【摘要】： 近年來,人們對于免疫細(xì)胞亞群及其功能的認(rèn)識大為拓展,特別是對于T細(xì)胞亞群的研究有了許多新的進(jìn)展,除了以往廣泛公認(rèn)的Th1、Th2之外,近年來對于調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)、Thl7、Th9, Tfh等T細(xì)胞亞群的進(jìn)一步區(qū)分與功能特征的研究以及與臨床疾病的聯(lián)系,使得人們對于免疫應(yīng)答與免疫調(diào)控的細(xì)胞與分子機制研究有了更深入的認(rèn)識。此外,對于巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞(DC)的亞群、特別是M2和調(diào)節(jié)性DC亞群的研究也有了新的進(jìn)展。但是,目前對于機體體液免疫中最關(guān)鍵的免疫細(xì)胞.---B細(xì)胞(B lymphocytes)的亞群及其相應(yīng)的功能特征的研究相比而言比較少。過去認(rèn)為B細(xì)胞通過分泌抗體,在體液免疫系統(tǒng)中發(fā)揮“指揮家”的作用；B細(xì)胞還是一類重要的抗原提呈細(xì)胞,參與對抗原的攝取、加工、提呈,在啟動獲得性免疫應(yīng)答中起重要作用；此外,B細(xì)胞還可以通過分泌多種細(xì)胞因子和某些趨化因子以及表達(dá)某些重要膜分子,參與免疫應(yīng)答的調(diào)控�？梢�,B細(xì)胞具有功能多樣性,通過進(jìn)一步研究B細(xì)胞的亞群組成及其功能特征,將有助于全面認(rèn)識B細(xì)胞的功能和作用,從而對免疫應(yīng)答與調(diào)控的方式與機制增添新的學(xué)術(shù)觀點。 根據(jù)表面分子、定位和功能特點的不同,B細(xì)胞被分為B-1細(xì)胞和B-2細(xì)胞。B-2細(xì)胞即為傳統(tǒng)意義的B細(xì)胞。而B-1細(xì)胞主要在胚胎的胎肝、網(wǎng)膜中發(fā)育,分布于腹腔、胸腔和腸壁固有層中,又分為B-1a細(xì)胞(CD11b+CD5+)和B-1b細(xì)胞(CDllb+CD5-)。B-1細(xì)胞在IL-10幫助下保持自我更新能力,通過識別某些細(xì)菌表面共有的多糖抗原和一些變形的自身抗原,B-1a細(xì)胞及其分泌的自身抗體在幼兒的抗感染免疫中提供有效保護(hù),而B-lb細(xì)胞在感染時則能對多糖和其他非T細(xì)胞依賴性的抗原產(chǎn)生長效的抗體應(yīng)答。近年來,人們發(fā)現(xiàn)了一類可以分泌IL-10的B細(xì)胞,根據(jù)其功能而將之稱為調(diào)節(jié)性B細(xì)胞(regulatory B cell),作為一類新的B細(xì)胞亞群,其能夠調(diào)節(jié)機體免疫應(yīng)答,大量的基礎(chǔ)研究和臨床證據(jù)表明,B細(xì)胞的功能具有明顯的異質(zhì)性,提示B細(xì)胞在免疫應(yīng)答被激活后可能分化為多個不同的功能亞群參與并調(diào)控免疫應(yīng)答,參與腫瘤、自身免疫性疾病等疾病的發(fā)生發(fā)展過程,因此,有關(guān)新的B細(xì)胞亞群的發(fā)現(xiàn)與功能分析成為近年來免疫學(xué)研究的熱點之一。 由于天然免疫系統(tǒng)是機體抵御病原體入侵的第一道屏障,近年來已成為免疫學(xué)研究的重要領(lǐng)域,天然免疫應(yīng)答由NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞等天然免疫細(xì)胞介導(dǎo),通過模式識別受體識別細(xì)菌、真菌及病毒成分并活化,引發(fā)下游的多種免疫效應(yīng),但B細(xì)胞在其中的作用如何尚不明確。但一方面,B細(xì)胞能夠不依賴BCR信號介導(dǎo)而被活化；另一方面,由于B細(xì)胞能表達(dá)多種Toll樣受體(如TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、TLR9)和其他的模式識別受體識別,那么病原體感染后微環(huán)境中存在的多種TLR配體及模式識別配體有可能能夠通過與B細(xì)胞上的受體交聯(lián),激發(fā)下游的信號傳遞,從而為B細(xì)胞參與天然免疫反應(yīng)以及隨后調(diào)控免疫反應(yīng)奠定了基礎(chǔ)。 