【摘要】：目的:兔是再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用最為廣泛的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之一,但目前大規(guī)模培養(yǎng)兔間充質(zhì)干細(xì)胞卻面臨著收獲細(xì)胞數(shù)量少和純凈度低等難題。本研究旨在建立一種培養(yǎng)骨髓栓而獲得大量的具有更高增殖活性和自我更新能力的間充質(zhì)干細(xì)胞的方法。方法:骨髓栓法采用被膠原酶消化過的骨髓栓進(jìn)行培養(yǎng),骨髓細(xì)胞法用骨髓細(xì)胞直接貼壁培養(yǎng)以獲得間充質(zhì)干細(xì)胞;在光學(xué)顯微鏡下觀察兩種細(xì)胞的形態(tài);以流式細(xì)胞術(shù)檢測兩種間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫表型;對獲得的兩種間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行成骨和成脂肪誘導(dǎo)分化,并觀察其分化能力;采用CCK-8法檢測兩種細(xì)胞的增殖能力;以成纖維細(xì)胞集落單位形成實(shí)驗(yàn)檢測其自我更新能力;分別對第1,2,3,4代收獲的間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),比較兩種方法收獲的細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果:兩種間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)均為成纖維細(xì)胞樣;流式細(xì)胞術(shù)表型分析發(fā)現(xiàn),骨髓栓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞中CD45陽性造血細(xì)胞比例顯著降低(P0.05);多向誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,骨髓栓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞具有良好的成骨和成脂肪分化能力;CCK-8實(shí)驗(yàn)和成纖維細(xì)胞集落單位形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,骨髓栓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞具有更強(qiáng)的增殖活性和集落形成能力(P0.05);細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示,骨髓栓法獲得的間充質(zhì)干細(xì)胞數(shù)量顯著多于骨髓細(xì)胞法(P0.05)。結(jié)論:骨髓栓培養(yǎng)法獲得的間充質(zhì)干細(xì)胞純凈度和數(shù)量均優(yōu)于以往的方法,相關(guān)發(fā)現(xiàn)將為開展再生醫(yī)學(xué)研究提供幫助。
[Abstract]:Objective: rabbit is one of the most widely used experimental animals in the field of regenerative medicine. The aim of this study was to establish a method for obtaining large numbers of mesenchymal stem cells (MSCs) with higher proliferative activity and self-renewal. Methods: bone marrow embolus was cultured with collagenase digested bone marrow suppository, bone marrow cells were directly adhered to bone marrow cells to obtain mesenchymal stem cells, the morphology of two kinds of cells were observed under optical microscope. The immunophenotypes of the two mesenchymal stem cells were detected by flow cytometry, the osteogenesis and adipogenic differentiation of the two mesenchymal stem cells were observed, and the proliferative ability of the two kinds of mesenchymal stem cells was detected by CCK-8 method. The self-renewal ability of fibroblast colony forming unit was tested, and the number of mesenchymal stem cells harvested in the 1st 2nd and 3rd generation were counted, and the number of the cells harvested by the two methods was compared. Results: the morphology of the two kinds of mesenchymal stem cells was fibroblast-like, and the percentage of CD45 positive hematopoietic cells in mesenchymal stem cells derived from bone marrow embolus was significantly decreased (P0.05). Mesenchymal stem cells derived from bone marrow suppositories have good osteogenic and adipogenic ability. The results of CCK-8 test and fibroblast colony formation assay showed that mesenchymal stem cells (MSCs) had good osteogenic and adipogenic ability. Mesenchymal stem cells derived from bone marrow embolism had stronger proliferative activity and colony forming ability (P0.05); the number of mesenchymal stem cells obtained by bone marrow embolus method was significantly higher than that by bone marrow cell method (P0.05). Conclusion: the purity and quantity of mesenchymal stem cells obtained by bone marrow embolus culture are superior to those of previous methods, and the related findings will be helpful for the research of regenerative medicine.
【作者單位】： 中國人民解放軍總醫(yī)院骨科運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)中心;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞生物學(xué)研究室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目(81101342),國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81371945,31070996,31171084) 北京市自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(7132133)
【分類號】：R329.28

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：2229029