【摘要】： 論文Ⅰ脂聯(lián)素受體在血管外膜及血管外膜成纖維細胞中表達的研究 近年來的研究表明脂肪組織是高度活躍的內(nèi)分泌器官,脂肪細胞分泌的產(chǎn)物稱之為“脂肪因子”,主要包括:脂聯(lián)素(adiponectin,APN),瘦素(leptin),抗素(resistin),腫瘤壞死因子(TNFα)等。目前,在脂肪細胞因子的研究中,發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素是體內(nèi)最重要的保護性的脂肪因子,脂聯(lián)素降低與糖尿病、代謝綜合征和動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。深入探討脂聯(lián)素的作用及機制,為防治代謝疾病及動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展具有重要的理論和臨床意義。 既往認為,血管外膜的功能是對血管起保護、支撐和營養(yǎng)作用。近年的研究發(fā)現(xiàn),外膜還可以分泌多種血管活性物質(zhì),以旁分泌的方式調(diào)節(jié)血管的舒縮功能及結(jié)構(gòu)變化。外膜中的主要細胞成分是成纖維細胞。外膜成纖維細胞具有旁分泌/自分泌功能,可分泌多種生物活性因子如生長因子(TGF-β1)、成纖維細胞生長因子(AB)、單核細胞趨化蛋白(MCP-1)、白介素-1、白介素-6、腫瘤壞死因子-α、MMP等,對動脈的結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生重要的調(diào)節(jié)作用。當發(fā)生來自血管內(nèi)的損傷病變?nèi)缪軘U張、內(nèi)皮剝脫、高脂血癥或來自血管外的損傷如外膜剝離、滋養(yǎng)血供受阻時,外膜中成纖維細胞增殖,細胞外基質(zhì)產(chǎn)生增多,成纖維細胞向肌成纖維細胞轉(zhuǎn)化,進而引起組織修復和血管重塑。在損傷全過程中,外膜細胞增殖活性大于中層細胞,外膜成纖維細胞出現(xiàn)α-平滑肌肌動蛋白(α-SM-actin)表達,提示表型轉(zhuǎn)化為肌成纖維細胞。 雖然近年來國內(nèi)外對脂聯(lián)素的研究甚多,但是脂聯(lián)素與血管外膜的關(guān)系尚未完全明了。脂聯(lián)素的作用是通過脂聯(lián)素受體Adipo R1和Adipo R2介導的。血管外膜及血管外膜成纖維細胞上是否存在脂聯(lián)素受體,目前尚無相關(guān)報道。基于以上問題,構(gòu)成了本研究的思路。本研究的目的:1探討脂聯(lián)素受體在血管外膜及血管外膜成纖維細胞上的表達情況;2在炎癥狀態(tài)下,血管外膜成纖維細胞表達脂聯(lián)素受體的變化。通過這一研究,為進一步研究脂聯(lián)素通過血管外膜發(fā)揮抗炎和抗動脈粥樣硬化作用奠定基礎。 方法 1細胞培養(yǎng):剝脫小鼠胸主動脈的外膜,用組織貼塊法進行原代細胞培養(yǎng),當達到80-90融合時傳代,實驗采用第4-8代細胞。分別用α-SM-actin單抗(1:200)和波形蛋白(Vimentin)單抗(1:300)和二抗TRITC(1:100)進行免疫細胞熒光染色,鑒定所培養(yǎng)的細胞是否是所需要的AF及其純度。 2實驗分組: (1)根據(jù)LPS的刺激濃度分組 為了觀察不同濃度梯度LPS刺激情況下血管外膜成纖維細胞脂聯(lián)素受體的表達的變化,按照LPS的濃度分為5個組:1μg/ml,5μg/ml,10μg/ml,50μg/ml和PBS對照組。 (2)根據(jù)LPS的不同刺激時間分組 為了觀察不同作用時間LPS刺激情況下血管外膜成纖維細胞脂聯(lián)素受體的表達的變化,按照LPS 10μg/ml的不同刺激時間分為6個組:0hr,1hr,6hr,12hr,24hr,48hr。 3 RT-PCR:觀察正常血管外膜組織、骨骼肌組織及肝組織脂聯(lián)素受體的表達及正常及LPS刺激后,血管外膜成纖維細胞(AFs)上AdipoR1及AdipoR2的表達,采用“2~(-ΔΔCT)方法”分析基因的表達量。 