【摘要】： 鐵吸收調(diào)節(jié)蛋白（Fur）是革蘭氏陰性菌中普遍存在的重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，它調(diào)控著不同的生命活動(dòng)，包括鐵的吸收，細(xì)胞的新陳代謝，應(yīng)激反應(yīng)以及毒力因子的合成。因此，對于許多病原菌來說，F(xiàn)ur在侵染和致病的過程中起到了關(guān)鍵性的作用。本研究從一株分離自患病牙鲆的熒光假單胞菌TSS中克隆得到了fur基因，并且發(fā)現(xiàn)TSS Fur能夠與fur基因突變的大腸桿菌部分互補(bǔ)。本研究構(gòu)建了一株TSS fur基因的缺失突變體TFM。研究發(fā)現(xiàn)與TSS相比，TFM的生長能力和抵抗宿主血清殺菌能力減弱，，外膜蛋白表達(dá)異常，在宿主血液和組織中的擴(kuò)散能力顯著降低，并且在以牙鲆為模型的感染實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)TFM的毒力較TSS大幅下降。將TFM作為減毒疫苗通過注射、浸泡和口服的途徑免疫牙鲆后，發(fā)現(xiàn)其對熒光假單胞菌和嗜水氣單胞菌皆有很好的保護(hù)效應(yīng)。為了進(jìn)一步擴(kuò)展TFM的交叉保護(hù)范圍，本研究進(jìn)一步構(gòu)建了表達(dá)哈維氏弧菌抗原AgaV-DegQ的質(zhì)粒pJAQ，并將其轉(zhuǎn)入TFM中得到TFM/pJAQ。研究發(fā)現(xiàn)TFM/pJAQ是一種高效交叉保護(hù)疫苗，能同時(shí)保護(hù)牙鲆抵抗熒光假單胞菌、嗜水氣單胞菌以及哈維氏弧菌感染。
[Abstract]:Iron absorption regulatory protein (Fur) is an important transcription regulator in Gram-negative bacteria. It regulates different life activities, including iron absorption, cell metabolism, stress response and virulence factor synthesis. Therefore, for many pathogens, Fur plays a key role in the process of infection and pathogenesis. In this study, the fur gene was cloned from a TSS isolated from infected Paralichthys olivaceus, and it was found that TSS Fur was partially complementary to the Escherichia coli mutated by fur gene. In this study, a TSS fur gene deletion mutant TFM. was constructed. It was found that compared with TSS, the ability of TFM to grow and resist the bactericidal ability of host serum was weakened, the expression of outer membrane protein was abnormal, and the diffusion ability in host blood and tissue was significantly decreased. Moreover, the virulence of TFM was significantly lower than that of TSS in the infection experiment of Paralichthys olivaceus (Paralichthys olivaceus). Using TFM as a attenuated vaccine to immunize Paralichthys olivaceus by injection, immersion and oral administration, it was found that it had a good protective effect on both Pseudomonas fluorescein and Aeromonas hydrophila. In order to further extend the cross-protection range of TFM, the plasmid pJAQ, expressing vibrio Harvey antigen AgaV-DegQ was constructed and transferred into TFM to obtain TFM/pJAQ.. It was found that TFM/pJAQ is a highly effective cross-protective vaccine against Pseudomonas fluorescein, Aeromonas hydrophila and Vibrio Harvey at the same time.
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所）
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R392

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本文編號：2346806