【摘要】：目的構(gòu)建依賴(lài)輔助病毒和宿主細(xì)胞內(nèi)合成病毒核糖核蛋白復(fù)合體(vRNPs)的反向遺傳學(xué)系統(tǒng),利用上述兩系統(tǒng)表達(dá)綠色熒光蛋白(EGFP)。方法將EGFP cDNA精確插入人RNA聚合酶I啟動(dòng)子和小鼠終止子序列之間,構(gòu)建RNA POLI系統(tǒng),此系統(tǒng)被克隆入pBluescript II sk(+),獲得重組質(zhì)粒pBluescript II sk(+)-tI-EGFP-PIh;基于輔助病毒H1N1,pBluescript II sk(+)-tI-EGFP-PIh轉(zhuǎn)染MDCK細(xì)胞,觀察熒光。來(lái)源于甲型流感病毒H1N1分離株A/Puerto Rico/8/34的PB2、PB1、PA、NP 4個(gè)基因片段cDNA克隆入載體pcDNA3.1(+),獲得pcDNA3.1-PB2、pcDNA3.1-PB1、pcDNA3.1-PA、pcDNA3.1-NP,將pBluescript II sk(+)-tI-EGFP-PIh與4個(gè)表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,觀察熒光。結(jié)果所構(gòu)建的載體均經(jīng)菌液PCR及測(cè)序驗(yàn)證正確;兩種轉(zhuǎn)染體系均可觀察到綠色熒光。結(jié)論所構(gòu)建的依賴(lài)輔助病毒和宿主細(xì)胞內(nèi)合成vRNPs的反向遺傳學(xué)系統(tǒng)均可使綠色熒光蛋白表達(dá)。
[Abstract]:Objective to construct a reverse genetic system for the synthesis of viral ribonucleoprotein complex (vRNPs) by co-dependent virus and host cells, and to express green fluorescent protein (EGFP). Using these two systems. Methods EGFP cDNA was inserted precisely between human RNA polymerase I promoter and mouse Terminator, and the RNA POLI system was constructed. The system was cloned into pBluescript II sk (), to obtain the recombinant plasmid pBluescript II sk () tI-EGFP-PIh;. II sk ()-tI-EGFP-PIh was transfected into MDCK cells based on H1-1 pBluescript II sk ()-tI-EGFP-PIh and fluorescence was observed. CDNA cloning of four PB2,PB1,PA,NP fragments from H1N1 isolate A/Puerto Rico/8/34 of Influenza A virus into pcDNA3.1 (), to obtain pcDNA3.1-PB2,pcDNA3.1-PB1,pcDNA3.1-PA,pcDNA3.1-NP, PBluescript II sk ()-tI-EGFP-PIh and four expression plasmids were co-transfected into 293T cells to observe the fluorescence. Results the constructed vectors were proved to be correct by PCR and sequencing, and the green fluorescence could be observed in the two transfection systems. Conclusion the constructed reverse genetic system of co-virus and host cell vRNPs synthesis can make green fluorescent protein express.
【作者單位】： 暨南大學(xué)藥學(xué)院;深圳市疾病預(yù)防控制中心;中山大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院;
【基金】：深圳市科委基礎(chǔ)研究項(xiàng)目(JCYJ20140410164811662)資助~~
【分類(lèi)號(hào)】：R373.13

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2346919