【摘要】： 目的 通過比較白念珠菌CHK突變株CHK26(CHK Ser/Thr MAPK和GAF結(jié)構(gòu)域缺陷株)、CHK21(CHK等位基因缺失株)和標準株CAF-2對小鼠的致病性,從而了解CHK及其結(jié)構(gòu)域在白念珠菌致病性中的作用。 方法 1.系統(tǒng)性白念珠菌感染小鼠模型的建立:清潔級健康昆明小鼠18只隨機分成A、B、C三組,每組6只分別通過小鼠尾靜脈注射白念珠菌CAF-2、CHK26和CHK21懸菌液0.5ml(1×10~6CFU)。取出小鼠腎臟做組織病理學(xué)檢查和腎組織真菌培養(yǎng)。 2.小鼠死亡率及生存保護時間實驗:同上方法構(gòu)建小鼠模型63只,每組21只,每天兩次觀察各組小鼠的發(fā)病和死亡情況。 3.腎組織病理和電鏡檢測:構(gòu)建小鼠模型12只,每組4只。第3天和第5天取小鼠模型的一個腎臟,組織病理切片、PAS染色,另一個腎臟制作電鏡標本,透射電鏡觀察。 4.脾腎組織菌落形成單位(cfu):建立小鼠模型45只,每組15只。第1天、第3天和第5天取出5只小鼠雙側(cè)腎臟和脾臟制成組織勻漿,培養(yǎng)后計數(shù)菌落數(shù)。比較各組小鼠脾腎組織菌落形成單位計數(shù)的差異。 5.白念珠菌標準株、CHK突變株CHK26和CHK21制備透射電鏡和掃描電鏡標本,電鏡下觀察超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果 1.成功建立系統(tǒng)性白念珠菌感染小鼠模型:三組小鼠腎臟組織病理切片PAS染色均可見明顯的菌絲及孢子,腎組織培養(yǎng)見酵母樣菌落生長。 2.死亡率及生存保護實驗結(jié)果:標準株、CHK26和CHK21感染小鼠觀察期間死亡率分別為100%、23.8%和0; CHK21、CHK26感染小鼠生存時間明顯比標準株小鼠長,有統(tǒng)計學(xué)意義。 3.腎臟組織病理學(xué)和電鏡檢測結(jié)果:腎組織病理學(xué)檢測:標準株、CHK26和CHK21感染小鼠的腎組織病理切片PAS染色均可見紫紅色菌絲及孢子。透射電鏡下觀察見:三株白念珠菌感染腎組織上皮細胞內(nèi)均可見白念珠菌孢子。標準株感染小鼠腎組織超微結(jié)構(gòu)明顯改變,可見小管上皮細胞表面微絨毛脫落,甚至出現(xiàn)灶狀壞死;上皮細胞線粒體腫脹;腎間質(zhì)中性粒細胞浸潤等超微結(jié)構(gòu)變化。而CHK26感染小鼠腎組織病變則較輕,個別腎小管上皮細胞水腫;溶酶體增多;腎間質(zhì)中性粒細胞浸潤。CHK21感染小鼠腎組織結(jié)構(gòu)大致正常;僅見個別上皮細胞腫脹;少量中性粒細胞浸潤。 4.脾腎組織菌落形成單位(cfu)結(jié)果:白念珠菌感染小鼠脾腎組織中菌落計數(shù)結(jié)果如表3所示:CHK21在脾腎組織中清除最慢,CAF-2清除最快,CHK26介于標準株和CHK21之間。 5.白念珠菌透射電鏡見CHK26細胞壁厚薄不一,電子致密外層和透明內(nèi)層明顯比CAF-2少,甚至部分細胞壁消失;細胞膜基本完整。CHK21細胞壁較完整,厚薄不一,厚度介于兩者之間。掃描電鏡見三株白念珠菌呈圓形或橢圓形,表面光滑;標準株和CHK26菌株在細胞長軸兩端可見出芽;而CHK21菌株細胞表面芽痕隨意分布。 結(jié)論 1. CHK在白念珠菌毒力中扮演重要角色, CHK21在小鼠動物模型中表現(xiàn)為無毒性,CHK26則表現(xiàn)為毒力減低。 2.白念珠菌感染小鼠模型腎組織的病變部位主要位于腎小管。小鼠感染白念珠菌后,腎組織主要以腎小管上皮細胞吞噬念珠菌、線粒體腫脹、腎間質(zhì)中性粒細胞浸潤等超微結(jié)構(gòu)改變?yōu)橹鳌?3. CHK影響白念珠菌細胞壁的構(gòu)建,可能也是毒力降低主要原因。 4. Ser/Thr MAPK及GAF結(jié)構(gòu)域在白念珠菌毒力和細胞壁構(gòu)建中起著重要作用。 5.細胞壁結(jié)構(gòu)的改變,可能影響到念珠菌的出芽方式。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R379

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本文編號：2302956