考慮到B細(xì)胞組成的異質(zhì)性以及B細(xì)胞參與天然免疫應(yīng)答和調(diào)控獲得性免疫應(yīng)答的多樣性功能特點,我們在本研究中分為三部分,研究了病原體感染或者病原體成分激活天然免疫反應(yīng)之后B細(xì)胞的亞群組成,以及我們所發(fā)現(xiàn)和鑒定的新型B細(xì)胞亞群的功能特點與相關(guān)作用機制,還對B細(xì)胞發(fā)育和功能分化的轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控機制進(jìn)行了初步探討,以期為B細(xì)胞參與免疫應(yīng)答調(diào)控及其作用機制,以及其功能分化的分子機制增添新的認(rèn)識。 一、CD19+DX5+B細(xì)胞亞群(NKB)的發(fā)現(xiàn)及其參與天然免疫、 調(diào)控獲得性免疫的作用與相關(guān)機制 為了探索B細(xì)胞在病原體感染后機體免疫應(yīng)答中的作用,我們對李斯特菌、大腸桿菌、水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus, VSV)感染的小鼠模型及TLR配體LPS、CpG-ODN、poly I:C注射的小鼠炎癥模型的各臟器B細(xì)胞采用流式細(xì)胞儀分析,發(fā)現(xiàn)了一群由病原體感染和TLR配體誘導(dǎo)增加的并廣泛分布于骨髓、脾臟、淋巴結(jié)組織中CD19+DX5+新型細(xì)胞亞群。為了進(jìn)一步探索其特征,我們動態(tài)檢測了其產(chǎn)生過程,發(fā)現(xiàn)脾臟中CD19+DX5+雙陽性細(xì)胞在細(xì)菌感染后第3天數(shù)量開始顯著上升,到第7天達(dá)到峰值,其后逐漸下降,直至感染后第17-21天恢復(fù)至初始水平；而在LPS、CpG-ODN、polyI:C體內(nèi)注射所誘導(dǎo)的小鼠模型中,CD19+DX5+細(xì)胞數(shù)量于刺激后第5天達(dá)高峰,隨后下降；結(jié)果表明,該細(xì)胞亞群可被病原體感染或者病原體組分刺激所誘導(dǎo)產(chǎn)生,提示其可能會參與或者調(diào)控機體抗感染的天然免疫及獲得性免疫應(yīng)答。 流式分析發(fā)現(xiàn)CD19+DX5+雙陽性細(xì)胞表面表達(dá)NK及B細(xì)胞的相關(guān)表面標(biāo)志,包括mIgD、mIgM、B220、IA-e、CD40、CD 154、CD86、Ly49A、Ly49C/I、Ly49D、NKG2D、NKG2A/C/E、CD43、CD25、CD122、CD 11b等。電鏡下CD19+DX5+雙陽性細(xì)胞染色質(zhì)疏松,胞漿富含線粒體和高爾基體。胞內(nèi)染色及ELISA結(jié)果顯示其分泌IFN-γ、IL-1α、IL-1β、IL-6、Granzyme-B,而不分泌Th2型細(xì)胞因子IL-4和IL-10。此外,由于該細(xì)胞具有B細(xì)胞的表面標(biāo)志,我們檢測其免疫球蛋白分泌,發(fā)現(xiàn)該細(xì)胞在LPS刺激后可以分泌IgG2a、IgG2b、IgG3、IgM,采用李斯特菌感染B細(xì)胞缺陷Btk-/-小鼠及NK細(xì)胞剔除小鼠證明體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生的該細(xì)胞亞群來源于B細(xì)胞而非NK細(xì)胞,由此推測CD19+DX5+細(xì)胞是一個具有NK樣表型和分泌細(xì)胞因子特征的B淋巴細(xì)胞亞群(我們簡稱NKB)。 我們在體外將DX5-CD19+B細(xì)胞分別與純化的CD4+或CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng),并加入LPS刺激,發(fā)現(xiàn)樹突狀細(xì)胞可以誘導(dǎo)DX5+CD19+NKB細(xì)胞的產(chǎn)生。