【摘要】：目的檢測(cè)新生大鼠大腦皮質(zhì)來源的星形膠質(zhì)細(xì)胞及小膠質(zhì)細(xì)胞的干細(xì)胞抗原表達(dá),為進(jìn)一步深入研究這兩種膠質(zhì)細(xì)胞的應(yīng)用意義提供生物學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法1.取新生大鼠大腦皮質(zhì)進(jìn)行原代混合膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng),根據(jù)各種膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)間差異及細(xì)胞的粘附特性不同,通過機(jī)械震蕩和差速貼壁方法分離純化O-2A祖細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞(microglia, MGs)和1型星形膠質(zhì)細(xì)胞(type 1 astrocytes, T1As),使用細(xì)胞特異性抗體進(jìn)行鑒定。 2.收集O-2A祖細(xì)胞接種于12孔培養(yǎng)板或/和包被PLL的蓋玻片上,培液為DMEM/F-12、2% B27、1% N2、10ng/ml PDGF,進(jìn)一步純化O-2A祖細(xì)胞。在含20%FCS的培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)O-2A祖細(xì)胞向2型星形膠質(zhì)細(xì)胞(type 2 astrocytes, T2As)分化,使用細(xì)胞特異性抗體進(jìn)行鑒定。 3.采用免疫熒光標(biāo)記染色方法,檢測(cè)干細(xì)胞的標(biāo)記分子巢蛋白(nestin)、階段特異性胚胎抗原-1(SSEA-1)及蛋白聚糖NG2在星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)情況。 結(jié)果1.通過機(jī)械震蕩和差速貼壁方法,有效分離了O-2A祖細(xì)胞及1型星形膠質(zhì)細(xì)胞,它們具有典型的形態(tài)特征,表達(dá)各自的細(xì)胞特異性分子,O-2A祖細(xì)胞表達(dá)A2B5,1型星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)GFAP。 2.通過機(jī)械震蕩和差速貼壁方法,有效分離了純化的小膠質(zhì)細(xì)胞,它們具有典型的形態(tài)特征,并表達(dá)其細(xì)胞特異性分子OX42。 3.分離的O-2A祖細(xì)胞經(jīng)PDGF作用,增殖而不出現(xiàn)分化,從而O-2A祖細(xì)胞得到純化。 4.O-2A祖細(xì)胞以無血清培養(yǎng)液培養(yǎng),迅速分化為成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞；在含高達(dá)15%-20%FCS的培液中生長(zhǎng),分化為2型星形膠質(zhì)細(xì)胞,特異性抗原表達(dá)為A2B5+/GFAP+。 5.免疫熒光標(biāo)記染色顯示：分化成熟的2型星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)nestin, SSEA-1及NG2,小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)nestin, SSEA-1及NG2,1型星形膠質(zhì)細(xì)胞不表達(dá)干細(xì)胞抗原標(biāo)志物。 結(jié)論神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)記分子nestin, SSEA-1及NG2在膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)存在差異。2型星形膠質(zhì)細(xì)胞及小膠質(zhì)細(xì)胞均表達(dá)nestin, SSEA-1及NG2,具有干細(xì)胞的某些抗原表達(dá)特征,結(jié)合我研究室已有研究表達(dá)提示,2型星形膠質(zhì)細(xì)胞及小膠質(zhì)細(xì)胞具有神經(jīng)干細(xì)胞樣的生物學(xué)特性,可作為細(xì)胞來源應(yīng)用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療研究。
[Abstract]:%E7%9B%AE%E7%9A%84%E6%A3%80%E6%B5%8B%E6%96%B0%E7%94%9F%E5%A4%A7%E9%BC%A0%E5%A4%A7%E8%84%91%E7%9A%AE%E8%B4%A8%E6%9D%A5%E6%BA%90%E7%9A%84%E6%98%9F%E5%BD%A2%E8%83%B6%E8%B4%A8%E7%BB%86%E8%83%9E%E5%8F%8A%E5%B0%8F%E8%83%B6%E8%B4%A8%E7%BB%86%E8%83%9E%E7%9A%84%E5%B9%B2%E7%BB%86%E8%83%9E%E6%8A%97%E5%8E%9F%E8%A1%A8%E8%BE%BE%2C%E4%B8%BA%E8%BF%9B%E4%B8%80%E6%AD%A5%E6%B7%B1%E5%85%A5%E7%A0%94%E7%A9%B6%E8%BF%99%E4%B8%A4%E7%A7%8D%E8%83%B6%E8%B4%A8%E7%BB%86%E8%83%9E%E7%9A%84%E5%BA%94%E7%94%A8%E6%84%8F%E4%B9%89%E6%8F%90%E4%BE%9B%E7%94%9F%E7%89%A9%E5%AD%A6%E5%AE%9E%E9%AA%8C%E4%BE%9D%E6%8D%AE.