發(fā)布時(shí)間：2018-05-28 18:34

  本文選題：鍶 + 間質(zhì)干細(xì)胞��； 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】： 目的:觀察鍶(Sr)對(duì)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(human bone marrow derived mesenchymal stem cells , hMSCs)增殖與成骨分化的影響并探索其最佳作用濃度;制備不同含鍶量的脫鈣骨基質(zhì)(decalcified bone matrix,DBM),并與hMSCs復(fù)合,成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)后觀察hMSCs在不同含鍶量的脫鈣骨中的成骨效果。 方法: 1、抽取健康成年志愿者骨髓6ml,體外分離、培養(yǎng)原代hMSCs,流式細(xì)胞術(shù)鑒定細(xì)胞表型。取第4代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn),共分為5組,A組為空白對(duì)照,培養(yǎng)液中僅加入骨誘導(dǎo)劑(地塞米松10-8mol/L、抗壞血酸50μg/ml、β-甘油磷酸鈉10mmol/Lol/L),B、C、D、E組培養(yǎng)液在加入骨誘導(dǎo)劑后分別加入3.75×10-3、3.75×10-2、3.75×10-1、3.75mmol/L的氯化鍶(SrCl2)。定期測(cè)定各組hMSCs的增殖情況(MTT法)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性(酶標(biāo)法)和骨鈣素(OCN)含量(放免法),并觀察細(xì)胞茜素紅鈣結(jié)節(jié)染色情況,分析各組鈣結(jié)節(jié)數(shù)量及面積。 2、收集臨床髖關(guān)節(jié)置換術(shù)后廢棄的股骨頭(外傷致股骨頸骨折,股骨頭無(wú)缺血性壞死),切成5mm×5mm×5mm的骨塊,以改良Urist法制作脫鈣骨基質(zhì)(DBM)。將Ⅰ型膠原溶液分別與不同濃度的SrCl2溶液混合,使鍶-膠原溶液中鍶的終濃度分別為:0、3.75×10-3、3.75×10-2、3.75×10-1、3.75mmol/L,分別標(biāo)記為A’、B’、C’、D’、E’組。將制備的DBM浸入鍶-膠原混合溶液中1 h,取出后以真空吸附法使鍶-膠原混合物充分吸附于材料表面,將材料取出,環(huán)氧乙烷滅菌備用。將培養(yǎng)的第4代hMSCs與各組含鍶的DBM復(fù)合培養(yǎng),定期測(cè)定各組hMSCs的殖增情況(MTT法)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性(酶標(biāo)法)和骨鈣素(OCN)含量(放免法)。 結(jié)果: l、隨培養(yǎng)時(shí)間增加,各組細(xì)胞增殖和成骨分化均明顯提高,有顯著差異(P0.01);同時(shí)間點(diǎn)比較中,第7天的細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、第7、14天的ALP檢測(cè)、第14、21天的OCN檢測(cè)以及第21天的鈣結(jié)節(jié)數(shù)量、面積定量檢測(cè),B~E組均優(yōu)于A組并有顯著差異(P0.05)。第7天的MTT檢測(cè)及第14天的ALP檢測(cè),D組均值最高,與A、B、C組有顯著差異( P 0.05),與E組無(wú)顯著差異( P 0.05);第21天的OCN檢測(cè)以及鈣結(jié)節(jié)數(shù)量、面積定量檢測(cè),D組均值最高,與其他4組均有顯著性差異( P0.05)。 2、hMSCs與各組含鍶DBM復(fù)合培養(yǎng)后,隨培養(yǎng)時(shí)間增加,各組細(xì)胞增殖程度明顯提高,有顯著差異(P0.01);同時(shí)間點(diǎn)比較中,MTT:第1、4、7天各組間均無(wú)顯著性差異( P 0.05);ALP:第7、14天各有顯著性差異(P0.01),含鍶組活性強(qiáng)于空白組,含鍶組間差異不明顯( P 0.05);OCN:第7、14、21天,無(wú)顯著性差異( P 0.05);補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)證實(shí),不復(fù)合細(xì)胞的DBM含有不同含量OCN。 結(jié)論: 1、鍶可促進(jìn)hMSCs的增殖及成骨分化,其最佳作用濃度為3.75×10-1mmol/L。 2、所制作的含鍶DBM具有良好的生物相容性,hMSCs與含鍶DBM復(fù)合培養(yǎng)后能夠增殖并成骨分化,含鍶組成骨分化優(yōu)于空白組。因所制作的DBM生物學(xué)性狀差異較大,不能進(jìn)一步證明各組間增殖及成骨分化的差異。
[Abstract]:Objective: to observe the effect of strontium on the proliferation and osteogenic differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells (bone marrow derived mesenchymal stem cells, hMSCs) and to explore the optimal concentration of strontium, to prepare the decalcified bone matrix with different strontium content and to combine it with hMSCs, and to investigate the effect of strontium on the proliferation and osteogenic differentiation of human bone mesenchymal stem cells (BMSCs). The osteogenic effect of hMSCs in decalcified bone with different strontium content was observed after osteogenic induction. Methods: 1. The bone marrow of healthy adult volunteers was extracted from 6 ml, isolated in vitro, cultured with hMSCs, and identified by flow cytometry. The cells of the 4th passage were divided into 5 groups as blank control group. Only dexamethasone 10-8 mol / L, ascorbic acid 50 渭 g / ml, 尾 -glycerophosphate 10 mmol / L Lolp / L ~ (2 +) C ~ (2 +) C ~ (2 +) C ~ (2 +) -C _ (1) C _ (2) O _ (2) was added to the culture medium of group A (3. 