發(fā)布時間：2018-11-14 13:04

【摘要】： 肺移植是治療終末期肺病唯一有效的方法,但目前面臨困境,免疫抑制效果尚顯不足,免疫治療相關并發(fā)癥已十分嚴重,移植物排斥和免疫治療相關疾病嚴重影響了肺移植受者的長期生存。繼續(xù)加強非特異性免疫抑制可能對改善總體結果無益。 誘導移植耐受,即供者特異性免疫耐受,是目前最有希望的解困之道。在骨髓移植(BMT)和供者特異性輸注(DST)這兩個耐受現(xiàn)象的啟發(fā)下,含BMT方案和含DST逐漸發(fā)展成為移植耐受研究領域的兩類經(jīng)典誘導方案。2008年一個令人振奮的腎移植臨床試驗報告稱,在5例受者中有4例經(jīng)含BMT方案成功誘導出移植耐受。然而,輻照副反應和/或移植物抗宿主反應(GVHR)風險仍是含BMT方案、含DST方案應用于臨床器官移植的重大阻礙,尤其是對于那些終末期肺病患者。在過去十年,隨著共刺激阻滯藥物和新型免疫抑制劑的出現(xiàn),非特異性免疫抑制被進一步加強,但誘導供者特異性耐受的研究進展不大。 模仿其他耐受現(xiàn)象可能是研究供者特異性耐受誘導的另外一個突破口。除了BMT、DST相關耐受外,另外還有兩個已知的耐受現(xiàn)象,也就是自發(fā)肝移植耐受和多器官移植的免疫特惠現(xiàn)象。已經(jīng)明確,在嚙齒類動物模型中,肝、脾或胸腺的異體移植物可為同期或后續(xù)的同一供者來源的其他器官移植物提供免疫保護。由于操作復雜、創(chuàng)傷大,把聯(lián)合多器官移植開發(fā)成為像含BMT方案或含DST方案那樣的耐受誘導方案幾乎是不可能的。 移植領域近期一個新進展是,肝細胞移植可取代實體肝移植治療某些急性肝衰竭。在小鼠模型,肝細胞移植是通過脾內注射供者肝臟細胞來完成的。除了肝臟,脾臟和胸腺都可制成單個細胞懸液。因此,用細胞移植取代脾、胸腺實體器官移植也是有可能的。 本研究擬通過細胞移植來復制肝、脾和胸腺實體器官移植對小鼠異位氣管移植物的免疫保護作用。 第一部分:脾內細胞移植取代臟器移植誘導小鼠氣管移植物耐受的可行性研究 目的:研究脾內細胞移植取代臟器移植誘導小鼠氣管移植物耐受的可行性 材料與方法:供者為6～8周齡健康雄性BALB/c(H-2~d)小鼠,受者為6～8周齡健康雌性C57BL/6(H-2~b)小鼠。所有受者術前1d接受。~(60)Coγ射線全身輻照(TBI:5.5Gy),手術當天接受氣管異位移植和細胞移植。除了對照組(Con)外,200μl的5×10~6骨髓細胞經(jīng)尾靜脈注入。5.5B、5.5BS、5.5BT、5.5BH組受者分別接受脾內注射PBS(100μl)、脾細胞(1×10~7/100μl)、胸腺細胞(1×10~7/100μl)、或者肝臟細胞(1×10~7/100μl)。在術后1、3、5、7周流式細胞儀檢測外周血單核細胞的混合嵌合。監(jiān)測GVHR,直到受者死亡或者8周的觀察期到期。所有死于GVHR的受者做尸檢。組織學檢查氣管移植物、脾、肝和肺。 結果:在5.5BS、5.5BT組的受者檢測到供者巨嵌合(＞1%),第1周末時分別為54.3±13.1%和47.6±17.1%,但到7周末時很快降到9.9±7.0%和5.8±7.6%。這兩組受者在7周之后出現(xiàn)嚴重的GVHR,死亡率高達50%和60%。5.5B、5.5BH、Con組未出現(xiàn)嵌合,沒有GVHR,也沒有死亡。7周時氣管管腔在5.5B、5.5BH、Con組均已完全閉塞,而在5.5BS、5.5BT組閉塞25%。 結論:脾內細胞移植可以取代脾、胸腺的實體臟器移植,誘導小鼠異位氣管移植模型的移植耐受。這種移植后初期形成的免疫穩(wěn)態(tài)很脆弱,在沒有免疫抑制保護下迅速瓦解。脾內肝細胞移植技術上可行,但不能發(fā)揮類似于實體肝移植物的免疫保護作用。 