【摘要】： 肺移植是治療終末期肺病唯一有效的方法,但目前面臨困境,免疫抑制效果尚顯不足,免疫治療相關(guān)并發(fā)癥已十分嚴(yán)重,移植物排斥和免疫治療相關(guān)疾病嚴(yán)重影響了肺移植受者的長(zhǎng)期生存。繼續(xù)加強(qiáng)非特異性免疫抑制可能對(duì)改善總體結(jié)果無(wú)益。 誘導(dǎo)移植耐受,即供者特異性免疫耐受,是目前最有希望的解困之道。在骨髓移植(BMT)和供者特異性輸注(DST)這兩個(gè)耐受現(xiàn)象的啟發(fā)下,含BMT方案和含DST逐漸發(fā)展成為移植耐受研究領(lǐng)域的兩類經(jīng)典誘導(dǎo)方案。2008年一個(gè)令人振奮的腎移植臨床試驗(yàn)報(bào)告稱,在5例受者中有4例經(jīng)含BMT方案成功誘導(dǎo)出移植耐受。然而,輻照副反應(yīng)和/或移植物抗宿主反應(yīng)(GVHR)風(fēng)險(xiǎn)仍是含BMT方案、含DST方案應(yīng)用于臨床器官移植的重大阻礙,尤其是對(duì)于那些終末期肺病患者。在過(guò)去十年,隨著共刺激阻滯藥物和新型免疫抑制劑的出現(xiàn),非特異性免疫抑制被進(jìn)一步加強(qiáng),但誘導(dǎo)供者特異性耐受的研究進(jìn)展不大。 模仿其他耐受現(xiàn)象可能是研究供者特異性耐受誘導(dǎo)的另外一個(gè)突破口。除了BMT、DST相關(guān)耐受外,另外還有兩個(gè)已知的耐受現(xiàn)象,也就是自發(fā)肝移植耐受和多器官移植的免疫特惠現(xiàn)象。已經(jīng)明確,在嚙齒類動(dòng)物模型中,肝、脾或胸腺的異體移植物可為同期或后續(xù)的同一供者來(lái)源的其他器官移植物提供免疫保護(hù)。由于操作復(fù)雜、創(chuàng)傷大,把聯(lián)合多器官移植開(kāi)發(fā)成為像含BMT方案或含DST方案那樣的耐受誘導(dǎo)方案幾乎是不可能的。 移植領(lǐng)域近期一個(gè)新進(jìn)展是,肝細(xì)胞移植可取代實(shí)體肝移植治療某些急性肝衰竭。在小鼠模型,肝細(xì)胞移植是通過(guò)脾內(nèi)注射供者肝臟細(xì)胞來(lái)完成的。除了肝臟,脾臟和胸腺都可制成單個(gè)細(xì)胞懸液。因此,用細(xì)胞移植取代脾、胸腺實(shí)體器官移植也是有可能的。 本研究擬通過(guò)細(xì)胞移植來(lái)復(fù)制肝、脾和胸腺實(shí)體器官移植對(duì)小鼠異位氣管移植物的免疫保護(hù)作用。 第一部分:脾內(nèi)細(xì)胞移植取代臟器移植誘導(dǎo)小鼠氣管移植物耐受的可行性研究 目的:研究脾內(nèi)細(xì)胞移植取代臟器移植誘導(dǎo)小鼠氣管移植物耐受的可行性 材料與方法:供者為6～8周齡健康雄性BALB/c(H-2~d)小鼠,受者為6～8周齡健康雌性C57BL/6(H-2~b)小鼠。所有受者術(shù)前1d接受。~(60)Coγ射線全身輻照(TBI:5.5Gy),手術(shù)當(dāng)天接受氣管異位移植和細(xì)胞移植。除了對(duì)照組(Con)外,200μl的5×10~6骨髓細(xì)胞經(jīng)尾靜脈注入。5.5B、5.5BS、5.5BT、5.5BH組受者分別接受脾內(nèi)注射PBS(100μl)、脾細(xì)胞(1×10~7/100μl)、胸腺細(xì)胞(1×10~7/100μl)、或者肝臟細(xì)胞(1×10~7/100μl)。在術(shù)后1、3、5、7周流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血單核細(xì)胞的混合嵌合。監(jiān)測(cè)GVHR,直到受者死亡或者8周的觀察期到期。所有死于GVHR的受者做尸檢。組織學(xué)檢查氣管移植物、脾、肝和肺。 結(jié)果:在5.5BS、5.5BT組的受者檢測(cè)到供者巨嵌合(＞1%),第1周末時(shí)分別為54.3±13.1%和47.6±17.1%,但到7周末時(shí)很快降到9.9±7.0%和5.8±7.6%。這兩組受者在7周之后出現(xiàn)嚴(yán)重的GVHR,死亡率高達(dá)50%和60%。5.5B、5.5BH、Con組未出現(xiàn)嵌合,沒(méi)有GVHR,也沒(méi)有死亡。7周時(shí)氣管管腔在5.5B、5.5BH、Con組均已完全閉塞,而在5.5BS、5.5BT組閉塞25%。 結(jié)論:脾內(nèi)細(xì)胞移植可以取代脾、胸腺的實(shí)體臟器移植,誘導(dǎo)小鼠異位氣管移植模型的移植耐受。這種移植后初期形成的免疫穩(wěn)態(tài)很脆弱,在沒(méi)有免疫抑制保護(hù)下迅速瓦解。脾內(nèi)肝細(xì)胞移植技術(shù)上可行,但不能發(fā)揮類似于實(shí)體肝移植物的免疫保護(hù)作用。 