為進(jìn)一步明確其產(chǎn)生機制,我們在共培養(yǎng)體系中分別采用0.4μM transwell或者加入抗IL-6、IL-1β、IL-12、CD40、CD40L的單克隆抗體,發(fā)現(xiàn)樹突狀細(xì)胞可以通過CD40-CD40L途徑誘導(dǎo)NKB細(xì)胞產(chǎn)生,且其分泌的IL-6和IL-1β對這一過程有促進(jìn)作用,李斯特菌感染的CD 11 c-DTR、Cd40-/-、Cd401-/小鼠體內(nèi)實驗結(jié)果進(jìn)一步證實了一旦缺失了樹突狀細(xì)胞、CD40-CD40L相互作用,NKB細(xì)胞將不能被誘導(dǎo)產(chǎn)生；而在李斯特菌感染僅能在I11r-/-及I16-/-小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生少量NKB細(xì)胞。證明了NKB的產(chǎn)生需要樹突狀細(xì)胞通過CD40-CD40L與B細(xì)胞前體相互作用,IL-6和IL-1β對這一誘導(dǎo)過程有促進(jìn)作用。 接下來我們研究了NKB細(xì)胞在細(xì)菌感染天然免疫應(yīng)答的作用,發(fā)現(xiàn)NKB細(xì)胞通過分泌的IFN-γ活化巨噬細(xì)胞,可以增強其對胞內(nèi)菌的殺傷,抑制李斯特菌在胞內(nèi)的數(shù)量增長；體內(nèi)回輸NKB細(xì)胞也顯著降低李斯特菌感染早期的肝脾細(xì)菌負(fù)荷并上調(diào)血清IFN-γ水平,但回輸Ifnγ-/-NKB細(xì)胞則無類似效應(yīng)。說明NKB細(xì)胞能通過其分泌的IFN-γ激活巨噬細(xì)胞,參與細(xì)菌感染早期的天然免疫應(yīng)答反應(yīng)。 由于NKB細(xì)胞數(shù)量高峰出現(xiàn)于感染第7天,因此我們對C57BL／6小鼠回輸CD45.1+OT-I CD8+T細(xì)胞,然后感染能分泌OVA的李斯特菌株(LM-OVA),旨在研究NKB細(xì)胞在獲得性免疫應(yīng)答的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與感染后第7天的NKB細(xì)胞共培養(yǎng)可以促進(jìn)李斯特菌感染小鼠抗原特異性CD8+T細(xì)胞的凋亡。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)NKB細(xì)胞來源的IFN-γ能上調(diào)其本身表達(dá)FasL及OT-I CD8+T細(xì)胞Fas的表達(dá),旦阻斷IFN-γ或Fas-FasL信號,則NKB細(xì)胞誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞的凋亡比例降低。我們在LM-OVA感染Btk-／-小鼠前后分別回輸CD45.1+OT-I CD8+T細(xì)胞與NKB細(xì)胞、NK細(xì)胞或B細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)細(xì)菌感染7天后NKB細(xì)胞回輸組CD8+T細(xì)胞數(shù)量較與NK細(xì)胞或B細(xì)胞回輸組顯著下降,但CD8+T細(xì)胞表面活化標(biāo)志CD44.CD62L.CD69較對照組表達(dá)無顯著變化。采用CFSE標(biāo)記的OT-I CD8+T細(xì)胞與NKB細(xì)胞共同回輸并檢測李斯特菌感染3天后T細(xì)胞增殖,結(jié)果表明OT-I CD8+T細(xì)胞增殖并無差異,結(jié)果表明,NKB細(xì)胞在體內(nèi)不顯著影響抗原特異性CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生。若采用Ifnγ-/-或Fasl-/-小鼠NKB細(xì)胞與OT-ⅠCD8+T細(xì)胞共同回輸,對OT-IT細(xì)胞的數(shù)量及活化并無影響。因此,于感染第7天大量誘導(dǎo)產(chǎn)生的NKB細(xì)胞通過IFN-γ和Fas-FasL通路可以促進(jìn)抗原特異性CD8+T細(xì)胞凋亡,使得抗原特異性獲得性免疫應(yīng)答反應(yīng)受到適度的負(fù)相調(diào)控,從而利于維持免疫應(yīng)答的穩(wěn)定性。