發(fā)布時間：2018-11-17 10:12

【摘要】： 一般認(rèn)為,IgE及其高親和力受體FcεRI是導(dǎo)致過敏性疾病的關(guān)鍵分子。以IgE分子作為靶點獲得的抗過敏藥物發(fā)展較為迅速,其中,人源化抗IgE單抗Omalizumab(Xolair?)已于2003年6月獲FDA批準(zhǔn)上市,在成人中重度哮喘的臨床治療中療效顯著。目前,國內(nèi)尚未開展治療性抗IgE抗體的研制工作,因此,制備具有自主知識產(chǎn)權(quán)的抗IgE抗體具有重要的理論和實際意義。 大量的證據(jù)顯示,功能性抗IgE抗體通過拮抗IgE/FcεRI復(fù)合物的形成發(fā)揮抗過敏作用。隨著核磁共振及X-射線晶體衍射技術(shù)的發(fā)展,IgE-Fc和FcεRI的晶體結(jié)構(gòu)逐步得到了精確解析,從而為設(shè)計靶向藥物提供了重要信息。本論文在IgE-Fc/FcεRI復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上,利用計算機輔助分析理論確定IgE與FcεRI、IgE與功能性單抗MAE11結(jié)合的功能域,并通過實驗初步證實了這一理論預(yù)測;同時,克隆、表達(dá)了IgE-Fc的缺失突變體并實現(xiàn)了FcεRI的膜表達(dá),從而建立了功能性抗IgE抗體的篩選平臺,制備并初步評價了幾株鼠抗人IgE單克隆抗體。具體研究結(jié)果如下: (1)理論確定IgE分子的功能表位——在IgE-Fc/FcεRI復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上搭建了IgE-Fc缺失突變體E24(IgE Cε2-Cε4)、E34(IgE Cε3-Cε4)以及FcεRI的單體模型;同時,經(jīng)同源模建構(gòu)建了Omalizumab鼠源母本抗體MAE11的理論模型。利用計算機圖形學(xué)技術(shù)、分子模擬技術(shù)、分子對接方法以及距離幾何學(xué)等理論,搭建并合理評價了E24、E34與FcεRI及MAE11的作用模式,進(jìn)而從理論上確定了IgE分子的功能表位主要位于Cε3區(qū); (2)IgE分子功能表位的實驗驗證——通過分子生物學(xué)技術(shù)克隆并表達(dá)了IgE-Fc分子的缺失突變體蛋白E24和E34,實驗顯示E24、E34均可以結(jié)合FcεRI以及奧馬佐單抗,表明缺失突變體蛋白E34包含了IgE分子重要的功能表位,初步證實了計算機輔助分析的結(jié)果; (3)功能性抗IgE抗體篩選平臺的建立與驗證——初步分析了跨膜區(qū)序列影響蛋白細(xì)胞定位的規(guī)律,根據(jù)這一規(guī)律選擇Her2的跨膜區(qū)序列,成功實現(xiàn)了FcεRIα胞外段的膜表達(dá)并建立了穩(wěn)定株,在此基礎(chǔ)上建立了功能抗體的篩選平臺。利用奧馬佐單抗能夠拮抗IgE/FcεRI復(fù)合物的形成,而且不具有致過敏性的特征,對該平臺進(jìn)行了驗證。結(jié)果顯示,這一平臺可以用于初步評價潛在的功能性抗IgE單抗; (4)鼠單抗的制備和初步評價——利用E34蛋白常規(guī)免疫小鼠,經(jīng)細(xì)胞融合和克隆篩選,獲得了六株鼠源抗IgE單抗(QME1~6),其中,只有QME5能夠特異性地結(jié)合膜IgE。此外,除QME3,其余五株單抗所識別的抗原表位均與奧馬佐單抗重疊;QME1~6均沒有潛在的致過敏性,同時,QME5和QME6均有拮抗IgE/FcεRI復(fù)合物形成的能力。不過,由于親和力較低(QME5和IgE結(jié)合的親和常數(shù)為1×107 M-1),只有高摩爾比的QME5才能顯示競爭能力。 以上結(jié)果表明,在計算機輔助設(shè)計及理論模擬的指導(dǎo)下確定大分子抗原(如IgE)的功能表位、研制靶向藥物的策略是可行的,這也為針對其它靶點的拮抗分子的合理設(shè)計提供了有益的理論和技術(shù)依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 楊平常，，曾海燕;抗IgE抗體的誘導(dǎo)及其對血清IgE水平的抑制[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;1994年06期

本文編號：2337408