%0D%0A%0D%0A%09%E6%96%B9%E6%B3%951.%E5%8F%96%E6%96%B0%E7%94%9F%E5%A4%A7%E9%BC%A0%E5%A4%A7%E8%84%91%E7%9A%AE%E8%B4%A8%E8%BF%9B%E8%A1%8C%E5%8E%9F%E4%BB%A3%E6%B7%B7%E5%90%88%E8%83%B6%E8%B4%A8%E7%BB%86%E8%83%9E%E5%9F%B9%E5%85%BB%2C%E6%A0%B9%E6%8D%AE%E5%90%84%E7%A7%8D%E8%83%B6%E8%B4%A8%E7%BB%86%E8%83%9E%E7%94%9F%E9%95%BF%E6%97%B6%E9%97%B4%E5%B7%AE%E5%BC%82%E5%8F%8A%E7%BB%86%E8%83%9E%E7%9A%84%E7%B2%98%E9%99%84%E7%89%B9%E6%80%A7%E4%B8%8D%E5%90%8C%2C%E9%80%9A%E8%BF%87%E6%9C%BA%E6%A2%B0%E9%9C%87%E8%8D%A1%E5%92%8C%E5%B7%AE%E9%80%9F%E8%B4%B4%E5%A3%81%E6%96%B9%E6%B3%95%E5%88%86%E7%A6%BB%E7%BA%AF%E5%8C%96O-2A%E7%A5%96%E7%BB%86%E8%83%9E%2C%E5%B0%8F%E8%83%B6%E8%B4%A8%E7%BB%86%E8%83%9E%28microglia%2C%20MGs%29%E5%92%8C1%E5%9E%8B%E6%98%9F%E5%BD%A2%E8%83%B6%E8%B4%A8%E7%BB%86%E8%83%9E%28type%201%20astrocytes%2C%20T1As%29%2C%E4%BD%BF%E7%94%A8%E7%BB%86%E8%83%9E%E7%89%B9%E5%BC%82%E6%80%A7%E6%8A%97%E4%BD%93%E8%BF%9B%E8%A1%8C%E9%89%B4%E5%AE%9A.%0D%0A%0D%0A%092.%E6%94%B6%E9%9B%86O-2A%E7%A5%96%E7%BB%86%E8%83%9E%E6%8E%A5%E7%A7%8D%E4%BA%8E12%E5%AD%94%E5%9F%B9%E5%85%BB%E6%9D%BF%E6%88%96%2F%E5%92%8C%E5%8C%85%E8%A2%ABPLL%E7%9A%84%E7%9B%96%E7%8E%BB%E7%89%87%E4%B8%8A%2C%E5%9F%B9%E6%B6%B2%E4%B8%BADMEM%2FF-12%2C2%25%20B27%2C1%25%20N2%2C10ng%2Fml%20PDGF%2C%E8%BF%9B%E4%B8%80%E6%AD%A5%E7%BA%AF%E5%8C%96O-2A%E7%A5%96%E7%BB%86%E8%83%9E.%E5%9C%A8%E5%90%AB20%FCS%E7%9A%84%E5%9F%B9%E5%85%BB%E6%9D%A1%E4%BB%B6%E4%B8%8B%E8%AF%B1%E5%AF%BCO-2A%E7%A5%96%E7%BB%86%E8%83%9E%E5%90%912%E5%9E%8B%E6%98%9F%E5%BD%A2%E8%83%B6%E8%B4%A8%E7%BB%86%E8%83%9E%28type%202%20astrocytes%2C%20T2As%29%E5%88%86%E5%8C%96%2C%E4%BD%BF%E7%94%A8%E7%BB%86%E8%83%9E%E7%89%B9%E5%BC%82%E6%80%A7%E6%8A%97%E4%BD%93%E8%BF%9B%E8%A1%8C%E9%89%B4%E5%AE%9A.%0D%0A%0D%0A%093.%E9%87%87%E7%94%A8%E5%85%8D%E7%96%AB%E8%8D%A7%E5%85%89%E6%A0%87%E8%AE%B0%E6%9F%93%E8%89%B2%E6%96%B9%E6%B3%95%2C%E6%A3%80%E6%B5%8B%E5%B9%B2%E7%BB%86%E8%83%9E%E7%9A%84%E6%A0%87%E8%AE%B0%E5%88%86%E5%AD%90%E5%B7%A2%E8%9B%8B%E7%99%BD%28nestin%29%2C%E9%98%B6%E6%AE%B5%E7%89%B9%E5%BC%82%E6%80%A7%E8%83%9A%E8%83%8E%E6%8A%97%E5%8E%9F-1%28SSEA-1%29%E5%8F%8A%E8%9B%8B%E7%99%BD%E8%81%9A%E7%B3%96NG2%E5%9C%A8%E6%98%9F%E5%BD%A2%E8%83%B6%E8%B4%A8%E7%BB%86%E8%83%9E%E5%92%8C%E5%B0%8F%E8%83%B6%E8%B4%A8%E7%BB%86%E8%83%9E%E7%9A%84%E8%A1%A8%E8%BE%BE%E6%83%85%E5%86%B5.