75 脳 10 ~ (-3) C ~ (-3) C ~ (-2) ~ (3) 脳 10 ~ (-2) 脳 10 ~ (-2) 脳 10 ~ (-5) 脳 10 ~ (-1) mol 路L ~ (-1) Sr ~ (-1) O _ (-1) Sr _ (1) O _ (2) chloride. The proliferation of hMSCs, the activity of alkaline phosphatase (ALP) and the content of osteocalcin (OCN) were measured regularly. The staining of alizarin red calcium nodules was observed, and the number and area of calcium nodules in each group were analyzed. 2. The abandoned femoral head (femoral neck fracture caused by trauma, no avascular necrosis of femoral head) was collected after clinical hip arthroplasty. The bone mass of 5mm 脳 5mm 脳 5mm was cut to make decalcified bone matrix (DBM) by modified Urist method. The type I collagen solution was mixed with different concentration of SrCl2 solution. The final concentration of strontium in strontium-collagen solution was 3. 0 0. 75 脳 10-3, 3. 75 脳 10-2, 3. 75 脳 10-1 and 3. 75 mmol / L, respectively. The prepared DBM was immersed in strontium collagen mixed solution for 1 hour, then the strontium collagen mixture was fully adsorbed on the surface of the material by vacuum adsorption method. The material was removed and sterilized by ethylene oxide. The fourth generation of hMSCs was co-cultured with strontium containing DBM. The proliferation of hMSCs in each group was measured by MTT assay. The activity of alkaline phosphatase (ALP) and the content of osteocalcin (hMSCs) were determined by radioimmunoassay. Results: L, with the increase of culture time, the proliferation and osteogenic differentiation of the cells in each group increased significantly, and the difference was significant (P 0.01). In the same time point, the cell proliferation test on the 7th day and the ALP detection on the 7th day were observed at the same time point. The number of calcium nodules and the number of calcium nodules in group E on day 14 and 21 were better than those in group A (P 0.05). The mean values of MTT on day 7 and ALP on day 14 were the highest in group D, and significantly different from those in group C (P 0.05, P 0.05, P 0.05), OCN on day 21 and the number of calcium nodules in group D, and the highest in group D by quantitative area detection. There was significant difference between the four groups (P 0.05). (2) after co-culture of hMSCs with strontium containing DBM, the proliferation of cells in each group increased with the increase of culture time. At the same time, there was no significant difference in MTT between groups on the 7th day (P 0.05) and on the 14th day (P 0.05). The activity of strontium group was stronger than that of blank group, but there was no significant difference between strontium group and strontium group (P 0.05 OCN: day 71421, P < 0.05). There was no significant difference (P 0.05). The supplementation experiment confirmed that the DBM contained different contents of DBM. Conclusion: 1.Strontium could promote the proliferation and osteogenic differentiation of hMSCs, and the optimum concentration was 3.75 脳 10 ~ (-1) mmol 路L ~ (-1) 路L ~ (-1). 2Strontium containing DBM has good biocompatibility and can proliferate and differentiate into osteogenesis after co-culture with strontium containing DBM, and the strontium component bone differentiation is better than that of blank group. The biological characteristics of DBM were different, which could not further prove the difference of proliferation and osteogenic differentiation among groups.
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R329

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本文編號(hào)：1947753