第二部分:脾內注射與其他細胞移植途徑的比較研究 目的:確定脾內、胸腺內、靜脈內細胞移植三種途徑中哪一種最佳。 材料與方法:供者為6～8周齡健康雄性BALB/c(H-2~d)小鼠,受者為6～8周齡健康雌性C57BL/6(H-2~b)小鼠。所有受者術前1d接受~(60)Coγ射線全身輻照(TBI:5.5 Gy),手術當天接受氣管異位移植和細胞移植。除了對照組(Con)外,200μl的5×10~6骨髓細胞經(jīng)尾靜脈注入。5.5BT和5.5BBs組受者分別接受脾內注射胸腺細胞(1×10~7/100μl)、未分類的骨髓細胞(1×10~7/100μl)。5.5BTt組受者接受胸腺內注射胸腺細胞(每葉一半,總計1×10~7/100μl)。5.5BB組受者接受額外劑量(1×10~7/100μl)的尾靜脈內骨髓移植。在術后1、3、5、7周流式細胞儀檢測外周血單核細胞的混合嵌合。監(jiān)測GVHR,直到受者死亡或者8周的觀察期到期。所有死于GVHR的受者做尸檢。組織學檢查氣管移植物、脾、肝和肺。 結果:在5.5BT、5.5BTt和5.5BBs組的受者檢測到供者巨嵌合(＞1%),第1周末時分別為47.6±17.1%、40.1±8.3%和33.2±11.5%,但到7周末時很快降到5.8±7.6%、0.06±0.03和0.08±0.02%。5.5BT組受者在7周之后出現(xiàn)嚴重的GVHR,死亡率高達60%。5.5BB和Con組未出現(xiàn)嵌合,沒有GVHR,也沒有死亡。7周時氣管管腔在5.5BTt和5.5BBs幾乎閉鎖、在5.5BB和Con組完全閉塞,而在5.5BT組閉塞僅25%。 結論:在免疫保護方面,供者細胞脾內移植優(yōu)于胸腺內移植和外周靜脈移植。移植細胞的免疫反應性越大、免疫調節(jié)作用越好,脾內細胞移植是利用供者免疫反應性細胞誘導耐受的最佳途徑。 第三部分:脾內細胞移植的免疫特惠強度 目的:明確脾內細胞移植的免疫特惠強度。 材料與方法:供者為6～8周齡健康雄性BALB/c(H-2d)小鼠,受者為6～8周齡健康雌性C57BL/6(H-2b)小鼠。所有受者術前1d接受~(60)Coγ射線全身輻照(TBI:3.0Gy),手術當天接受氣管異位移植和細胞移植。除了對照組(Con)外,200μl的5×10~6骨髓細胞經(jīng)尾靜脈注入。3.0B、3.0BS、3.0BT、3.0BST、3.0BSTB和3.0BSTBL組受者分別接受脾內注射PBS(100μl)、脾細胞(1×10~7/100μl)、胸腺細胞(1×10~7/100μl)、脾+胸腺細胞(總計1×10~7/100μl)、脾+胸腺+骨髓細胞(總計1×10~7/100μl)、脾+胸腺+骨髓+外周血單核細胞(總計1×10~7/100μl)。在術后1、3、5、7周流式細胞儀檢測外周血單核細胞的混合嵌合。監(jiān)測GVHR,直到受者死亡或者8周的觀察期到期。所有死于GVHR的受者做尸檢。組織學檢查氣管移植物、脾、肝和肺。 結果:所有實驗組的受者在第1、3、5、7周末時均未檢測到外周血供者巨嵌合,沒有GVHR,也沒有死亡。7周時氣管管腔在所有實驗組均完全閉塞。 結論:當TBI從5.5Gy降到3.0 Gy,BMT(5×10~6/只)和脾內細胞移植(1×10~7/只)的方案不能誘導外周血嵌合與移植耐受。結合第一、二部分的研究推斷,脾內細胞移植免疫特惠強度大致相當于3～5.5Gy TBI,可能不如實體脾、胸腺移植,但優(yōu)于DST。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R653;R392.4

【參考文獻】

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本文編號：2331233