第二部分:脾內(nèi)注射與其他細(xì)胞移植途徑的比較研究 目的:確定脾內(nèi)、胸腺內(nèi)、靜脈內(nèi)細(xì)胞移植三種途徑中哪一種最佳。 材料與方法:供者為6～8周齡健康雄性BALB/c(H-2~d)小鼠,受者為6～8周齡健康雌性C57BL/6(H-2~b)小鼠。所有受者術(shù)前1d接受~(60)Coγ射線全身輻照(TBI:5.5 Gy),手術(shù)當(dāng)天接受氣管異位移植和細(xì)胞移植。除了對(duì)照組(Con)外,200μl的5×10~6骨髓細(xì)胞經(jīng)尾靜脈注入。5.5BT和5.5BBs組受者分別接受脾內(nèi)注射胸腺細(xì)胞(1×10~7/100μl)、未分類的骨髓細(xì)胞(1×10~7/100μl)。5.5BTt組受者接受胸腺內(nèi)注射胸腺細(xì)胞(每葉一半,總計(jì)1×10~7/100μl)。5.5BB組受者接受額外劑量(1×10~7/100μl)的尾靜脈內(nèi)骨髓移植。在術(shù)后1、3、5、7周流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血單核細(xì)胞的混合嵌合。監(jiān)測(cè)GVHR,直到受者死亡或者8周的觀察期到期。所有死于GVHR的受者做尸檢。組織學(xué)檢查氣管移植物、脾、肝和肺。 結(jié)果:在5.5BT、5.5BTt和5.5BBs組的受者檢測(cè)到供者巨嵌合(＞1%),第1周末時(shí)分別為47.6±17.1%、40.1±8.3%和33.2±11.5%,但到7周末時(shí)很快降到5.8±7.6%、0.06±0.03和0.08±0.02%。5.5BT組受者在7周之后出現(xiàn)嚴(yán)重的GVHR,死亡率高達(dá)60%。5.5BB和Con組未出現(xiàn)嵌合,沒(méi)有GVHR,也沒(méi)有死亡。7周時(shí)氣管管腔在5.5BTt和5.5BBs幾乎閉鎖、在5.5BB和Con組完全閉塞,而在5.5BT組閉塞僅25%。 結(jié)論:在免疫保護(hù)方面,供者細(xì)胞脾內(nèi)移植優(yōu)于胸腺內(nèi)移植和外周靜脈移植。移植細(xì)胞的免疫反應(yīng)性越大、免疫調(diào)節(jié)作用越好,脾內(nèi)細(xì)胞移植是利用供者免疫反應(yīng)性細(xì)胞誘導(dǎo)耐受的最佳途徑。 第三部分:脾內(nèi)細(xì)胞移植的免疫特惠強(qiáng)度 目的:明確脾內(nèi)細(xì)胞移植的免疫特惠強(qiáng)度。 材料與方法:供者為6～8周齡健康雄性BALB/c(H-2d)小鼠,受者為6～8周齡健康雌性C57BL/6(H-2b)小鼠。所有受者術(shù)前1d接受~(60)Coγ射線全身輻照(TBI:3.0Gy),手術(shù)當(dāng)天接受氣管異位移植和細(xì)胞移植。除了對(duì)照組(Con)外,200μl的5×10~6骨髓細(xì)胞經(jīng)尾靜脈注入。3.0B、3.0BS、3.0BT、3.0BST、3.0BSTB和3.0BSTBL組受者分別接受脾內(nèi)注射PBS(100μl)、脾細(xì)胞(1×10~7/100μl)、胸腺細(xì)胞(1×10~7/100μl)、脾+胸腺細(xì)胞(總計(jì)1×10~7/100μl)、脾+胸腺+骨髓細(xì)胞(總計(jì)1×10~7/100μl)、脾+胸腺+骨髓+外周血單核細(xì)胞(總計(jì)1×10~7/100μl)。在術(shù)后1、3、5、7周流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血單核細(xì)胞的混合嵌合。監(jiān)測(cè)GVHR,直到受者死亡或者8周的觀察期到期。所有死于GVHR的受者做尸檢。組織學(xué)檢查氣管移植物、脾、肝和肺。 結(jié)果:所有實(shí)驗(yàn)組的受者在第1、3、5、7周末時(shí)均未檢測(cè)到外周血供者巨嵌合,沒(méi)有GVHR,也沒(méi)有死亡。7周時(shí)氣管管腔在所有實(shí)驗(yàn)組均完全閉塞。 結(jié)論:當(dāng)TBI從5.5Gy降到3.0 Gy,BMT(5×10~6/只)和脾內(nèi)細(xì)胞移植(1×10~7/只)的方案不能誘導(dǎo)外周血嵌合與移植耐受。結(jié)合第一、二部分的研究推斷,脾內(nèi)細(xì)胞移植免疫特惠強(qiáng)度大致相當(dāng)于3～5.5Gy TBI,可能不如實(shí)體脾、胸腺移植,但優(yōu)于DST。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R653;R392.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2331234