【摘要】： 目的 建立兩種大鼠脂肪肝動物模型:高脂飼料引起非酒精性脂肪肝模型及同時給予酒精和高脂飼料建立高脂/酒精混合性脂肪肝動物模型,并探討其機制。制造模型成功后再用肝細(xì)胞刺激因子(HSS)進(jìn)行治療,觀察其療效并探討其作用機理。 方法 1.大鼠脂肪肝動物模型的建立:一組大鼠單純飼以含20%玉米油的高脂飼料(高脂組),另一組在飼以20%玉米油的高脂飼料的同時進(jìn)行高度白酒灌胃(高脂+酒精組),以普通飼料飼養(yǎng)作為對照(對照組),6周后處死大鼠,觀察體重及肝指數(shù)的變化,測定血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平,檢測肝組織TG、丙二醛(MDA)、羥脯氨酸(Hyp)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性,肝臟標(biāo)本在透射電鏡、HE染色光鏡下觀察組織病理學(xué)改變,免疫組化檢測肝組織轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1)與血小板衍生生長因子(PDGF-B)的表達(dá)情況。 2.采用乳豬肝臟為材料,通過組織勻漿、超聲破碎、熱變性、酒精沉淀等步驟提取制備HSS。以肝源性細(xì)胞SMMC-7721為靶細(xì)胞,采用[3H]-胸腺嘧啶核苷([3H]-TdR)摻入法對HSS活性進(jìn)行鑒定。 3.應(yīng)用提取制備的HSS,采用高、低不同劑量對兩種大鼠脂肪肝動物模型進(jìn)行治療(HSS治療組),以無治療作對照(無治療對照組),以辛伐他汀治療作藥物對照(藥物對照組),2周后處死大鼠,觀察高、低劑量HSS對血清TG、TC、AST、ALT水平、肝組織TG、MDA、Hyp含量、SOD活性、TGFβ1、PDGF-B表達(dá)及肝組織病理學(xué)的影響。 結(jié)果 1.高脂組大鼠血清TG(1.07±0.20 vs 0.81±0.23)、AST(211.67±44.57 vs 147.44±31.76)、ALT (73.78±11.69 vs 53.67±15.40)水平、肝組織TG(5.81±2.53vs 1.65±0.58)、MDA(19.17±5.10 vs 14.88±2.43)含量、TGFβ1(63.64% vs 9.09%)、PDGF-B(36.36% vs 0%)表達(dá)率及脂肪肝發(fā)生率(100% vs 0%)分別顯著高于對照組(P均0.05)。高脂+酒精組大鼠血清TG(1.31±0.56 vs 0.81±0.23)、TC(1.60±0.18 vs 1.35±0.18)、AST(183.00±37.40 vs 147.44±31.76)、ALT(81.78±5.17 vs 53.67±15.40)水平、肝組織TG(3.73±2.36 vs 1.65±0.58)、MDA (21.76±7.80 vs 14.88±2.43)、Hyp(0.19±0.04 vs 0.14±0.04)含量、TGFβ1 (88.89% vs 9.09%)、PDGF-B(55.56% vs 0%)表達(dá)率及脂肪肝發(fā)生率(100% vs 0%)分別顯著高于對照組(P均0.05)。高脂+酒精組脂肪性肝炎發(fā)生率顯著高于高脂組(44.44% vs 18.18%,P0.05)。 2.乳豬HSS明顯促進(jìn)[3H]-TdR摻入肝源性細(xì)胞SMMC-7721內(nèi)。 3.辛伐他汀治療與無治療對照組比較可顯著降低高脂組和高脂+酒精組大鼠血清TG (0.66±0.14 vs 0.89±0.15 / 0.69±0.21 vs 1.19±0.32)水平、肝組織TG含量(2.39±0.90 vs 6.34±2.76 / 1.74±0.84 vs 4.95±3.20)及脂肪肝發(fā)生率(100% vs 50% / 100% vs 42%)(P均0.05)。 