%0D%0A%0D%0A%09%E7%BB%93%E6%9E%9C1.%E9%80%9A%E8%BF%87%E6%9C%BA%E6%A2%B0%E9%9C%87%E8%8D%A1%E5%92%8C%E5%B7%AE%E9%80%9F%E8%B4%B4%E5%A3%81%E6%96%B9%E6%B3%95%2C%E6%9C%89%E6%95%88%E5%88%86%E7%A6%BB%E4%BA%86O-2A%E7%A5%96%E7%BB%86%E8%83%9E%E5%8F%8A1%E5%9E%8B%E6%98%9F%E5%BD%A2%E8%83%B6%E8%B4%A8%E7%BB%86%E8%83%9E%2C%E5%AE%83%E4%BB%AC%E5%85%B7%E6%9C%89%E5%85%B8%E5%9E%8B%E7%9A%84%E5%BD%A2%E6%80%81%E7%89%B9%E5%BE%81%2C%E8%A1%A8%E8%BE%BE%E5%90%84%E8%87%AA%E7%9A%84%E7%BB%86%E8%83%9E%E7%89%B9%E5%BC%82%E6%80%A7%E5%88%86%E5%AD%90%2CO-2A%E7%A5%96%E7%BB%86%E8%83%9E%E8%A1%A8%E8%BE%BEA2B5%2C1%E5%9E%8B%E6%98%9F%E5%BD%A2%E8%83%B6%E8%B4%A8%E7%BB%86%E8%83%9E%E8%A1%A8%E8%BE%BEGFAP.%0D%0A%0D%0A%092.%E9%80%9A%E8%BF%87%E6%9C%BA%E6%A2%B0%E9%9C%87%E8%8D%A1%E5%92%8C%E5%B7%AE%E9%80%9F%E8%B4%B4%E5%A3%81%E6%96%B9%E6%B3%95%2C%E6%9C%89%E6%95%88%E5%88%86%E7%A6%BB%E4%BA%86%E7%BA%AF%E5%8C%96%E7%9A%84%E5%B0%8F%E8%83%B6%E8%B4%A8%E7%BB%86%E8%83%9E%2C%E5%AE%83%E4%BB%AC%E5%85%B7%E6%9C%89%E5%85%B8%E5%9E%8B%E7%9A%84%E5%BD%A2%E6%80%81%E7%89%B9%E5%BE%81%2C%E5%B9%B6%E8%A1%A8%E8%BE%BE%E5%85%B6%E7%BB%86%E8%83%9E%E7%89%B9%E5%BC%82%E6%80%A7%E5%88%86%E5%AD%90OX42.%0D%0A%0D%0A%093.%E5%88%86%E7%A6%BB%E7%9A%84O-2A%E7%A5%96%E7%BB%86%E8%83%9E%E7%BB%8FPDGF%E4%BD%9C%E7%94%A8%2C%E5%A2%9E%E6%AE%96%E8%80%8C%E4%B8%8D%E5%87%BA%E7%8E%B0%E5%88%86%E5%8C%96%2C%E4%BB%8E%E8%80%8CO-2A%E7%A5%96%E7%BB%86%E8%83%9E%E5%BE%97%E5%88%B0%E7%BA%AF%E5%8C%96.%0D%0A%0D%0A%094.O-2A%E7%A5%96%E7%BB%86%E8%83%9E%E4%BB%A5%E6%97%A0%E8%A1%80%E6%B8%85%E5%9F%B9%E5%85%BB%E6%B6%B2%E5%9F%B9%E5%85%BB%2C%E8%BF%85%E9%80%9F%E5%88%86%E5%8C%96%E4%B8%BA%E6%88%90%E7%86%9F%E7%9A%84%E5%B0%91%E7%AA%81%E8%83%B6%E8%B4%A8%E7%BB%86%E8%83%9E%EF%BC%9B%E5%9C%A8%E5%90%AB%E9%AB%98%E8%BE%BE15%25-20%FCS%E7%9A%84%E5%9F%B9%E6%B6%B2%E4%B8%AD%E7%94%9F%E9%95%BF%2C%E5%88%86%E5%8C%96%E4%B8%BA2%E5%9E%8B%E6%98%9F%E5%BD%A2%E8%83%B6%E8%B4%A8%E7%BB%86%E8%83%9E%2C%E7%89%B9%E5%BC%82%E6%80%A7%E6%8A%97%E5%8E%9F%E8%A1%A8%E8%BE%BE%E4%B8%BAA2B5%20%2FGFAP%20.%0D%0A%0D%0A%095.%E5%85%8D%E7%96%AB%E8%8D%A7%E5%85%89%E6%A0%87%E8%AE%B0%E6%9F%93%E8%89%B2%E6%98%BE%E7%A4%BA%EF%BC%9A%E5%88%86%E5%8C%96%E6%88%90%E7%86%9F%E7%9A%842%E5%9E%8B%E6%98%9F%E5%BD%A2%E8%83%B6%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【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 張曄;李春鵬;夏春林;沈慧;孫文閣;;蛋白脂蛋白在兩型星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)[J];解剖學(xué)雜志;2006年05期

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本文編號(hào)：2292321