本文選題：丙型肝炎病毒 + 嵌合��； 參考：《病毒學(xué)報(bào)》2015年06期

【摘要】：建立穩(wěn)定的嵌合中國河北株包膜蛋白基因的丙型肝炎病毒(HCV)細(xì)胞培養(yǎng)體系,進(jìn)行傳代特性分析。本研究經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄獲得嵌合中國河北株包膜蛋白基因的丙型肝炎病毒(HCV)全長RNA,脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染Huh7.5-CD81細(xì)胞,連續(xù)傳代培養(yǎng),進(jìn)行Real Time RT-PCR、間接免疫熒光、Western blot、再感染試驗(yàn)與感染滴度檢測及序列分析。結(jié)果表明:嵌合重組HCV RNA轉(zhuǎn)染Huh7.5-CD81細(xì)胞后可產(chǎn)生感染性的病毒顆粒(HCVcc);傳代過程中,Western blot可檢測細(xì)胞內(nèi)HCV蛋白的表達(dá);IFA檢測陽性細(xì)胞數(shù)逐漸增多,41d升至高峰,達(dá)80%~90%;Real Time RT-PCR檢測傳代細(xì)胞上清中HCV RNA拷貝數(shù)在104~107拷貝/mL;再感染實(shí)驗(yàn)嵌合HCVcc最高感染滴度為104ffu/mL。序列分析顯示在傳代后期嵌合的HCV包膜基因發(fā)生了適應(yīng)性突變,導(dǎo)致6處氨基酸改變。結(jié)論嵌合中國河北株1b亞型包膜蛋白基因的HCV細(xì)胞培養(yǎng)體系可以產(chǎn)生具有感染性的嵌合HCV病毒顆粒,傳代后感染性增強(qiáng)并且嵌合的HCV包膜基因發(fā)生了適應(yīng)性突變。
[Abstract]:To establish a stable chimeric culture system of hepatitis C virus (HCV) cells containing the envelope protein gene of Hebei strain of China. In this study, hepatitis C virus (HCV) full-length RNAs were obtained by transcription in vitro and transfected into Huh7.5-CD81 cells by liposome method. Real time RT-PCR, indirect immunofluorescence Western blot, reinfection test, detection of infection titer and sequence analysis were performed. The results showed that chimeric recombinant HCV RNA transfected Huh7.5-CD81 cells could produce infectious viral particles (HCVCC), and that the number of positive cells could be detected by Western blot during the passage of Huh7.5-CD81 cells. The copy number of HCV RNA in the supernatant was 104107copies / mL. the highest infection titer of HCVCC was 104ffu / mL. Sequence analysis showed that adaptive mutations occurred in the chimeric HCV envelope gene at the later stage of passage, resulting in 6 amino acid changes. Conclusion the HCV cell culture system combined with subtype 1b envelope protein gene of Hebei strain of China can produce infectious chimeric HCV virus particles. After passage, the infection of the chimeric HCV envelope gene is enhanced and the chimeric HCV envelope gene is mutated adaptively.
【作者單位】： 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)微生物教研室;中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81373229) 傳染病科技重大專項(xiàng)(2013ZX10004601,2013ZX10004609) 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)科技百萬項(xiàng)目(NY2011BW003)
【分類號】：R373.21

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 盧莎;鄧瑤;沈曉玲;管潔;周為民;王岳;阮力;譚文杰;;嵌合中國分離株基因的丙型肝炎病毒(1b/2a)細(xì)胞培養(yǎng)模型的建立[J];生物技術(shù)通訊;2009年04期

【共引文獻(xiàn)】

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 葉鶯;福建省丙型肝炎流行特征及體外細(xì)胞培養(yǎng)模型的構(gòu)建與應(yīng)用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 畢勝利,白憲鶴,叢勉爾,田厚文,孫得貴,H.S.Margolis,劉崇柏;中國人丙型肝炎病毒基因組的一級結(jié)構(gòu)及其變異[J];病毒學(xué)報(bào);1993年02期

2 張柯;譚文杰;鄧瑤;李津;吳小兵;阮力;;三種丙型肝炎包膜感染性假病毒顆粒的制備及初步應(yīng)用研究[J];病毒學(xué)報(bào);2008年04期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐雪榮;郭建軍;;乙肝病毒包膜蛋白結(jié)構(gòu)與功能的研究進(jìn)展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年12期

2 潘亮;;老病新發(fā)看“西尼羅熱”[J];科學(xué)與文化;2004年03期

3 孫佩龍;周建華;呂淑霞;劉新奇;;HIV包膜蛋白Gp120在果蠅Schneider 2細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)純化及初步性質(zhì)鑒定[J];病毒學(xué)報(bào);2010年06期

4 史宣玲 ,曹鳳 ,杜勇,侯利華,季陽 ,王海濤;HCV包膜蛋白E2的表達(dá)及其抗原性的檢測[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2002年01期

5 劉東輝;嵌合構(gòu)建物基因免疫誘導(dǎo)抗HCV核心蛋白和HBV包膜蛋白的細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答[英][J];國外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊;1999年02期

6 何素梅;周見遠(yuǎn);肖建華;聶東宋;;HCV包膜蛋白E2的克隆、表達(dá)與檢測[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;2011年01期

7 王全楚,聶青和;CD81分子與 HCV[J];實(shí)用肝臟病雜志;1999年02期

8 俞民澍,EmersonSU,CoteP,ShapiroM,PurcellRH;人類乙型肝炎樣病毒Pre-S1包膜蛋白的一個(gè)特定區(qū)域?yàn)橐腋尾《拘纬伤匦鑋J];復(fù)旦學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);1998年04期

9 杜剛;江蒙蒙;尹林;王宏萍;周曉明;;HIV-1包膜蛋白gp41優(yōu)勢抗原的構(gòu)建及可溶性表達(dá)[J];生物技術(shù)通訊;2011年06期

10 孫慶國;李永哲;劉鐳;孫國軍;李軍紅;;核包膜蛋白gp210自身抗原基因的克隆、表達(dá)、純化及其臨床應(yīng)用[J];中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2007年10期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉鐳;李永哲;曾常茜;高揚(yáng);朱立平;;核包膜蛋白gp210自身抗原的重組及表達(dá)[A];首屆全國中青年風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2004年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張瑞濤;靶向HIV和AIV包膜蛋白跨膜亞基的病毒進(jìn)入抑制劑研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 肖凌;泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌包膜蛋白對致病性的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

2 李甜;北京市MSM人群HIV-1流行亞型包膜蛋白基因全長擴(kuò)增方法研究[D];首都醫(yī)科大學(xué);2013年

3 王玉霞;HIV-1包膜蛋白gp41胞外近膜區(qū)域的結(jié)構(gòu)研究[D];吉林大學(xué);2011年

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本文編號：2093955