)一步削弱MDM2的表達(dá)。 細(xì)胞中過表達(dá)的SCYL1-BP1還能夠通過抑制MDM2介導(dǎo)的泛素化降解從蛋白水平上穩(wěn)定p53。而過表達(dá)SCYL1-BP1并不對(duì)E6AP介導(dǎo)的p53泛素化起作用,證明SCYL1-BP1抑制p53泛素化,穩(wěn)定p53蛋白是具有MDM2特異性的。在細(xì)胞中表達(dá)遞增量SCYL1-BP1誘導(dǎo)p21和gadd45的轉(zhuǎn)錄活性,阻遏細(xì)胞周期,抑制細(xì)胞的增殖、遷移和腫瘤的形成。 CHIP實(shí)驗(yàn)證明SCYL1-BP1穩(wěn)定的p53更易結(jié)合于p21增強(qiáng)子上的p53反應(yīng)元件而非MDM2上的反應(yīng)元件,這說明SCYL1-BP1對(duì)于P53-MDM2反饋環(huán)的調(diào)控具有單向性,也很好的解釋了為什么被穩(wěn)定的p53沒有通過促進(jìn)MDM2轉(zhuǎn)錄來削弱MDM2的自身降解作用。因此,我們相信SCYL1-BP1是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的MDM2-p53反饋調(diào)節(jié)環(huán)上的一個(gè)重要因子,它甚至可能是一個(gè)潛在的腫瘤抑制子。 與SCYL1-BP1影響E3對(duì)p53的泛素化不同,XPC對(duì)p53的影響發(fā)生在p53泛素化修飾后,蛋白酶體降解前這一階段。XPC (Xeroderma Pigmentosum C)蛋白是一個(gè)重要的DNA修復(fù)蛋白。它能夠識(shí)別細(xì)胞中的UV損傷信號(hào),結(jié)合到DNA損傷部位,并招募其余的DNA修復(fù)蛋白。在第三章的研究中我們發(fā)現(xiàn)XPC能夠與泛素化E4,Ufd2相互作用。XPC缺失后人工構(gòu)建的泛素化報(bào)告基因蛋白UbG76V-GFP出現(xiàn)累積。我們發(fā)現(xiàn)p53是XPC在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的一個(gè)天然底物。在XPC缺失的細(xì)胞株中,p53蛋白降解速度變慢,泛素化的p53出現(xiàn)累積,而p21,MDM2等蛋白的降解不受到影響,表明XPC并不是泛素蛋白酶體通路上的一個(gè)廣譜調(diào)節(jié)子。 XPC對(duì)泛素化的p53調(diào)節(jié)具有選擇性。它能夠與p53的泛素連接酶MDM2相互作用,并幫助MDM2泛素化的p53的降解。但是XPC對(duì)于p53另一個(gè)泛素連接酶Pirh2泛素化的p53似乎不起作用。而我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中也未能找到XPC與Pirh2的相互作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明XPC對(duì)于底物的泛素化E3有一定的選擇性。它可能通過與MDM2的相互作用而被帶到泛素化的底物上,進(jìn)而幫助泛素化的底物轉(zhuǎn)運(yùn)到蛋白酶體。 正常情況下,在XPC野生型的細(xì)胞株中過表達(dá)XPC,底物p53的降解并不受到影響。而在UV照射后,沒有過表達(dá)XPC的細(xì)胞株中,p53的降解幾乎停止,p53出現(xiàn)明顯的穩(wěn)定；但是在過表達(dá)了XPC的細(xì)胞株中,p53開始降解。這進(jìn)一步說明XPC能夠參與p53的泛素化降解。同時(shí)也說明,XPC可能是生物體內(nèi)聯(lián)系DNA修復(fù)和泛素蛋白酶體降解通路樞紐上的一個(gè)重要蛋白。
[Abstract]:The p53 protein is considered to be a 鈥渢he housekeeping protein of the genome鈥，

本文編號(hào)：2371211