可見,我們發(fā)現(xiàn)的這群由病原體感染誘導(dǎo)產(chǎn)生的CD19+DX5+NKB細(xì)胞在天然免疫應(yīng)答的早期通過IFN-γ激活巨噬細(xì)胞而起促進(jìn)作用,發(fā)揮了NK細(xì)胞樣的天然免疫效應(yīng)細(xì)胞的作用；但在獲得性免疫應(yīng)答的晚期大量產(chǎn)生之后,其通過IFN-γ和Fas-FasL通路誘導(dǎo)抗原特異性CD8+T細(xì)胞凋亡而對免疫應(yīng)答反應(yīng)起負(fù)相調(diào)控作用,發(fā)揮了調(diào)節(jié)性B細(xì)胞樣的作用,表明該新型B細(xì)胞亞群具有獨特的雙重免疫功能,即被病原體感染誘導(dǎo)產(chǎn)生之后反饋促進(jìn)天然免疫誘導(dǎo)以利于機體清除病原體,但另外一方面,通過負(fù)相調(diào)控抗原特異性CD8+T細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)以利于免疫應(yīng)答處于平衡狀態(tài),從而避免免疫應(yīng)答過度活化之后造成機體病理學(xué)損害。 二、CD19+PDCA-1+B細(xì)胞亞群的發(fā)現(xiàn)及其參與天然免疫功能 與機制的研究 我們在實驗中發(fā)現(xiàn)Btk-／-小鼠對李斯特菌感染相比野生型小鼠具有較高易感性,在感染早期的肝臟和脾臟細(xì)菌增殖更活躍,且血清IFN-γ水平低下,提示B細(xì)胞在抗御李斯特菌感染中起重要作用。為了明確B細(xì)胞在抗感染天然免疫應(yīng)答中的功能,我們在李斯特菌及大腸桿菌體內(nèi)感染48小時后的C57BL／6小鼠脾臟細(xì)胞的B細(xì)胞及其亞群進(jìn)行了分析,發(fā)現(xiàn)了一群廣泛分布于骨髓、脾臟、淋巴結(jié)的CD19+PDCA-1+雙陽性細(xì)胞,在感染后48小時達(dá)高峰,隨后逐漸降低,至第八天達(dá)到感染前水平,提示該細(xì)胞可能直接參與機體的天然免疫應(yīng)答過程。 共聚焦顯微鏡及H-E染色后觀察結(jié)果顯示,CD19+PDCA-1+雙陽性細(xì)胞直徑6-8μM,呈圓形,表面光滑,細(xì)胞質(zhì)稀少,細(xì)胞核致密,具有典型的B淋巴細(xì)胞形態(tài)特征；膜表面表達(dá)mIgM.mIgD.B220.CD23等B細(xì)胞特異性分子；胞內(nèi)表達(dá)Thl型細(xì)胞因子IL-12p40、TNF-α、IL-1α、IL-6,并在HKLM刺激后高分泌IFN-α。綜合以上特征,我們認(rèn)為CD19+PDCA-1+雙陽性細(xì)胞是一群獨特的具有Ⅰ型干擾素分泌能力的新型B淋巴細(xì)胞亞群。 采用體外細(xì)胞共培養(yǎng),我們證明在熱滅活的李斯特菌(Heat-killed L. monocytogenes)刺激下,巨噬細(xì)胞能夠誘導(dǎo)CD19+PDCA-1-細(xì)胞向CD19+PDCA-1+細(xì)胞分化；究其機制,我們在共培養(yǎng)體系中分別采用0.4μM transwell各兩者隔離開,或者加入CD40、CD40L、IFN-γ阻斷性抗體以及相應(yīng)重組細(xì)胞因子,發(fā)現(xiàn)CD19+ PDCA-1+細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生顯著減少。此外,我們在李斯特菌感染的Cd40-/-、Cd401-/-小鼠體內(nèi)也無法檢測到CD19+ PDCA-1+細(xì)胞的產(chǎn)生,而在相應(yīng)的Ifnγ-/-小鼠模型中也檢測到了PDCA-1+ B細(xì)胞比例顯著下降。結(jié)果表明,巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)PDCA-1+CD19+細(xì)胞的產(chǎn)生是由IFN-γ和CD40-CD40L信號介導(dǎo)的。 根據(jù)PDCA-1+B細(xì)胞的產(chǎn)生特點以及B細(xì)胞缺陷的Btk-/-小鼠在早期對李斯特菌感染的高易感性,我們認(rèn)為這群PDCA-1+B細(xì)胞是參與機體抗感染天然免疫應(yīng)答的B細(xì)胞亞群。體外實驗證實PDCA-1+B細(xì)胞對李斯特菌在巨噬細(xì)胞內(nèi)增殖并無顯著直接影響。已知NK細(xì)胞活化和分泌大量IFN-γ對于李斯特菌體內(nèi)清除其重要作用,為了觀察PDCA-1+B細(xì)胞對李斯特菌體內(nèi)清除的影響,我們將其與NK細(xì)胞共培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)PDCA-1+B細(xì)胞能通過分泌IFN-a促進(jìn)NK細(xì)胞活化,殺傷Yac-1細(xì)胞,并分泌IFN-γ。