4蛋白印跡分析:觀察正常血管外膜組織、骨骼肌組織及肝組織脂聯(lián)素受體的表達及正常及LPS刺激后,AFs上AdipoR1及AdipoR2的表達。強弱用表達的蛋白和β-actin條帶積分光密度的比值表示。 5免疫細胞熒光染色:觀察正常及LPS刺激后,FITC和TRITC二抗標記的α-SM-actin、vimentin、AdipoR1及AdipoR2在AF中的表達,用IOD比較它們在不同分組間表達的強弱。 結(jié)果 1 AF的孵育和鑒定: 組織貼塊法培養(yǎng)血管外膜細胞,4-7d后有細胞從組織塊邊緣游出、貼壁生長。10%FBS的DMEM中培養(yǎng)7-10d后出現(xiàn)第一次細胞融合。當細胞出現(xiàn)80%-90%融合時,進行傳代,第4-8代用于不同的試驗.經(jīng)免疫細胞熒光化學法顯示所有培養(yǎng)細胞的。α-SM-actin單抗染色陰性,所有培養(yǎng)細胞的波形蛋白(Vimentin)單抗染色陽性,說明培養(yǎng)的AF純度達到100%。 2脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體的表達: AdipoR1在血管外膜組織及血管外膜成纖維細胞上mRNA和蛋白水平均高表達。與骨骼肌組織相比,脂聯(lián)素受體1 mRNA在大鼠血管外膜組織中的表達約占85%(mRNA:血管外膜:10.79±8.84 vs骨骼肌:14.65±13.54;蛋白質(zhì):血管外膜:1.96±1.12 vs骨骼肌:1.69±0.82,P＞0.05)。AdipoR2在血管外膜組織及血管外膜成纖維細胞上mRNA和蛋白水平上均低表達。與肝組織相比約占5%(mRNA:血管外膜:5.72±3.90 vs肝臟:36.67±15.28;蛋白質(zhì):血管外膜:0.0059±0.0002 vs肝臟:0.6653±0.0270,P＜0.01)。沒有檢測到脂聯(lián)素mRNA在血管外膜成纖維細胞上的表達。 3 LPS刺激下脂聯(lián)素受體1的表達: 不同LPS濃度刺激下,AdipoR1的mRNA及蛋白質(zhì)的表達在1μg/ml時略有升高(mRNA:1μg/ml:18.433±5.982 vs對照:20.030±3.313;蛋白質(zhì):1μg/ml:2.686±0.141 vs對照:2.637±0.256,P＞0.05);5,10,50μg/mlLPS刺激時,AdipoR1的mRNA及蛋白質(zhì)的表達逐漸降低,在50μg/ml濃度點時達最低谷(mRNA:50μg/ml:18.433±5.982 vs 0.013±0.001;蛋白質(zhì):50μg/ml:0.001±0.001 vs 2.637±0.256,P＜0.01)。 在10μg/mlLPS刺激下,AdipoR1的mRNA在刺激1小時時表達略有升高(mRNA:1h:13.736±4.676 vs對照:10.793±5.102;P＞0.05);6,12,24,48小時時,AdipoR1 mRNA的表達逐漸降低,在48小時時達最低值(mRNA:48h:0.063±0.044 vs對照:10.793±5.102,P＜0.01)。在1,6,12,24,48小時時,AdipoR1蛋白質(zhì)表達逐漸降低,在48小時時達最低值(蛋白質(zhì):48h:6.990±0.150 vs對照:0.001±0.001,P＜0.01)。 創(chuàng)新性及局限性 1.創(chuàng)新點 (1)應用RT-PCR、western blot及免疫細胞熒光等多種方法證實了血管外膜成纖維細胞上存在著脂聯(lián)素受體,尤其是脂聯(lián)素受體1,在國內(nèi)外未見報道。 (2)在LPS刺激下,血管外膜成纖維細胞脂聯(lián)素受體1表達降低,呈時間和劑量依賴性。 2.局限性 (1)因技術(shù)所限,未能對脂聯(lián)素受體進行進一步的功能研究。 (2)未對脂聯(lián)素受體在炎癥刺激下表達降低的機制進行進一步的探討。 結(jié)論 (1)正常血管外膜及血管外膜成纖維細胞可以表達脂聯(lián)素受體,其中脂聯(lián)素受體1高表達,脂聯(lián)素受體2低表達,而血管外膜成纖維細胞幾乎不表達脂聯(lián)素。