本文選題：TLR配體 + 樹(shù)突狀細(xì)胞　； 參考：《浙江大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】： 目的 1.研究尖銳濕疣皮損中Toll樣受體(Toll-like receptor,TLR)各亞型的表達(dá),以明確皮膚人乳頭瘤病毒(HPV)感染高相關(guān)性TLR亞型。 2.探討TLR配體——咪喹莫特、PIC(polyinosinicacid:polycytidylic acid)以及CpG oligonucleotide對(duì)人乳頭瘤病毒抗原肽-HPV11E7CTL表位肽(后簡(jiǎn)稱(chēng)“肽”)在小鼠模型中免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用。 方法 1.將尖銳濕疣病人的病損組織標(biāo)本冰凍切片經(jīng)免疫組化染色檢測(cè)10種TLR亞型的表達(dá)情況,以正常皮膚組織作對(duì)照,比較兩者TLRs表達(dá)譜的差異。 2.提取小鼠骨髓樹(shù)突狀細(xì)胞(BM-DC),體外培養(yǎng)后先與HPV11E7CTL表位肽共孵育,再分別與咪喹莫特或PIC或CpG共孵育,以促進(jìn)DC成熟,流式細(xì)胞儀檢測(cè)孵育后DC表面標(biāo)志改變；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：將刺激成熟的DC分別注射于各組小鼠腹腔,以免疫小鼠,然后在小鼠皮下接種已轉(zhuǎn)染HPV11E7基因的B16腫瘤細(xì)胞；體外實(shí)驗(yàn)：將HPV11E7CTL表位肽和TLR配體處理后的成熟DC與未經(jīng)任何處理的小鼠脾細(xì)胞混合培養(yǎng)；ELISA法檢測(cè)小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液中細(xì)胞因子TNF-α和IFN-γ的濃度；乳酸脫氫酶(LDH)釋放法測(cè)定細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)活性；監(jiān)測(cè)小鼠皮下腫瘤大小以觀察DC免疫后對(duì)腫瘤的預(yù)防作用。 結(jié)果 1.正常表皮角質(zhì)層和顆粒層TLR6、9呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),TLRR1、3、10呈中等度表達(dá),TLR2、4、5、7、8弱表達(dá),棘層和基底層細(xì)胞不表達(dá)或弱表達(dá)TLR；尖銳濕疣皮損表皮中除基底層弱表達(dá)或不表達(dá)TLR外,其余細(xì)胞層TLR1、3、6、9強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),TLR4、8、10中等度表達(dá),TLR2、5、7弱表達(dá)。兩組的真皮層均未見(jiàn)明顯TLR陽(yáng)性細(xì)胞。 2.BM-DC經(jīng)與HPV11E7CTL表位肽及TLR配體共孵育后,反映其成熟度的表面標(biāo)志CD40、CD80、CD86及MHC II (I-Ak)表型均明顯提高；肽加CpG處理組小鼠脾細(xì)胞分泌細(xì)胞因子TNF-α和IFN-γ的水平均為最高,且與對(duì)照組有明顯差異(P0.05)；各處理組小鼠腫瘤生長(zhǎng)速度及脾臟T淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)活性與對(duì)照組未見(jiàn)明顯差異。 結(jié)論 1.尖銳濕疣皮損增生的角質(zhì)形成細(xì)胞中TLR表達(dá)較正常皮膚明顯增高,尤以TLR1、3、6、9亞型較顯著,可能與HPV感染啟動(dòng)機(jī)體抗病毒免疫有關(guān)。 2.TLR激動(dòng)劑尤其是CpG對(duì)小鼠模型中HPV11E7CTL表位肽所致的特異性免疫應(yīng)答具有上調(diào)作用。
[Abstract]:objective
1. the expression of the Toll like receptor (Toll-like receptor, TLR) subtypes in the skin lesions of condyloma acuminata was studied to identify the high correlation TLR subtype of human papillomavirus (HPV) infection.
2. the effects of TLR ligand, imiquimod, PIC (polyinosinicacid:polycytidylic acid) and CpG oligonucleotide on the immune response of human papillomavirus antigenic peptide -HPV11E7CTL epitopes in mouse models, are investigated.
Method
1. the expression of 10 TLR subtypes was detected by immunohistochemical staining in the frozen section of the patients with condyloma acuminata, and the difference of TLRs expression profiles was compared between the normal skin tissues and the normal skin tissues.
2. the mouse bone marrow dendritic cells (BM-DC) were extracted and incubated with HPV11E7CTL epitope, then incubated with imiquimod or PIC or CpG respectively to promote the maturation of DC. The flow cytometry was used to detect the changes of the DC surface markers after incubation. In vivo experiment, the mature DC was injected into the abdominal cavity of mice in each group to immunize mice. B16 tumor cells transfected with HPV11E7 gene were inoculated subcutaneously in mice. In vitro, the mature DC treated with HPV11E7CTL epitope peptide and TLR ligand was mixed with the untreated mouse splenocytes; the concentration of cytokines TNF- A and IFN- in the mouse spleen T lymphocyte culture solution was detected by ELISA; lactate dehydrogenase (LDH) was detected. Release method was used to detect cytotoxic T lymphocyte (CTL) activity, and the size of subcutaneous tumor was monitored to observe the preventive effect of DC on tumor.
Result
1. the normal epidermal cuticle and granular layer TLR6,9 showed strong positive expression, TLRR1,3,10 was moderately expressed, TLR2,4,5,7,8 was weakly expressed, the spinous and basal layer cells did not express or weakly express TLR, and the TLR1,3,6,9 in the epidermis of condyloma acuminata was strongly expressed except for the weak expression of the basal layer or the non expression of TLR, and the TLR4,8,10 medium expression, TLR2. 5,7 was weakly expressed. No obvious TLR positive cells were found in the two groups of dermis.
After incubation with HPV11E7CTL epitopes and TLR ligands, 2.BM-DC reflected the surface marker of its maturity, CD40, CD80, CD86 and MHC II (I-Ak), and the level of TNF- alpha and IFN- gamma secreted by the peptiderma and CpG treatment group was the highest, and was significantly different from that in the irradiated group. The activity of cytotoxic T lymphocyte (CTL) in long - term and splenic T lymphocytes was not significantly different from that in the control group.
conclusion
1. the expression of TLR in keratinocytes of condyloma acuminate lesions was significantly higher than that of normal skin, especially TLR1,3,6,9 subtype, which may be related to the antiviral immunity of HPV infected body.
2.TLR agonist, especially CpG, has an up-regulated effect on the specific immune response induced by HPV11E7CTL epitope peptide in mouse models.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：1947781