4.高劑量HSS治療與無治療對照組比較,可顯著降低高脂組大鼠血清AST (153.75±37.14 vs 212.63±38.03)、ALT(54.75±10.90 vs 82.75±33.47)水平、肝組織TG (3.60±2.10 vs 6.34±2.76)、MDA(14.72±2.51 vs 19.81±5.38)、Hyp(0.13±0.05 vs 0.19±0.05)含量和TGFβ1(25.0% vs 87.5%)表達(dá)率(P均0.05),可顯著升高高脂組大鼠肝組織SOD活性(56.42±3.10 vs 47.85±5.32,P0.01)。高劑量HSS治療與藥物對照組及低劑量HSS治療組比較,可顯著升高高脂組大鼠肝組織SOD活性(56.42±3.10 vs 48.38±3.21 / 56.42±3.10 vs 48.74±2.22,P0.01)。低劑量HSS治療組與無治療對照組比較可顯著降低高脂組大鼠肝組織TG含量(3.53±1.79 vs 6.34±2.76,P0.05)。將高、低劑量HSS治療兩組合并后再與無治療對照組比較,PDGF-B陽性率顯著降低(18.75% vs 62.5%,P=0.047)。 5.高劑量HSS治療與無治療對照組比較,可顯著降低高脂+酒精組大鼠血清TG(0.69±0.27 vs 1.19±0.32)、AST(167.38±48.60 vs 222.75±53.79)、ALT (59.38±17.64 vs 102.34±21.11)水平、肝組織MDA(17.15±3.52 vs 25.95±7.25)及Hyp(0.15±0.06 vs 0.22±0.03)含量(P均0.05),可顯著升高SOD活性(54.50±2.77 vs 45.96±4.12,P0.01)。高劑量HSS治療與藥物對照組及低劑量HSS治療組比較,可顯著升高高脂+酒精組大鼠肝組織SOD活性(54.50±2.77 vs 50.08±4.00 / 54.50±2.77 vs 51.56±2.34,P0.05)。低劑量HSS治療與對照組比較可顯著降低高脂+酒精組大鼠血清TG(0.71±0.25 vs 1.19±0.32)、ALT(75.38±20.19 vs 102.34±21.11)水平、肝組織MDA(17.17±3.95 vs 25.95±7.25)及Hyp(0.16±0.42 vs 0.22±0.03)含量(P均0.05),可顯著升高高脂+酒精組大鼠肝組織SOD活性(51.56±2.34 vs 45.96±4.12,P0.05)。將高、低劑量HSS治療兩組合并后再與無治療對照組比較,HSS治療可顯著降低高脂+酒精組脂肪性肝炎的發(fā)生率(25% vs 75%,P=0.028)。 結(jié)論 1.含20%玉米油的高脂飼料能增加血清TG、AST及ALT水平,肝組織TG及MDA含量,TGFβ1及PDGF-B表達(dá),成功建立大鼠非酒精性脂肪肝動物模型。高脂+酒精復(fù)合因素還能增加血清TC和肝組織Hyp含量,也成功建立高脂/酒精混合性脂肪肝動物模型,且病變更為嚴(yán)重。高脂與酒精兩種因素疊加可能加重肝損害。 2.采用本研究方法提取制備的乳豬HSS能有效地促進(jìn)肝源性細(xì)胞增殖。 3.HSS能明顯降低兩種脂肪肝模型大鼠血清AST、ALT水平及肝組織MDA、Hyp含量,提高SOD活性,減少肝組織TGFβ1與PDGF-B表達(dá),減輕肝細(xì)胞脂肪變性及炎癥壞死,因此其作用機制可能與HSS促進(jìn)肝細(xì)胞增殖、增強肝細(xì)胞抗氧化能力、抑制膠原合成等功能有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R-332;R575.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2262126