提示脂聯(lián)素可能通過旁分泌途徑作用于血管外膜成纖維細胞。 (2)血管外膜成纖維細胞脂聯(lián)素受體1的表達量與LPS刺激濃度和時間呈負相關(guān)。 論文Ⅱ脂聯(lián)素抑制脂多糖介導的血管外膜成纖維細胞增殖、遷移和肌化的研究 背景 越來越多的研究表明,脂聯(lián)素能夠減少脂質(zhì)斑塊的面積,抑制新生內(nèi)膜的增厚及平滑肌細胞的增殖與遷移,抑制血管粘附分子的表達。通過這些作用,發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的效應。 血管內(nèi)皮損傷是動脈粥樣硬化(atherosderosis,As)發(fā)病的始動因素,外膜一直被認為在AS的發(fā)生中只是一個旁觀者。近期的研究得出了不同結(jié)論,發(fā)現(xiàn)動脈外膜炎癥與AS的發(fā)生相關(guān),在AS發(fā)生的早期外膜炎癥即被激活,且炎癥程度與血管病變的嚴重程度之間呈正相關(guān),外膜套管、埋置內(nèi)毒素浸泡的絲線等可誘導內(nèi)膜增生性病變形成。這些研究結(jié)果提示血管外膜參與了內(nèi)膜病變的形成,但機制尚不清楚。 已知氧化應激是AS發(fā)生的主要機制之一,可由氧化酶活性升高和(或)抗氧化酶活性降低導致。氧化應激產(chǎn)物活性氧(reactive oxygen species,ROS)可通過兩條途徑參與As的發(fā)生發(fā)展:一是對血管細胞的直接損傷:另外可作為細胞內(nèi)第二信使,誘導與AS發(fā)生相關(guān)的炎性細胞因子和粘附分子的表達,參與血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖、遷移的調(diào)節(jié)。大量的一氧化氮與生物體內(nèi)的氧氣或超氧陰離子可迅速合成過氧亞硝基陰離子(ONOO~-),從而使NO形成強細胞毒性物質(zhì),啟動氮氧化應激,造成細胞凋亡和組織損傷。定位于第17對常染色體上的Ⅱ型NOS稱為誘導型(iNOS),只在細胞受到炎性因子等刺激被激活后才明顯表達。iNOS產(chǎn)生的大量的一氧化氮與生物體內(nèi)的氧氣或超氧陰離子可迅速合成過氧亞硝基陰離子(ONOO~-),從而使NO形成強細胞毒性物質(zhì),造成細胞凋亡和組織損傷。大量的研究已經(jīng)表明脂蛋白過氧化和心血管內(nèi)皮細胞膜受損是導致動脈粥樣硬化的主要原因,而內(nèi)皮細胞產(chǎn)生的ONOO-正是使脂蛋白過氧化和內(nèi)皮細胞膜受損的主要物質(zhì)。外膜成纖維細胞具有獨立的NOS/NO系統(tǒng),可生成NO。在正常情況下成纖維細胞iNOS低表達,生成少量的NO,但在受到細菌脂多糖(LPS)和細胞因子如TNF-α、IL-1β等刺激時,體外培養(yǎng)的血管成纖維細胞可強烈表達iNOs mRNA,iNOs蛋白合成及NO生成顯著增加,表明血管外膜是血管壁NO的重要來源之一。 雖然近年來國內(nèi)外對脂聯(lián)素的研究甚多,但是脂聯(lián)素與血管外膜的關(guān)系尚未完全明了。血管外膜周圍具有豐富的脂肪組織,這些組織可能分泌脂聯(lián)素直接作用于鄰近的血管外膜,局部分泌脂聯(lián)素能否作用于血管外膜發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用、如何通過血管外膜對抗動脈粥樣硬化的發(fā)生及發(fā)展,這些問題目前尚未完全明了。我們的前期研究表明,動脈粥樣硬化病變血管內(nèi)膜或外膜局部轉(zhuǎn)染Ad-APN后,斑塊的面積縮小,同時,血清脂聯(lián)素濃度明顯升高。脂聯(lián)素可通過抑制血管壁黏附分子VCAM-1和ICAM-1的表達發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用。但脂聯(lián)素能否通過影響iNOS發(fā)揮作用及其機制尚不明了。 基于以上問題,構(gòu)成了本研究的思路。