對李斯特菌感染的Btk-/-小鼠回輸PDCA-1+B細(xì)胞能有效降低臟器中的細(xì)菌負(fù)荷并上調(diào)外周血IFN-γ水平；但若用純化的PK136抗體將NK細(xì)胞剔除后,回輸PDCA-1+B細(xì)胞對李斯特菌感染的Btk-/-小鼠的保護(hù)作用消失,且回輸Ifnγ-/-鼠來源的NK細(xì)胞也無法恢復(fù)PDCA-1+B細(xì)胞對李斯特菌感染時對機體的保護(hù)效應(yīng)。 因此，，我們通過體內(nèi)外實驗證實,由病原體感染所誘導(dǎo)產(chǎn)生的PDCA-1+B細(xì)胞能在李斯特菌感染早期通過其分泌的IFN-a激活NK細(xì)胞并促進(jìn)其IFN-γ的分泌,從而參與機體天然免疫應(yīng)答,利于機體清除入侵的病原體。本研究為B細(xì)胞直接參與抗感染免疫應(yīng)答提供了新的實驗依據(jù),也為全面認(rèn)識B細(xì)胞亞群的非經(jīng)典的生物學(xué)功能提出了新的研究方向。 三、轉(zhuǎn)錄因子Foxpl對B細(xì)胞功能調(diào)控作用的初步探討 研究表明,轉(zhuǎn)錄因子對于免疫細(xì)胞的分化發(fā)育起決定性作用。Foxp亞家族(Foxpl,Foxp2,Foxp3)的功能及調(diào)控機制研究已成為近年來人們的研究熱點。Foxpl從小鼠B淋巴瘤細(xì)胞系BCL1中被首次發(fā)現(xiàn)和克隆至今已逾十年,但有關(guān)它在免疫細(xì)胞發(fā)育分化過程中的作用及相關(guān)機制的研究卻剛剛起步。近年來,Foxpl對B細(xì)胞、T細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞的發(fā)育分化乃和功能調(diào)控的作用陸續(xù)被人們提出并證實,這一系列的發(fā)現(xiàn)令Foxpl這一重要轉(zhuǎn)錄因子在免疫細(xì)胞分化發(fā)育及功能調(diào)控中的作用與機制研究越來越受到關(guān)注。 為探索B細(xì)胞及其亞群的發(fā)育及功能分化的轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控機制,我們初步探討了在LPS刺激或病原體感染后Foxpl對B細(xì)胞的功能影響。我們發(fā)現(xiàn)Foxpl表達(dá)廣泛,在心臟、腦、肺、肝、腎、胸腺、脾、腋窩淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)和骨髓中均有表達(dá),其中心、腦、肺、胸腺、脾臟、腋窩和腸系膜淋巴結(jié)中Foxp1表達(dá)較高。我們進(jìn)一步鑒定了本室引進(jìn)的Foxp1基因敲除小鼠(Foxp1-/-)B細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中Foxp1蛋白表達(dá)較野生型Foxp1+／+小鼠的相應(yīng)免疫細(xì)胞的表達(dá)水平下調(diào)80%-90%。我們對Foxp1-/-小鼠的B細(xì)胞功能進(jìn)行了初步分析,研究發(fā)現(xiàn),無論是LPS體外刺激還是李斯特菌體內(nèi)感染,Foxp1-/-B細(xì)胞的IL-10分泌均顯著下調(diào)；另一方面,在LPS刺激后Foxp1-/小鼠中B細(xì)胞的炎性因子IL-6、IFN-α、IFN-γ較野生型小鼠B細(xì)胞分泌量上升,但對李斯特菌體內(nèi)感染的B細(xì)胞的細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平進(jìn)行分析,我們并未獲得同樣結(jié)果,IL-6、IFN-a表達(dá)較野生型小鼠并無顯著變化,但I(xiàn)FN-γ的mRNA表達(dá)水平卻顯著下調(diào)。由此我們推測,Foxp1對B細(xì)胞負(fù)向免疫調(diào)控功能可能具有潛在的誘導(dǎo)作用；而Foxp1對B細(xì)胞炎性因子分泌的影響以及對B細(xì)胞抗感染免疫應(yīng)答功能的調(diào)控作用尚不明確,需要我們設(shè)計實驗進(jìn)行深入探討。 四、總結(jié) 在第一部分實驗中,發(fā)現(xiàn)并鑒定了一群具有NK細(xì)胞樣特征、能夠分泌IFN-γ的DX5+ CD19+ B細(xì)胞,稱為NKB細(xì)胞亞群。