【摘要】： 目前,細(xì)菌的耐藥性已經(jīng)是世界關(guān)注的問題。細(xì)菌感染的發(fā)生率及其病原菌的耐藥率一直居高不下,對(duì)人類的健康造成了很大的威脅。整合子-耐藥基因盒系統(tǒng)作為病原菌主要的耐藥機(jī)制之一,近年來(lái)已成為研究人員關(guān)注的熱點(diǎn),本研究將分析健康人群攜帶的沙門氏菌中第一類整合子及沙門氏菌基因組島(SGI1)在的分布及特性,分析其與細(xì)菌耐藥性的關(guān)系。將按照臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLSI)的規(guī)定,用紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)檢測(cè)58株健康人攜帶的沙門氏菌對(duì)15種抗生素的敏感性。將通過聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)Ⅰ類整合酶基因(intI1),陽(yáng)性者擴(kuò)增耐藥基因盒,并對(duì)陽(yáng)性擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序,所得序列應(yīng)用Standard nucleotide nucleotic BLAST在NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov )上比對(duì)并進(jìn)行序列分析。應(yīng)用濾膜法質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)對(duì)第一類整合子進(jìn)行定位分析,并檢測(cè)其可移動(dòng)性。應(yīng)用Sau-PCR方法對(duì)菌株進(jìn)行分子分型,所得條帶用Quantity One軟件進(jìn)行分析,繪制樹狀圖。同時(shí)對(duì)第一類整合子陽(yáng)性菌株檢測(cè)沙門氏菌基因組島(SGI1),分別檢測(cè)其左側(cè)、右側(cè)部分及其中間的部分基因,陽(yáng)性擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序及序列比對(duì),對(duì)SGI1染色體外環(huán)狀形式及切除進(jìn)行檢測(cè),通過接合轉(zhuǎn)移及自然轉(zhuǎn)化試驗(yàn)檢測(cè)其可移動(dòng)性。 研究結(jié)果表明:1、從健康人分離出的沙門氏菌耐藥性較低,第一類整合子檢出率不高,可能是由于面臨較小的抗生素壓力。07年與05年相比,耐藥性及第一類整合子的檢出率均有增高趨勢(shì)。相關(guān)從業(yè)人員接觸抗生素的機(jī)會(huì)不多,因此很可能是食品中細(xì)菌攜帶的整合子通過食物鏈播散給人。其攜帶的耐藥基因盒與耐藥表型相符,且可轉(zhuǎn)移至其他細(xì)菌,介導(dǎo)細(xì)菌耐藥的水平傳播。第一類整合子陽(yáng)性和陰性菌株的基因型無(wú)直接關(guān)聯(lián)。2、首次闡述了從健康人分離的沙門氏菌攜帶SGI1這一現(xiàn)象,且SGI1可通過自然轉(zhuǎn)化方式轉(zhuǎn)移到其他菌株,介導(dǎo)多重耐藥的傳播�？傊�,健康人群中分離的沙門氏菌攜帶有第一類整合子及SGI1,且可以進(jìn)行轉(zhuǎn)移,這些菌株不僅可長(zhǎng)期在人體內(nèi)生存,且可以不斷向外界進(jìn)行排菌,與耐藥性的廣泛傳播密切相關(guān),一旦條件適合還有可能引起耐藥菌株的暴發(fā)流行,因此我們應(yīng)從基因水平全面監(jiān)測(cè)細(xì)菌耐藥情況,研究可能的耐藥機(jī)制,從而為制定相應(yīng)預(yù)防策略提供理論依據(jù)。
[Abstract]:At present, bacterial resistance has been a concern in the world. The incidence of bacterial infection and the rate of drug resistance of pathogens have been high, which poses a great threat to human health. Integron-drug resistance gene box system, as one of the main drug resistance mechanisms of pathogens, has become a hot topic in recent years. In this study, the distribution and characteristics of type I integron and Salmonella genomic island (SGI1) in healthy population were analyzed, and the relationship between them and bacterial resistance was analyzed. The susceptibility of 58 Salmonella strains carried by healthy people to 15 kinds of antibiotics will be tested by disk diffusion test according to (CLSI) of Clinical Laboratory Standardization Committee. Class I integrase gene (intI1) was detected by polymerase chain reaction (PCR). The sequence was analyzed by Standard nucleotide nucleotic BLAST on NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). The plasmids conjugation transfer test was used to localize and detect the mobility of the first class integron. Sau-PCR method was applied to the molecular typing of the strains. The bands were analyzed by Quantity One software and the dendrogram was drawn. At the same time, the first group of integron positive strains were tested for Salmonella Genome Island (SGI1), the left, right and middle genes were detected, and the positive amplification products were sequenced and sequenced. The exocyclic form and excision of SGI1 chromosomes were detected and its mobility was detected by conjugation transfer and natural transformation test. The results showed that: 1, the drug resistance of Salmonella isolated from healthy people was low, and the detection rate of the first integron was not high, which may be due to the low antibiotic pressure. The detection rate of drug resistance and integron increased. Practitioners are not exposed to antibiotics, so it is likely that the integron carried by bacteria in food is spread through the food chain. The drug resistance gene box is consistent with the phenotype of drug resistance and can be transferred to other bacteria to mediate the horizontal transmission of drug resistance of bacteria. There was no direct correlation between the genotype of positive and negative integron strains of the first type. 2. The phenomenon of SGI1 carrying by Salmonella isolated from healthy people was first expounded, and SGI1 could be transferred to other strains by natural transformation. To mediate the spread of multidrug resistance. In short, salmonella isolated from healthy people carries Class I integrons and SGI1, and can be transferred, which not only can survive in the human body for a long time, but also can constantly expel bacteria from the outside world. Is closely related to the widespread spread of drug resistance and, once conditions are appropriate, it is possible to cause outbreaks of drug-resistant strains. Therefore, we should comprehensively monitor bacterial drug resistance at the gene level and study the possible mechanisms of drug resistance. Thus provides the theoretical basis for the formulation of corresponding prevention strategies.
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R378

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本文編號(hào)：2337304