本研究目的:1探討脂聯(lián)素對LPS誘導的血管外膜成纖維細胞遷移、增殖及肌化的影響;2探討脂聯(lián)素對LPS誘導的血管外膜成纖維細胞iNOS、ONOO~-及NO的影響;3探討脂聯(lián)素發(fā)揮上述作用的可能信號轉(zhuǎn)導通路。研究結(jié)果將為更深入地研究脂聯(lián)素對血管的作用途徑和作用機制奠定理論基礎。 方法 1體內(nèi)實驗: 1.1動物實驗: 90只10-12周齡的雄性apoE~(-/-)小鼠實驗全程高脂飲食(含0.25%膽固醇和15%脂肪)喂養(yǎng)。實驗動物隨機分為3組:外膜局部轉(zhuǎn)染脂聯(lián)素腺病毒載體(Ad-APN)組,外膜局部轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白腺病毒載體(Ad-GFP)組和生理鹽水對照組,每組30只。全部實驗鼠均于實驗初行左頸總動脈套管(縮窄性硅膠管)術(shù)以誘發(fā)AS病變。外膜局部轉(zhuǎn)染Ad-APN組于頸動脈套管手術(shù)4周后取出套管并外膜局部轉(zhuǎn)染Ad-APN。外膜局部轉(zhuǎn)染Ad-GFP組于頸動脈套管手術(shù)4周后取出套管并外膜局部轉(zhuǎn)染Ad-GFP。對照組于頸動脈套管手術(shù)4周后取出套管并外膜局部轉(zhuǎn)染生理鹽水。 1.2血清脂聯(lián)素濃度分析:利用大鼠抗人脂聯(lián)素ELISA試劑盒分析高脂飼料apoE~(-/-)小鼠轉(zhuǎn)染腺病毒前后血清脂聯(lián)素濃度。 1.3 AS斑塊的超聲影像學形態(tài)特征:應用顯微超聲技術(shù)測量斑塊面積。 1.4生化指標檢測:取實驗前后全部動物眼球后采血,測定血脂濃度。 1.5一氧化氮生成檢測:取實驗前后全部動物眼球后采血,測定血清中一氧化氮濃度。 1.6病理學檢測:頸動脈斑塊組織學切片分別行蘇木素一伊紅染色,免疫組織化學染色觀察iNOS和ONOO-的局部表達。 2體外實驗: 2.1細胞培養(yǎng):同論文Ⅰ。 2.2實驗分組 2.2.1根據(jù)APN的刺激濃度分組 為了觀察不同作用時間及不同濃度梯度APN刺激情況下,血管外膜成纖維細胞功能的變化,按照APN的作用濃度分為4個組:3μg/ml APN+LPS 10μg/ml刺激組,10μg/ml APN+LPS 10μg/ml刺激組,30μg/ml APN+LPS 10μg/ml刺激組,無APN+LPS 10μg/ml對照組。根據(jù)APN不同作用時間分為6個組:LPS 10μg/ml對照組,APN刺激1/2小時組,APN刺激2小時組,APN刺激6小時組,APN刺激12小時組,APN刺激24小時組。 2.2.2根據(jù)有無siRNA-AdipoR1轉(zhuǎn)染及AMPK抑制劑分組 為了觀察APN和LPS對AF功能和相應信號轉(zhuǎn)導通路上相關(guān)細胞因子表達的影響,按照有無siRNA-AdipoR1轉(zhuǎn)染及AMPK抑制劑刺激將AF分為6個組:10μg/mlAPN+LPS 10μg/ml組,siRNA-AdipoR1+10μg/mlAPN+LPS 10μg/ml組,non-sensesiRNA+10μg/ml APN+LPS 10μg/ml對照組,Compound C+10μg/mlAPN+LPS 10μg/ml組,10μg/ml APN組和LPS 10μg/ml對照組。 2.3 siRNA干擾AF AdipoR1蛋白表達的檢測:western blot檢測轉(zhuǎn)染細胞β-actin,AdipoR1的蛋白質(zhì)表達水平。 2.4 MTT試驗:觀察APN和LPS刺激后,AF在不同時間點的增殖能力。 2.5劃痕法和transwell法:觀察APN和LPS刺激后,AF在不同時間點的遷移能力。 2.6一氧化氮生成檢測:觀察APN和LPS刺激后,AF生成一氧化氮的變化。 2.7 RT-PCR:觀察APN和LPS刺激后,iNOS和β-actin的表達,采用“2~(-ΔΔCT)方法”分析基因的表達量。 2.8蛋白印跡分析:觀察APN和LPS刺激后,iNOS、nitrotyrosine、p-AMPK、p-ACC和β-actin的表達。