NKB細(xì)胞能在免疫應(yīng)答早期(李斯特菌感染3天內(nèi)天然免疫階段)通過分泌IFN-γ激活巨噬細(xì)胞、促進(jìn)其對胞內(nèi)菌的清除,發(fā)揮了NK細(xì)胞樣的功能；NKB細(xì)胞能在免疫應(yīng)答晚期(李斯特菌感染7天獲得性免疫階段)通過分泌的IFN-γ上調(diào)自身FasL及抗原特異性CD8+T細(xì)胞表面Fas的表達(dá),從而誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞凋亡,從而發(fā)揮了調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的功能,適度控制了獲得性免疫應(yīng)答的強度,從而使得抗原特異性T細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)受到適度的負(fù)相調(diào)控,有助于維持免疫應(yīng)答的穩(wěn)定性�？梢�,該病原體感染誘導(dǎo)產(chǎn)生的新型NKB細(xì)胞亞群具有NK細(xì)胞的天然免疫應(yīng)答效應(yīng)和調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的負(fù)相免疫調(diào)控功能,其分泌的IFN-γ在介導(dǎo)其雙重功能中起重要的作用。新型B細(xì)胞亞群(DX5+ CD19+ NKB)的發(fā)現(xiàn)與初步揭示的其功能特點,為天然免疫的效應(yīng)機制增添了新的學(xué)術(shù)觀點,也豐富了人們對調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的負(fù)向調(diào)控功能及機制的認(rèn)識,并為獲得性免疫負(fù)向調(diào)控提出了新機制。 在第二部分實驗中,發(fā)現(xiàn)并鑒定了一群能分泌IFN-α的CD19+ PDCA-1+ B細(xì)胞,該新型B細(xì)胞亞群能通過分泌的IFN-α而激活NK細(xì)胞并促進(jìn)其分泌IFN-γ,從而參與、促進(jìn)了胞內(nèi)菌感染早期的天然免疫應(yīng)答過程。此外,我們的研究結(jié)果證明,IFN-α能正反饋調(diào)節(jié)IFN-γ信號通路,這一發(fā)現(xiàn)為病原體入侵機體后天然免疫應(yīng)答的快速啟動及蛋白調(diào)控提出了新機制,也為B細(xì)胞的天然免疫功能增添了新的認(rèn)識。 在第三部分實驗中,我們對B細(xì)胞及其亞群的發(fā)育及功能分化的轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控機制進(jìn)行了初步探討,結(jié)果發(fā)現(xiàn),在LPS體外刺激和李斯特菌體內(nèi)感染后轉(zhuǎn)錄因子Foxp1的表達(dá)均能促進(jìn)B細(xì)胞分泌IL-10,但其炎性因子分泌變化趨勢并不相同,我們推測Foxp1對B細(xì)胞負(fù)向免疫調(diào)控功能可能具有潛在的誘導(dǎo)作用,而其對B細(xì)胞抗感染免疫應(yīng)答的調(diào)控作用以及在B細(xì)胞亞群產(chǎn)生和功能中作用尚不明確,需要將來開展進(jìn)一步實驗深入探討。 總之,深入研究B細(xì)胞及其亞群在不同感染模型中的功能及其機制將有助于我們進(jìn)一步了解B細(xì)胞在機體受到外來病原體或者異源抗原刺激后免疫應(yīng)答的啟動、維持和調(diào)控中的作用,更加全面認(rèn)識機體復(fù)雜而平衡的免疫調(diào)控網(wǎng)絡(luò),并為免疫細(xì)胞亞群認(rèn)識的拓展及感染性疾病的免疫治療提供新思路。
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【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R392

【引證文獻(xiàn)】

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1 孫雪;曾浪;孫卓;李翠英;;調(diào)節(jié)性B細(xì)胞在慢性炎癥疾病及自身免疫疾病的作用機制[J];遼寧醫(yī)學(xué)雜志;2011年04期

本文編號：2307560