【摘要】：結(jié)核病(Tuberculosis, TB)是一種古老而漫長的感染性疾病,是長期危害人類健康的嚴(yán)重疾病之一。目前,全球大約有三分之一的人口感染了結(jié)核桿菌,每年約有300萬人死于結(jié)核病,平均每天死亡超過8000人。近年來,由于HIV和結(jié)核分枝桿菌雙重感染,以及耐藥結(jié)核分枝桿菌的流行,導(dǎo)致結(jié)核病的發(fā)病率和死亡率大幅度上升,形勢更加嚴(yán)峻。聯(lián)合國已將結(jié)核病列為21世紀(jì)重點(diǎn)控制的三大疾病之一�？ń槊�(BCG)作為唯一的能夠預(yù)防結(jié)核病的疫苗,雖然已在全球廣泛使用,但近期發(fā)現(xiàn)其保護(hù)效果不穩(wěn)定(0-80%),對(duì)成人幾乎無效,對(duì)已感染患者更是沒有治療作用,因此研制新型的抗結(jié)核疫苗刻不容緩。 預(yù)防性疫苗和治療性疫苗是新型抗結(jié)核疫苗的兩個(gè)主要發(fā)展策略,其中預(yù)防性疫苗研究得較多,包括DNA疫苗、蛋自疫苗、重組BCG疫苗、營養(yǎng)缺陷型疫苗、病毒載體疫苗等。本實(shí)驗(yàn)針對(duì)重組BCG進(jìn)行研究,通過將一些重要的結(jié)核桿菌抗原基因?qū)隑CG,讓BCG大量表達(dá)保護(hù)性抗原,以期誘導(dǎo)比BCG強(qiáng)大而又持久的免疫保護(hù)力。 Ag85B和ESAT-6作為重要的抗結(jié)核保護(hù)性抗原已得到各國科學(xué)家公認(rèn),研究表明重組入Ag85B-EAST6的BCG (rBCG::Ag85B-EAST6)提高了抗結(jié)核保護(hù)作用。此外,重組多價(jià)抗原疫苗往往能夠比單一抗原疫苗激發(fā)更強(qiáng)的免疫反應(yīng),因此本實(shí)驗(yàn)在選擇了保護(hù)性抗原Ag85B-EAST6融合抗原的基礎(chǔ)上又選擇了另外兩種保護(hù)性抗原,PPE蛋白R(shí)v2608(PPE42)和Esx家族成員Rv3620c (EsxW),分別與Ag85B-ESAT6融合抗原聯(lián)合,以大腸桿菌-結(jié)核分枝桿菌穿梭質(zhì)粒pMV261為載體,構(gòu)建了兩株重組BCG菌株rBCG::Ag85B-ESAT6-Rv2608與rBCG::Ag85B-ESAT6-Rv3620c,均為國內(nèi)外首次報(bào)道。將兩株重組BCG和傳統(tǒng)BCG疫苗分別免疫C57BL/6小鼠,通過ELISA檢測了抗體IgG水平IgG2b/IgG1水平和細(xì)胞因子(IFN-γ、 IL-2、IL-10等)分泌水平,用ELISPOT檢測了TNF-α陽性淋巴細(xì)胞水平,并用流式細(xì)胞儀檢測了CD4+T細(xì)胞亞群和CD8+T細(xì)胞亞群水平,分析比較各菌株的免疫原性。結(jié)果表明,與傳統(tǒng)BCG相比較,兩株重組BCG均可增強(qiáng)小鼠脾淋巴細(xì)胞在特異性抗原Ag85B和PPD刺激下細(xì)胞因子TNF-α和IL-2分泌水平,降低細(xì)胞因子IL-10分泌水平,顯示出更強(qiáng)的細(xì)胞免疫應(yīng)答。同時(shí),與傳統(tǒng)BCG相比較,rBCG::Ag85B-ESAT6-Rv3620c誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞產(chǎn)生更多的細(xì)胞因子IFN-γ,進(jìn)一步增強(qiáng)Thl型細(xì)胞免疫反應(yīng)。流式檢測結(jié)果表明,兩株重組BCG均可引起小鼠脾淋巴細(xì)胞特異性抗原Ag85B和PPD刺激下CD4+T細(xì)胞亞群和CD8+T細(xì)胞亞群分化水平提高,而CD4/CD8比值減小,顯示重組BCG能通過增強(qiáng)細(xì)胞毒作用提高機(jī)體的抗結(jié)核免疫保護(hù)作用。此外,兩株重組BCG均可引起抗原Ag85B特異性的體液免疫反應(yīng),與傳統(tǒng)BCG相比較,表現(xiàn)為Ag85B特異性IgG水平的升高,并測得IgG2b/IgG1水平也升高,顯示Thl型免疫應(yīng)答增強(qiáng),與細(xì)胞免疫反應(yīng)結(jié)果一致。 因此,初步研究表明這兩株重組BCG有望開發(fā)成為有效的新型抗結(jié)核疫苗用于結(jié)核病的預(yù)防,為進(jìn)一步的動(dòng)物保護(hù)實(shí)驗(yàn)等奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2292115