強弱用表達的蛋白和β-actin條帶積分光密度的比值表示。 2.9免疫細胞熒光染色:觀察APN和LPS刺激后,FITC和TRITC二抗標記的α-SM-actin在AF中的表達,用IOD比較它們在不同分組間表達的強弱。 結(jié)果 1體內(nèi)試驗 1.1動物的基本特征 外膜局部轉(zhuǎn)染Ad-APN組,外膜局部轉(zhuǎn)染Ad-βgal組各有1只動物于首次左頸總動脈套管后死亡,其余動物全部完成實驗。實驗初動物各組間體重無明顯差異。8周時,Ad-APN組小鼠體重較對照組及Ad-βgal組明顯下降(27.35±1.26vs 31.44±1.24g;27.35±1.26 vs 30.75±1.21g,P均＜0.01)。 1.2血清脂聯(lián)素濃度 ApoE敲基因小鼠高脂喂養(yǎng)8周后,血清脂聯(lián)素明顯降低(P＜0.01)。與轉(zhuǎn)染前比較,外膜局部轉(zhuǎn)染Ad-APN后,血清脂聯(lián)素濃度增加約8倍(P＜0.01)。與外膜局部轉(zhuǎn)染Ad-GFP比較,血管局部轉(zhuǎn)染Ad-APN后,血清脂聯(lián)素濃度增加約9倍(P＜0.01)。 1.3 AS斑塊影像學特征 血管外膜轉(zhuǎn)染Ad-APN與轉(zhuǎn)染前相比,斑塊面積明顯縮小達26.72%(P＜0.01),與外膜轉(zhuǎn)染Ad-GFP相比斑塊面積縮小24.53%(P＜0.01)。 1.4脂聯(lián)素對血脂的影響 各組間套管前血清總膽固醇、甘油三酯、高密度膽固醇和低密度膽固醇濃度均沒有統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。與轉(zhuǎn)染前比較,外膜局部轉(zhuǎn)染Ad-APN后,血清總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白濃度明顯降低(P均＜0.01),高密度脂蛋白濃度明顯升高(P＜0.01)。與外膜局部轉(zhuǎn)染Ad-GFP比較,外膜局部轉(zhuǎn)染Ad-APN后,血清總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白濃度明顯降低(P均＜0.01),高密度脂蛋白濃度明顯升高(P＜0.01)。 1.5脂聯(lián)素對血清NO的影響 與轉(zhuǎn)染前和外膜局部轉(zhuǎn)染Ad-GFP比較,NO濃度明顯降低(P均＜0.01)。 1.6脂聯(lián)素對血管壁iNOS和ONOO-的影響 與轉(zhuǎn)染前和外膜局部轉(zhuǎn)染Ad-GFP比較,iNOS和ONOO-的表達明顯降低(P均＜0.01)。 2體外實驗 2.1 AF的孵育和鑒定:同論文Ⅰ。 2.2 siRNA干擾AF AdipoR1蛋白表達的效果 應用不同濃度siRNA-AdipoR1轉(zhuǎn)染AF進行RNAi,western blot檢測AdipoR1的表達隨轉(zhuǎn)染濃度(50,100,200,250pmol/L)的增加逐漸減低(P均＜0.01),而β-actin的表達不受影響。 2.3 APN和LPS對AF增殖的影響 (1)LPS對AF增殖的影響:通過MTT試驗證實,與正常細胞對照組相比,LPS促進AF的增殖(P＜0.01)。 (2)APN對AF增殖的影響:通過MIT試驗進行OD值的比較,APN不影響正常AF細胞的增殖能力(P＞0.05)。與LPS組相比,APN+LPS組OD值下降(P＜0.01)。與APN+LPS組相比,siRNA-adipoR1+APN+LPS組和Compound C+APN+LPS組OD值升高(P均＜0.01)。 2.4 APN和LPS對AF遷移的影響 (1)LPS對AF遷移的影響:劃痕實驗顯示隨著LPS刺激時間的延長,LPS導致的AF的遷移能力逐漸增加。Transwell實驗結(jié)果與劃痕實驗類似,隨著LPS刺激時間的延長,穿過transwell膜的細胞數(shù)目逐漸增多。 (2)APN對AF遷移的影響:與LPS組相比,APN+LPS組AF遷移距離和遷移細胞數(shù)減少(P＜0.01)。