發(fā)布時(shí)間：2018-10-15 14:39

【摘要】：中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)是免疫特免區(qū),缺乏淋巴系統(tǒng),并有血腦屏障(BBB)的保護(hù)。小膠質(zhì)細(xì)胞是遷移、定居或起源于腦內(nèi)的駐留型巨噬細(xì)胞。許多生理或病理因素如血壓的突然變化、免疫刺激和外傷等均可導(dǎo)致BBB破壞、通透性升高,使血循環(huán)中的蛋白滲入CNS,滲入的IgG可以被小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬,但這些滲入的內(nèi)源性蛋白對(duì)CNS免疫會(huì)產(chǎn)生怎樣的影響并不清楚。模式識(shí)別受體(PRR)的深入研究極大地發(fā)展了固有免疫反應(yīng)機(jī)制的理論。TLR4是PRR的一個(gè)重要成員,在CNS主要表達(dá)在小膠質(zhì)細(xì)胞,且在CNS固有免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答的啟動(dòng)中扮演重要的角色。本研究采用幾種非感染性CNS損傷引起IgG滲入CNS的動(dòng)物模型,在體觀察了滲入的內(nèi)源性IgG與CNS小膠質(zhì)細(xì)胞TLR4表達(dá)的關(guān)系;同時(shí)測(cè)定了同種屬IgG對(duì)原代培養(yǎng)的新生大鼠膠質(zhì)細(xì)胞TLR4表達(dá)以及細(xì)胞因子分泌的作用。 1. BBB開放導(dǎo)致內(nèi)源性IgG滲入CNS實(shí)質(zhì)后小膠質(zhì)細(xì)胞TLR4的表達(dá):制做一過(guò)性高血壓模型、免疫刺激模型、缺血再灌模型和無(wú)菌脊髓擠壓傷模型,以外周LPS作為陽(yáng)性對(duì)照,應(yīng)用免疫熒光染色和RT-PCR,觀察比較TLR4在上述幾種模型CNS中的表達(dá)。結(jié)果顯示,與陰性對(duì)照組相比,所有模型動(dòng)物的TLR4主要表達(dá)在IgG滲出區(qū)內(nèi)。腎上腺素注射造成的一過(guò)性高血壓可以進(jìn)一步加重LPS的效應(yīng),且TLR4免疫反應(yīng)陽(yáng)性產(chǎn)物除了在血管內(nèi)皮細(xì)胞之外還出現(xiàn)在小膠質(zhì)細(xì)胞。這些結(jié)果提示,TLR4在小膠質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)與IgG滲入CNS密切相關(guān)。 2. IgG刺激誘發(fā)培養(yǎng)的小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)TLR4與分泌細(xì)胞因子:分離培養(yǎng)純化的新生大鼠的小膠質(zhì)細(xì)胞,用免疫熒光和ELISA方法檢測(cè)了同種屬(大鼠)IgG刺激后TLR4和CD64(IgG Fc段I型受體)的表達(dá)和炎性細(xì)胞因子分泌的變化。結(jié)果顯示,TLR4和CD64的表達(dá)在IgG刺激后都明顯上調(diào),且共存于小膠質(zhì)細(xì)胞。相對(duì)于LPS刺激和空白組,IgG刺激在上調(diào)TLR4的同時(shí),還導(dǎo)致小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)變大、伸出多個(gè)偽足,呈現(xiàn)為活化的吞噬狀態(tài)。與空白對(duì)照組相比,IgG刺激24 h后,細(xì)胞培養(yǎng)上清中的TNF-α水平顯著升高,但比LPS刺激組低。而IFN-γ在LPS和IgG組均低于空白組。這些結(jié)果表明IgG引起純化的小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)TLR4,并且增加了TNF-α的分泌。提示TLR4可被同種IgG激活,觸發(fā)髓樣分化蛋白88(Myeloid differentiation protein 88,MyD88)依賴的信號(hào)途徑。 3. IgG刺激誘發(fā)培養(yǎng)的混合膠質(zhì)細(xì)胞TLR4表達(dá)與分泌細(xì)胞因子:從新生大鼠分離培養(yǎng)原代混合膠質(zhì)細(xì)胞,加入IgG或LPS刺激24 h,用免疫熒光方法觀察CD64和TLR4的表達(dá);ELISA檢測(cè)培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子的分泌。結(jié)果顯示,與純化的小膠質(zhì)細(xì)胞相似,IgG刺激后培養(yǎng)的混合膠質(zhì)細(xì)胞(絕大多數(shù)為星型膠質(zhì)細(xì)胞)CD64和TLR4的表達(dá)上調(diào),且只表達(dá)于小膠質(zhì)細(xì)胞。LPS刺激后,培養(yǎng)上清液中TNF-α升高,IgG刺激后的混合培養(yǎng)上清液中檢測(cè)不到TNF-α和IFN-γ。IL-1β在較高濃度IgG和適中濃度LPS刺激后培養(yǎng)上清液中顯著升高;用免疫熒光法檢測(cè)顯示:IgG刺激后的星型膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞胞漿中IL-1β表達(dá)升高。這些結(jié)果顯示,在培養(yǎng)的混合膠質(zhì)細(xì)胞中(1)小膠質(zhì)細(xì)胞是CNS膠質(zhì)細(xì)胞中最重要的免疫反應(yīng)細(xì)胞,能夠?qū)gG刺激產(chǎn)生TLR4和CD64表達(dá)上調(diào)的反應(yīng);(2)不同類型膠質(zhì)細(xì)胞之間存在相互作用。 上述結(jié)果證明,內(nèi)源性的IgG可以引起CNS小膠質(zhì)細(xì)胞TLR4和CD64的表達(dá)上調(diào),并通過(guò)激活TLR4下游信號(hào)通路產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子。提示內(nèi)源性大分子蛋白在BBB開放條件下進(jìn)入CNS后,可刺激小膠質(zhì)細(xì)胞的TLR4和CD64表達(dá)上調(diào)而引發(fā)固有免疫反應(yīng),從而導(dǎo)致某些CNS自身免疫疾病的發(fā)生。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R392.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2272863