【摘要】： 第一部分細(xì)胞毒性T細(xì)胞聯(lián)合PD-L1單抗對肺癌作用的體外研究 目的: 通過誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytotoxic T lymphocyte ,CTL),觀察CTL單獨(dú)或聯(lián)合PD-L1單抗對肺癌細(xì)胞的體外殺傷作用。 方法: 采用70%Ficoll淋巴細(xì)胞分離液密度梯度離心法獲得外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),培養(yǎng)2小時后貼壁細(xì)胞采用含GM-CSF(100μg/L)、IL-4(50μg/L)、10%FCS的RPMI1640誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞(dendritic cells ,DCs),培養(yǎng)第6天,采用凋亡的H1299肺癌細(xì)胞進(jìn)行腫瘤抗原負(fù)載(DCs:凋亡細(xì)胞=5:1),24 h后加入激發(fā)型CD40單克隆抗體(5mg/L)繼續(xù)誘導(dǎo)2d,收集誘導(dǎo)成熟的DCs與自體T細(xì)胞按1:50的比例混合共育4天,獲得相關(guān)抗原特異性的CTL細(xì)胞;用流式細(xì)胞儀檢測CTL細(xì)胞表型;四甲基偶氮唑藍(lán)(MMT)法測定CTL及CTL聯(lián)合PD-L1單抗對腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒作用;用Annexin-V、PI雙染檢測CTL單獨(dú)及聯(lián)合PD-L1單抗作用于H1299細(xì)胞的凋亡作用,Annexin-V聯(lián)合CD3-PE單抗檢測H1299細(xì)胞單獨(dú)或聯(lián)合PD-L1單抗對CTL細(xì)胞的凋亡作用;ELISA法檢測不同組別CTL和H1299共培養(yǎng)上清液中IFN-γ,IL-2濃度。 結(jié)果: 1.凋亡腫瘤細(xì)胞負(fù)載并經(jīng)CD40激發(fā)型單抗5C11誘導(dǎo)分化成熟的DCs表面CD1α、CD83、HLA-DR表達(dá)上調(diào)(P0.05);2.與單獨(dú)CTL組相比,CTL聯(lián)合PD-L1單抗實(shí)驗(yàn)組能夠更有效殺傷H1299細(xì)胞并能有效地誘導(dǎo)H1299細(xì)胞凋亡,CTL組及CTL聯(lián)合PD-L1單抗組H1299凋亡率分別為(41.9±9.8) %、(63.2±11.7) % ,兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)PD-L1單抗聯(lián)合CTL細(xì)胞促進(jìn)CTL細(xì)胞分泌IL-2(162.3±20)pg/ml,與單純CTL組(115.38±12.23)pg/ml相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論: 1.采用成熟凋亡腫瘤細(xì)胞負(fù)載的DC獲得的CTL可有效殺傷H1299肺癌細(xì)胞,聯(lián)合PD-L1單抗較單獨(dú)CTL更為有效的殺傷肺癌細(xì)胞; 2.通過上述方法獲得的CTL在H1299細(xì)胞作用下發(fā)生凋亡作用,聯(lián)合PD-L1單抗可抑制H1299誘導(dǎo)的CTL細(xì)胞的凋亡; 3.CTL聯(lián)合PD-L1單抗可促進(jìn)CTL細(xì)胞分泌IL-2。 第二部分細(xì)胞毒性T細(xì)胞聯(lián)合PD-L1單抗對肺癌作用的體內(nèi)研究 目的: 觀察細(xì)胞毒性T細(xì)胞單獨(dú)或聯(lián)合PD-L1單抗對裸鼠肺癌移植瘤模型的免疫治療作用。 方法: 建立人肺癌裸鼠異種移植瘤模型,荷瘤裸鼠隨機(jī)分為4組:1.生理鹽水治療組;2. PD-L1單抗治療組;3. CTL治療組;4. CTL聯(lián)合PD-L1單抗治療組,觀察荷瘤裸鼠體內(nèi)腫瘤生長情況及體積大小;檢測裸鼠血清中IL-10,IL-2水平的變化。 結(jié)果: 1.在第51天,生理鹽水治療組、PD-L1組、CTL組、CTL+PD-L1單抗聯(lián)合組荷瘤裸鼠腫瘤體積分別為(1.39±0.63)cm3、(1.53±0.71 )cm3、(0.63±0.26 )cm3和(0.16±0.03)cm3;CTL組、CTL+PD-L1單抗聯(lián)合組腫瘤生長明顯受抑制,與生理鹽水組,PD-L1組相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);CTL聯(lián)合PD-L1單抗組比CTL組腫瘤體積縮小更為明顯,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 2.生理鹽水治療組、PD-L1組、CTL組、CTL+PD-L1單抗聯(lián)合組IL-2水平分別為(160.5±44.9)pg/ml、(133.4±46.2)pg/ml、(321.1±24.1)pg/ml、(469.4±8.5)pg/ml,CTL組和CTL聯(lián)合PD-L1單抗組IL-2水平明顯升高,與生理鹽水組,PD-L1組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);IL-10水平分別為(556.4±94.5)pg/ml、(485.5±33.4)pg/ml、(335.9±27.3)pg/ml、(288.5±33.4)pg/ml,CTL組和CTL聯(lián)合PD-L1單抗組IL-10水平明顯降低,與生理鹽水組、PD-L1組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論: CTL聯(lián)合PD-L1單抗較CTL治療組能有效抑制荷瘤裸鼠異種移植瘤的生長,腫瘤細(xì)胞分泌IL-10可能抑制了CTL的殺傷作用,PD-L1單抗可逆轉(zhuǎn)此效應(yīng),促進(jìn)CTL的殺傷活性。
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【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 黃建安,朱一蓓,古濤,席泓,王天立,戴俊,張學(xué)光;肺癌患者外周血樹突狀細(xì)胞的生物學(xué)特性研究[J];中國腫瘤生物治療雜志;2003年03期

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本文編號：2307267