與APN+LPS組相比,siRNA-adipoR1+APN+LPS組和CompoundC+APN+LPS組AF遷移距離和遷移細胞數(shù)增加(P均＜0.01)。 2.5 APN和LPS對AF向MF轉(zhuǎn)化的影響 (1)LPS對AF向MF轉(zhuǎn)化的影響:與正常細胞相比,LPS導致AFα-SM-actin單抗染色陽性的細胞數(shù)逐步增加(P＜0.01)。 (2)APN對AF向MF轉(zhuǎn)化的影響:與LPS組相比,APN+LPS組AFα-SM-actin單抗染色陽性的細胞數(shù)減少(P＜0.01)。與APN+LPS組相比,siRNA-adipoR1+APN+LPS組和Compound C+APN+LPS組AFα-SM-actin單抗染色陽性的細胞數(shù)增加(P均＜0.01)。 2.6 APN和LPS對AF一氧化氮生成的影響 (1)LPS對AF一氧化氮的影響:正常情況下,AF產(chǎn)生少量的一氧化氮;加入LPS刺激后,AF一氧化氮的產(chǎn)生增加(P＜0.01)。 (2)APN對AF一氧化氮的影響:與LPS組相比,APN+LPS組AF產(chǎn)生的NO減少(P＜0.01)。在脂聯(lián)素刺激濃度分別在3,10,30μg/ml時,一氧化氮的生成量以10μg/ml時降至最低;脂聯(lián)素10μg/ml分別刺激1/2,1,2,6,12,24,48小時時,一氧化氮的生成量在2小時時達最低,而后隨著APN作用時間的延長緩慢升高。與APN+LPS組相比,siRNA-adipoR1+APN+LPS組和Compound C+APN+LPS組AF產(chǎn)生的一氧化氮增加(P均＜0.01)。 2.7 APN和LPS對AF iNOS和ONOO-表達的影響: 與LPS組相比,APN+LPS組AFiNOS和ONOO-的表達降低(P均＜0.01)。與APN+LPS組相比,siRNA-adipoR1+APN+LPS組.和Compound C+APN+LPS組AFiNOS和ONOO-的表達升高(P均＜0.01)。 2.8 AF一氧化氮產(chǎn)生的信號轉(zhuǎn)導通路通路的影響: 與LPS組相比,APN+LPS組和APN組AF的p-AMPK和p-ACC的表達增加(P均＜0.01)。與APN+LPS組相比,siRNA-adipoR1+APN+LPS組和Compound C+APN+LPS組AF的p-AMPK和p-ACC的表達降低(P均＜0.01)。 結(jié)論 1血管外膜局部轉(zhuǎn)染Ad-APN后血清血脂水平下降,體重減輕,說明脂聯(lián)素可通過外膜局部干預發(fā)揮改善代謝的作用。 2血管外膜局部轉(zhuǎn)染Ad-APN后,血清過度增高的NO濃度明顯下降,血管壁iNOS和ONOO-表達降低。提示脂聯(lián)素可能通過抑制iNOS和ONOO-的表達來發(fā)揮外膜抗動脈粥樣硬化作用。 3體外實驗證實,LPS對AF的遷移、增殖和肌化均有促進作用,而APN能夠有效地抑制LPS對AF的遷移、增殖和肌化的促進作用。 4體外實驗證實LPS能夠激活AF的iNOS,使NO和ONOO-產(chǎn)生增加,而APN能夠抑制LPS對iNOS的影響。 5體外實驗證實,APN通過AdipoR1,激活AMPK通路,抑制iNOS的激活及NO和ONOO-的產(chǎn)生,抑制LPS造成的AF功能變化。
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【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R363

【引證文獻】

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1 阮從瀟;李玉潔;楊慶;陳穎;翁小剛;王嵐;周淑媛;朱曉新;;血管外膜細胞成分影響動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展研究概述[J];中國中藥雜志;2013年06期

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本文編號：2228545